细胞划痕(wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法。
细胞划痕(wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法。一、原理在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,在显微镜下观察并拍照记录特定位置细胞的生长迁移能力。通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同,可以判断各组细胞的迁移与修复能力的差别。二、步骤1、准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和 marker 笔在操作前紫外照射 30 min(超净台内)2、流程:1. 培养板划线:先用 marker 笔在 6 孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔 0.5~1 cm 一道,横穿过孔,每孔至少穿过 5 条线;2. 铺细胞:在孔中加入约 5×105 个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满;3. 细胞划线:第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜;4. 洗细胞:用 PBS 洗细胞 3 次,去除划下的细胞,加入无血清培养基;5. 细胞培养及观察:放入 37℃、5% CO2 培养箱,培养;按 0,6,12,24 小时取样,倒置显微镜观察特定位置细胞迁移情况并拍照;6. 结果分析:使用 Image J 软件打开图片后,随机划取 6-8 条水平线,计算细胞间距离的均值。三、注意事项1、铺细胞最好使用 6 孔板,因为 6 孔板可以保证有相当距离的平直划痕,而且因为有 5 条定位线,与划痕相交,这样就有10 个可固定监测点,不作重复,误差也很小。2、如果你连续监测 24 小时,你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移,你可以先用丝裂霉素(1 ug/ml)处理一小时,抑制细胞的分裂,这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外,使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。3、照片拍完之后,可以用 ImageJ 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。4、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。5、应尽量清洗掉散落的细胞,对于一些细胞,低血清浓度下也能重新贴壁并增殖,此外也影响数据美观。技术参数上海喆图科学仪器有限公司 用途概 述 ZCP系列 二氧 化 碳培养箱是通过在 培 养 箱 箱 体 内 模拟 形成类似细胞/组织 在 生 物 体内的生长 环境 ,要求稳定的温度37℃、稳定的CO2水平5%、恒 定的 酸 碱度 (pH 值: 7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度 (95%)来对细胞/组织进 行体 外培养的 一 种仪 器。二 氧 化碳培养箱是开 展免 疫学、肿 瘤 学 、遗 传学 及生物工程所必需的关键设备,广泛 应 用 于 细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养 ,常见 于 细胞动力 学 研 究、哺乳动物细胞分 泌物 的收集、各 种 物 理、化学因 素 的致癌或毒理效应、抗原的 研 究 和 生产、培 养杂 交 瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干 细 胞、组 织 工程 、药物筛选 等 研 究领 域 。 产 品特 点 ※可 上下堆叠放置 二层,便 于 实 验室 空 间 的充分利用 ,可更改 开 门方向; ※进 气 口配备 高 效空 气 过滤器,针 对 粒 径 ≥0.3u m 粒子期 过 滤效率 高 达 99.99%; ※采 用 镜面不锈钢 内 胆,四 角 半 圆 弧 过 渡 设 计 ,搁板支架可以自 由 装 卸,易于清洁;※防倾斜搁板的设计,使 搁板抽 出 一半时仍能保 持 水 平 状态 ,可 有 效防止培养液溢出; ※箱内 标 配 加 湿水盘,湿度 蒸发面积大,易达到相对饱 和 湿度,开关门 后 湿度恢复快 ; ※一 机两用 ,可通过打 开 或 者关 闭C O2浓度控制 ,做二 氧 化碳培养箱 或 恒温培养箱使 用 ;※采 用 门加热控制系统,可有效避免内玻璃门结露现象,以防止其 带 来微生物 污 染 的 可能性; ※可 设 定温度值的单 位 为摄氏度℃或华 氏 度 P ,设定后有摄氏度℃或华氏度 F指 示 灯 亮做 提 醒; ※水 套式箱内水位过 低 时,水位控制器自 动 报 警,同 时 切 断 加 热输出 ,防 止 机 器出现 干 烧 情 况; ※陶瓷 纤 维保温材料使其 具 备良好的绝热性能和密封性能来 确 保二 氧 化碳培 养 箱完美的热稳定 性 ; ※具有浓 度 自整定功能,如果温 度 或者CO 2浓 度 控制不理想,可 启 动温度或者CO2浓度自整 定 功能; ※具有多种查询 功 能,可依次查看 门 温温度,环境温度,紫外 灯 已 经工作的时间以及剩余的工作周期 ; ※当 设 备加热时加 热 指示 灯 亮,加热渐 出功 率 可数字显示并自 动 变频调整加 热 功 率 百分比,智 能节能 ; ※具 有门控功能,门 控触点闭 合 为 开 门 ,断开 为 关门 ,当开 门 时,自动关断 所 有输 出 ,蜂 鸣 器会自动 报 警; ※加热异常温度 偏 高偏低、CO2浓度偏离设定值、CO2气体用完或CO2传感器有异 常 均会 有 错误提醒标志; ※内置无 臭 氧型紫外 杀 菌 灯 可 杀 灭箱体内循环 空 气及 加 湿盘水气中的浮菌,有 效防 止 细胞 培 养期 间 的污染 ;※具 有多种提醒 功 能 ,有 预 约 时 间开启时 预 约指示灯 亮、风机运转 时 风机指示灯 亮、停机 或 者有异常时 报 警 指示灯闪烁、缺水时 水 位报警灯 亮 、当键盘锁定 时 锁定键盘灯 亮 、当 控 制器设定 为 程 序控 制 时 程 序 指 示灯 亮 ; ●红 外传感器 ※具 有自动温度 补 偿 、内 置 大气和零点校准功能、零点漂移及满量 程 漂 移补偿,浓 度 测量精确通,响 应 速度 <20S ,无 氧气依赖性 和 催 化 传感器的中毒现象,寿 命 长 ,准确度高,抗 干 扰性 强,电源和输 出 有过 压和 反 接保护,安全可靠 。