蜂蜜中四环素类检测方案(样品前处理)

兽残篇www.biocomma.cn-—固相萃取产品应用手册(6版) indd 562021/1/2715：04：51 蜂蜜中四环素类药物残留检测的固相萃取方法 (Copure@HLB) 《GB/T 21317-2007动物源性食品中四环素类药物残留量检测方法》 一、样品提取 表1流动相梯度洗脱程序 称取混匀蜂蜜试样5.00 g(精确到0.01 g)， 置于50mL离心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至50ml， 涡旋混合1 min， 冰水浴超声10 min， 转移至50mL离心管中，冷却至0℃-4℃，5000 r/min 离心10 min(温度低于15℃)，用滤纸过滤待净化。 时间/min A(%) B(%) 4.0 96.0 8.0 30.0 70.0 18.0 35.0 65.0 20.0 4.0 96.0 28.0 4.0 96.0 二、SPE柱净化 (Copure@HLB， 60 mg/3mL) 柱温：室温 活化： HLB柱依次用5mL甲醇和5mL水活化。 流速：1.0 mL/min 上样和洗脱：准确吸取10 mL备用液以1滴/秒的速度过HLB固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用5mL水水5mL甲醇-水(5：95，v/v)淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa以下减压抽干5 min， 最后用10mL甲醇-乙酸乙酯溶液(1：9，v/v)洗脱，收集洗脱液。 进样体积：20儿 四、实验结果 表2添加水平为1.0 mg/kg 蜂蜜中四环素类药物的添加回收结果 重新溶解：洗脱液于40℃氮气吹干，加10 mmol/L三氟乙酸 水溶液1.0 mL溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相色谱 测定。 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 土霉素 80.2 89.4 89.5 86.4 1.9 四环素 85.7 85.5 86.5 85.9 1.2 三、仪器条件 设备： Waters Alliance 2695 色谱柱： XB-C18 (4.6 mm×250 mm， 5 Hm) 检测器： Waters 2487紫外检测器 检测波长：350 nm 流动相： A：乙腈 B： 10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 订购信息 货号 描述 包装 COHLB360 Copure@ HLB固相萃取柱， 60 mg/3 mL 50支/盒 SF130-22-PTFE-HL 聚四氟乙烯针式过滤器，中13 mm/0.22 Hm/水系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 Hm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/中47 mm/0.45 Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 称取混匀蜂蜜试样 5.00 g( 精确到 0.01 g)，置于 50 mL 离心 管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至 50  mL，涡旋混合 1 min，冰水浴超声 10 min，转移至 50 mL 离心 管中，冷却至 0℃ -4℃，5000 r/min 离心 10 min( 温度低于 15℃ )，用滤纸过滤待净化。 二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 上样和洗脱：准确吸取 10 mL 备用液以 1 滴 / 秒的速度过 HLB 固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 - 水 (5:95, v/v) 淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa 以 下减压抽干 5 min，最后用 10 mL 甲醇 - 乙酸乙酯溶液 (1:9,  v/v) 洗脱，收集洗脱液。重新溶解：洗脱液于 40℃氮气吹干，加 10 mmol/L 三氟乙酸 水溶液 1.0 mL 溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相色谱 测定。 三、仪器条件 设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：350 nm 流动相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 流动相梯度洗脱程序