聚合酶链式反应（PCR）详细实验步骤

一、准备工作1、实验器具与材料：（1）移液枪：200ul、10ul（2）吸头：200ul、20ul（3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、100ul2、实验器具的处理与准备塑料制品：（包括吸头、EP管等）送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。3、试剂配制和准备：（1） 双蒸水： 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。（2） PCR中所需要的各种试剂二、PCR时注意事项：佩戴一次性手套，同时避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。三、PCR步骤1、准备100ul EP管2、依次在管中加入：（50ul反应体系）ddH2O37.5ul×10mM dNTP1ul×10×PCR buffer5ul×25mM MgCl2（加之前要摇匀）3ul×上游引物1ul×下游引物1ul×模板cDNA1ul3、稍离心4、100℃沸水浴1分钟5、趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作）6、再加入50ul液体石蜡封闭7、10000rmp离心1分钟8、PCR条件94℃ 1min58℃ 50sec72℃ 1min30sec进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。9、10000rmp离心5min10、将下层水相转入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。