其他www.biocomma.cn 食品中维生素D含量检测的固相萃取方法 (Copure@ Silica) 《GB5009.82-2016食品中维生素A、D、E的测定》 一、样品提取 洗脱方式:等度洗脱, A: B=98:2 1、奶粉固体样品处理 流速:1.0 mL/min 准确称取2.0g奶粉置于50 mL离心管中,加入5mL柠檬酸水溶液(200 g/L),4mL二甲基亚砜,5 mL甲醇,于振荡器中振荡10 min,再加15mL提取液(正己烷:甲基叔丁基醚=1:1, v/v)振荡10 min, 在4000 r/min 下离心5 min, 取上清液;向离心管中重新加10 mL提取液,重复提取一次,合并两次上清液,于50℃下氮吹至近干,加入5 mL正己烷重新溶解,备用。 进样体积:20AL 四、实验结果 表11.25 mg/kg 各基质中维生素D、D,的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 奶粉中维生素D 93.8 95.2 85.6 91.5 5.6 奶粉中维生素D 90.7 91.5 85.4 89.2 3.7 滴剂中维生素D, 90.7 91.5 85.4 89.2 3.7 2、滴剂液体样品 取滴剂胶囊一粒,从中剪开置于50mL离心管中,加入10mL提取液(乙酸乙酯:正己烷=1:9, v/v)于振荡器振荡提取10 min, 转移上清液,向离心管中再加10 mL提取液,重复提取一次,合并两次上清液,备用。 二、SPE 柱净化 (Copure° Silica, 2000 mg/12mL) 活化: Silica 柱使用前用10 mL 乙酸乙酯活化,10 mL正己烷平衡。 上样和洗脱:取备用液加入固相萃取柱中,弃去流出液;取5mL淋洗液(乙酸乙酯:正己烷=5:95)分两次淋洗,弃去流出液;抽干小柱;取20mL乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液,于50℃氮吹至近干(整个上样、洗脱过程控制流速在1 mL/min 内)。 重新溶解:加1mL甲醇重新溶解、混匀,经0.22 Hm滤膜过滤,供上机测试。 三、仪器条件 设备: Waters Alliance 2695 色谱柱: InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 Hm) 检测器: Waters 2996 DAD 检测器 检测波长:268 nm 流动相:A:甲醇 B:水 图2添加水平为1.25 mg/kg 维生素D检测的液相色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COSIL122000 Copure@ Silica 固相萃取柱,2000 mg/12 mL 20支/盒 SF130-22-NL 尼龙/中13mm/0.22 Hm/有机系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 pm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/47 mm/0.45 Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2 mL棕色短螺纹广口样品瓶,带书写处 100个/盒 SC2-1 2mL 蓝色聚丙烯盖,预开口,9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置,玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 1、奶粉固体样品处理 准确称取 2.0 g 奶粉置于 50 mL 离心管中,加入 5 mL 柠檬 酸水溶液(200 g/L),4 mL 二甲基亚砜,5 mL 甲醇,于 振荡器中振荡 10 min,再加 15 mL 提取液(正己烷:甲基 叔丁基醚 =1:1,v/v)振荡 10 min,在 4000 r/min 下离心 5 min,取上清液;向离心管中重新加 10 mL 提取液,重复 提取一次,合并两次上清液,于 50℃下氮吹至近干,加入 5 mL 正己烷重新溶解,备用。 2、滴剂液体样品 取滴剂胶囊一粒,从中剪开置于 50 mL 离心管中,加入 10 mL 提取液(乙酸乙酯:正己烷 =1:9,v/v)于振荡器振荡提 取 10 min,转移上清液,向离心管中再加 10 mL 提取液,重 复提取一次,合并两次上清液,备用。 二、SPE 柱净化(Copure® Silica,2000 mg/12 mL) 活化:Silica 柱使用前用 10 mL 乙酸乙酯活化,10 mL 正 己烷平衡。 上样和洗脱:取备用液加入固相萃取柱中,弃去流出液; 取 5 mL 淋洗液(乙酸乙酯:正己烷 =5:95)分两次淋洗, 弃去流出液;抽干小柱;取 20 mL 乙酸乙酯洗脱,收集洗 脱液,于 50℃氮吹至近干(整个上样、洗脱过程控制流速 在 1 mL/min 内)。 重新溶解:加 1 mL 甲醇重新溶解、混匀,经 0.22 µm 滤膜 过滤,供上机测试。 三、仪器条件 设备:Waters Alliance 2695 色谱柱:InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器:Waters 2996 DAD 检测器 检测波长:268 nm 流动相:A:甲醇 B:水洗脱方式:等度洗脱,A:B=98:2 流速:1.0 mL/min 进样体积:20 µL四、实验结果 表 1 1.25 mg/kg 各基质中维生素 D2、D3 的添加回收结果