单克隆抗体带电变体中分离分析检测方案(二手分析仪器)

蛋白质是复杂的生物分子，含有无数的带有酸性和碱性侧链官能 团的氨基酸。这些官能团的范围从羧酸类（天冬氨酸和谷氨酸） 和酚类（酪氨酸）到胺类（赖氨酸和组氨酸）和胍类（精氨酸）， 还包括其他中性或疏水性残基。在给定的 pH 条件下，蛋白质将带 有一定电荷（除了等电点处净电荷为 0 外），并且可以与带有相反 电荷的吸附剂发生作用。因此，碱性蛋白质将在阳离子交换色谱 柱上获得保留。 常规的离子交换方法使用增加离子强度（盐浓度）的方法进行洗 脱，从而盐离子与蛋白质和吸附剂进行竞争吸附并最终使蛋白质 分子从色谱柱上洗脱下来。然而，pH 梯度也可用于该类洗脱。对于 阳离子交换色谱，增加 pH 使得蛋白质变成中性或带上负电荷，从 而可以从色谱柱上洗脱下来。 随着更多复杂的蛋白质被用于研究和分析，这种方法开始受到更 多的重视，复杂蛋白质如单克隆抗体，生物制备过程细微的变化 即可能导致带电变体的产生。这些细微差异包括 C 端赖氨酸的丢失、 脱酰胺基作用和唾液酸化作用（使分子酸性更强）、或者形成琥珀 酰亚胺和羧酸侧链的酰胺化（使分子碱性更强）等，如图 1 所示。 本文中我们展示了用于分离单克隆抗体带电变体的 pH 梯度方法， 该分离用传统的缓冲盐梯度洗脱时难以达到分离的效果。