柑橘中果胶含量检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 美析仪器MACYLAB INSTRUMENTTEL-400-616-4686 柑橘中的果胶测定(咔唑比色法) 引言果胶经水解可生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸在强酸中可与咔唑试剂发生缩合反应，生成紫红色化合物，该紫红色化合物的呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，故可通过测定吸光值对果胶含量进行定量。此法适用于各类食品的果胶含量的测定，具有操作简便、快速、准确度高、重现性好等特点。 原理果胶(多聚半乳糖醛酸)，由 d-半乳糖醛酸以a-1，4-糖苷键连接形成的直链.聚合物，部分d-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇酯化而形成甲酯。半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应，形成紫红色化合物，颜色与浓度成正比。反应1-2h后最深。在530nm 波长处测定吸光值。 仪器及试剂 柑橘，分光光度计，天平，研钵，容量瓶(100ml)，具塞刻度管(25ml)， 移液管，三角瓶(1000ml)，水浴锅，计时器，离心机，刻度离心管(50 ml)。1.5g/l咔唑-乙醇溶液：称取0.15g咔唑加入无水乙醇溶解并稀释至100ml100ug/ml 半乳糖醛酸标准液称取10mg 半乳糖醛酸，用蒸馏水溶解，定容至100ml浓硫酸(分析纯)多重蒸馏95%乙醇 0.5mol/L硫酸溶液 实验步骤 标准曲线制作 取8支50mL比色管，各加入12mL浓硫酸，于冰水浴中边冷却边缓缓依次加入浓度为0、10ug/mL、20pg/mL、30p /ml、40p/mL、50ug/mL、60 ug/ mL、70pg/ ml的半乳糖醛酸标准溶液2mL，充分混合后，再置于冰水浴中冷却。然后在沸水浴中准确加热10min， 迅速冷却到室温，各加入0.15%咔唑试剂1mL。充分混合，室温下放置 30min，以半乳糖醛酸含量为0的半乳糖醛酸标准溶液为空白，在530nm 波长下测定吸光值，以半乳糖醛酸含量为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线。 可溶性果胶的提取 称取1g果树组织样品，置于研钵中磨成匀浆，转入到50ml刻度离心管中，加入25mL95%乙醇，在沸水浴中加热 31min， 以去除样品中糖分及其它物质。注意补加乙醇。取出冷却至室温后，在8000r/min 离心 15min，去去上清液。再加95%乙醇，在沸水浴中加热。重复3-5次。然后将沉淀放入原试管中。加入20ml蒸馏水，在50℃水浴中保温 30min， 以溶解果胶。取出冷却至室温，于8000r/min 离心 15min，将上清液移入100ml 容量瓶中，用少量水洗涤沉淀，离心后，-并将上清液移入容量瓶中，加蒸馏水至刻度，此溶液即为可溶性果胶。3.原果胶的提取.经蒸馏水洗涤过的沉淀物仍保留在原刻度离心管中。再向离心管中加入25ml0.5mol/L硫夜溶液，在沸水浴中加热1h 以水解原果胶。取出冷却至室温后，于80000r/min离心15min，将上清液100ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度此为原果胶溶液。 测定 取果胶提取液，用水稀释到适当浓度(含半乳糖醛酸10~70ug/mL)。取2mL稀释液于50mL比色管中，以下按制作标准曲线的方法操作，测定吸光值。从标准曲线上查出半乳糖醛酸的浓度(ug/mL)。 结果计算 X(以半乳糖醛酸计)=c*V*K/m*10**100 式中 X——-样品中果胶的质量分数，%； c——从标准曲线上查得的半乳糖醛酸的浓度， g/mL； V——果胶提取液的总体积， mL； K——提取液稀释倍数； m——-样品质量， g. 注意事项 ①本法的测定结果以半乳糖醛酸表示，不同来源的果胶中半乳糖醛酸的含量不同，如甜橙为77.7%，柠檬为94.2%，柑橘为96%，苹果为72%~75%，若把结果换算为果胶的含量，可按上述关系计算换算系数。 ②样品处理时应充分洗涤去除糖分，减少其存在对咔唑的呈色反应的影响。 ③在测定样液和制作样液标准曲线时，应使用相同规格、同批号的浓硫酸，以保证浓度一致，减少硫酸浓度对咔唑的呈色反应的影响。 仪器参数 V-1500C 可见分光光度计 上海美析仪器有限公司 12 TEL：400-616-4686|http：//www.macylab.com 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 上海美析仪器有限公司 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 果胶(多聚半乳糖醛酸)，由d-半乳糖醛酸以a-1,4-糖苷键连接形成的直链.聚合物,部分d-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇酯化而形成甲酯。半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应，形成紫红色化合物，颜色与浓度成正比。反应1-2h后最深。在530nm波长处测定吸光值。