细菌的接种与分离技术方法

　　（一）平板划线分离法　　在被检标本中，常混杂有多种细菌，平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种：　　1.连续划线分离法　此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板1/5处密集涂布，然后来回作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。　　2.分区划线分离法　本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区（第一区）内，约占平板1/5面积，再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区，均将接种环灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落。　　（二）斜面接种法　　该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端。　　（三）液体接种法　　多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于培养液中。　　（四）穿刺接种法　　此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用接种针取细菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针沿原路退出。　　（五）倾注平板法　　测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。根据培养基内的菌落数和稀释倍数，即可计算出标本的细菌数。　　（六）涂布接种法　　常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的L型玻璃棒反复涂布几次，使被检物均匀分布在琼脂表面，然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。