奶粉中维生素D含量检测方案

其他www.biocomma.cn 食品中维生素D含量检测的固相萃取方法 (Copure@ Silica) 《GB5009.82-2016食品中维生素A、D、E的测定》 一、样品提取 洗脱方式：等度洗脱， A： B=98：2 1、奶粉固体样品处理 流速：1.0 mL/min 准确称取2.0g奶粉置于50 mL离心管中，加入5mL柠檬酸水溶液(200 g/L)，4mL二甲基亚砜，5 mL甲醇，于振荡器中振荡10 min，再加15mL提取液(正己烷：甲基叔丁基醚=1：1， v/v)振荡10 min， 在4000 r/min 下离心5 min， 取上清液；向离心管中重新加10 mL提取液，重复提取一次，合并两次上清液，于50℃下氮吹至近干，加入5 mL正己烷重新溶解，备用。 进样体积：20AL 四、实验结果 表11.25 mg/kg 各基质中维生素D、D，的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 奶粉中维生素D 93.8 95.2 85.6 91.5 5.6 奶粉中维生素D 90.7 91.5 85.4 89.2 3.7 滴剂中维生素D， 90.7 91.5 85.4 89.2 3.7 2、滴剂液体样品 取滴剂胶囊一粒，从中剪开置于50mL离心管中，加入10mL提取液(乙酸乙酯：正己烷=1：9， v/v)于振荡器振荡提取10 min， 转移上清液，向离心管中再加10 mL提取液，重复提取一次，合并两次上清液，备用。 二、SPE 柱净化 (Copure° Silica， 2000 mg/12mL) 活化： Silica 柱使用前用10 mL 乙酸乙酯活化，10 mL正己烷平衡。 上样和洗脱：取备用液加入固相萃取柱中，弃去流出液；取5mL淋洗液(乙酸乙酯：正己烷=5：95)分两次淋洗，弃去流出液；抽干小柱；取20mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，于50℃氮吹至近干(整个上样、洗脱过程控制流速在1 mL/min 内)。 重新溶解：加1mL甲醇重新溶解、混匀，经0.22 Hm滤膜过滤，供上机测试。 三、仪器条件 设备： Waters Alliance 2695 色谱柱： InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm， 5 Hm) 检测器： Waters 2996 DAD 检测器 检测波长：268 nm 流动相：A：甲醇 B：水 图2添加水平为1.25 mg/kg 维生素D检测的液相色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COSIL122000 Copure@ Silica 固相萃取柱，2000 mg/12 mL 20支/盒 SF130-22-NL 尼龙/中13mm/0.22 Hm/有机系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 pm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/47 mm/0.45 Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2 mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-1 2mL 蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 1、奶粉固体样品处理 准确称取 2.0 g 奶粉置于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 柠檬 酸水溶液（200 g/L），4 mL 二甲基亚砜，5 mL 甲醇，于 振荡器中振荡 10 min，再加 15 mL 提取液（正己烷：甲基 叔丁基醚 =1:1，v/v）振荡 10 min，在 4000 r/min 下离心 5 min，取上清液；向离心管中重新加 10 mL 提取液，重复 提取一次，合并两次上清液，于 50℃下氮吹至近干，加入 5 mL 正己烷重新溶解，备用。 2、滴剂液体样品 取滴剂胶囊一粒，从中剪开置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 提取液（乙酸乙酯：正己烷 =1:9，v/v）于振荡器振荡提 取 10 min，转移上清液，向离心管中再加 10 mL 提取液，重 复提取一次，合并两次上清液，备用。 二、SPE 柱净化（Copure® Silica，2000 mg/12 mL） 活化：Silica 柱使用前用 10 mL 乙酸乙酯活化，10 mL 正 己烷平衡。 上样和洗脱：取备用液加入固相萃取柱中，弃去流出液； 取 5 mL 淋洗液（乙酸乙酯：正己烷 =5:95）分两次淋洗， 弃去流出液；抽干小柱；取 20 mL 乙酸乙酯洗脱，收集洗 脱液，于 50℃氮吹至近干（整个上样、洗脱过程控制流速 在 1 mL/min 内）。 重新溶解：加 1 mL 甲醇重新溶解、混匀，经 0.22 µm 滤膜 过滤，供上机测试。 三、仪器条件 设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2996 DAD 检测器 检测波长：268 nm 流动相：A：甲醇 B：水洗脱方式：等度洗脱，A：B=98：2 流速：1.0 mL/min 进样体积：20 µL四、实验结果 表 1 1.25 mg/kg 各基质中维生素 D2、D3 的添加回收结果