※CO2浓度的监测不 受 温度和湿度的影 响 ,在 实验过程中 需 频繁打开箱 门 时 ,可快速 恢 复温度及浓度值,如开 门 30秒 后关门 ,可3分钟内恢复到37℃,10分钟 内 恢复到5%CO2浓度 。 ●紫外杀菌系统 ※紫外 灯 杀菌工作时紫外 灯 指示灯亮,紫外杀 菌灯 可设置常 开 或定时 ,根据设定时间间隔自动开启杀 菌 灯 ; ※消毒 过 程中 门 开 启 则自动停止 消 毒,门 闭合自动 启 动消毒,紫外灯打开 时 间可记录,超 过 规定值自动提示更换紫 外 灯。气 套 式 和 水 套 式两 款都是准确和 可 靠 的 ,主 要 区别 在于 : ●气 套 式加 热 气套式加热是通过遍布箱体气套 层 内的加热器直 接 对内箱体进行加热的 。 优 点 :电 加热加热速度 快 ,温度恢复比水套式 培 养 箱 更迅速,特别 有利 于短期培养以及箱 门 频 繁 开 关取放样的试验 。 ●水 套式加 热 是 通过 一 个独立的 水 套层包围内部的 箱 体来维持温度恒定的,通过加热隔层内的 水 ,水 的热 量 通过辐射再 传递到箱体 内 部 从而 保 持了温度的恒定 。 三 优 点 :水 是 一种很好的绝热物质 ,当 遇 到断 电 的时候 ,水 套式系统就可 以 比较长 时 间的保持培养箱内的温度均 匀 性 以 及 准确性和稳定性 ,有 利于实 验 环 境不 稳定(如对实验有用电限制或 经常 停电 )的用 户 选用。 可选配件 二 氧 化碳 减 压阀- 一¥600 自然加湿湿度 显 示系统 - ¥3000 独 立 限温控制器- ¥600 微 型打印 机 (嵌入式打印机 ) ·二 一 -¥1500 R S485接口及通讯软件 一 ¥600 无线 短 信 报警系统 (不 含 手机及SIM卡 ) -¥2500 零 型号 ZCP-Q50 ZCY-50W ZCP-Q80 ZCP-80W ZCP-Q160ZCP-160W ZCP-Q270ZCP-270W ZCP-Q50T ZCP-50WT ZCP-Q80T ZCP-80WT ZCP-Q160TZCP-160WT ZCP-Q270TZCP-270WT 电源电压 AC220V 50Hz AC220V 50Hz 控温范围 RT(室温)+5~60℃ RT(室温)+5~60℃ CO2控制范围 气套式(液晶显示屏) 气套式(彩色触摸屏) 加热方式 远红外传感器 远红外传感器 恒温波动度 ±0.2℃ ±0.2℃ 温度分辨率 0.1℃ 0.1℃ CO2控制精度 ±0.1%vol ±0.1%vol CO2控制范围 0~20% 0~20% 加热恢复时间 开门30s恢复到37℃<5min 开门30s恢复到37℃<5min 高效过滤器 针对粒径≥0.3um粒子,过滤效率高达99.99% 针对粒径≥0.3um粒子,过滤效率高达99.99% 灭菌方式 UV紫外杀菌(可按时间间隔定时开启) UV紫外杀菌系统(可按时间间隔定时开启) 加湿方式 自然蒸发≥95%RH(可选配数字显示湿度功能) 自然蒸发≥95%RH(可选配数字显示湿度功能) 输入功率 250W 350W 550W 700W 250W 350W 550W 700W 内胆尺寸W*D*H(mm) 345*350*410 400*400*500 500*500*650 600*600*750 345*350*410 400*400*500 500*500*650 600*600*750 外形尺寸W*D*H(mm) 545*465*710 550*525*800 650*620*950 750*715*1030 545*465*710 550*525*800 650*620*950 750*715*1030 公称容积 50L 80L 160L 270L 50L 80L 160L 270L 载物托架 2块 2块 型号 ZCP-Q50RZCP-50WR ZCP-Q80RZCP-80WR ZCP-Q160RZCP-160WR ZCP-Q270RZCP-270WR ZCP-50TR ZCP-50WTR ZCP-80TR ZCP-80WTR ZCP-160TRZCP-160WTR ZCP-270TRZCP-270WTR 电源电压 AC220V 50Hz AC220V 50Hz 控温范围 4-60℃(带制冷) 4-60℃(带制冷) CO2控制范围 水套式(液晶显示屏) 水套式(彩色触摸屏) 加热方式 远红外传感器 远红外传感器 恒温波动度 ±0.1℃ ±0.1℃ 温度分辨率 0.1℃ 0.1℃ CO2控制精度 ±0.1%vol ±0.1%vol CO2控制范围 0~20% 0~20% 加热恢复时间 开门30s恢复到37℃<8min 开门30s恢复到37℃<8min 高效过滤器 针对粒径≥0.3um粒子, 过滤效率高达99.99% 针对粒径≥0.3um粒子, 过滤效率高达99.99% 灭菌方式 UV紫外杀菌(可按时间间隔定时开启) UV紫外杀菌(可按时间间隔定时开启) 加湿方式 自然蒸发≥95%RH(可选配数字显示湿度功能) 自然蒸发≥95%RH(可选配数字显示湿度功能) 输入功率 250W 350W 550W 700W 250W 350W 550W 700W 内胆尺寸W*D*H(mm) 345*350*410 400*400*500 500*500*650 600*600*750 345*350*410 400*400*500 500*500*650 600*600*750 公称容积 50L 80L 160L 270L 50L 80L 160L 270L 载物托架 2块 2块
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