可乐中有机磷农药残留量检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2021-FP002 解决方案 可乐饮料中的有机磷农药残留量的测定 全自动固相萃取；气相色谱；有机磷农药 介绍 农药由于其具有高效、速效、方便、适应性广、经济效益显著等特点而被广泛应用于农产品生产、采后保鲜等过程。长期大量地使用农药，在得到效益的同时，也产生了广泛的副作用。有机磷类农药是使用量较大的农药中的一类，作为有机氯类农药的替代品，具有成本低、药效高、品种多、选择性好、防治范围广，在环境中降解快、残留低等诸多优点，被广泛地应用于世界范围。然而有机磷可以通过多种方式进入人体，消化道的摄入是最为普遍的方式，同时有机磷也可以被皮肤、粘膜、呼吸道所吸收，在有机磷中毒以后使酶不能起催化乙酰胆碱水解的作用，导致组织中能使神经过度兴奋的乙酰胆碱过量蓄积。近年来，频繁爆出饮料中农药超标的问题，这说明对饮料中的农药进行监测同样非常有必要的。而有机磷作为农药中使用量较大的一类，必须建立一套完善的检测方法对饮料中的有机磷进行检测。为此，我们以GB 23200.40-2016为基础，结合睿科全自动前处理设备建立了一套快速、高效、准确的可乐中有机磷的测定方法。该方法可实现自动标准曲线配制和自动固相萃取，L，节约人力成本的同时改善实验结果。 1.仪器、试剂以及耗材 1.1仪器 Raykol MPE 系列高通量真空平行浓缩仪 Raykol Auto EVA 80 高通量全自动平行浓缩仪 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 Raykol AP 200 全自动液体样品处理工作站 Agilent 7890B 气相色谱仪，配备火焰光度检测器 1.2耗材 HLB固相萃取柱 (RayCure HLB， 60 mg/3 mL)，货号：RC-204-36473 1.3试剂 乙酸乙酯(HPLC)、正己烷(HPLC)、甲醇(HPLC)、氯化钠(AR)、无水硫酸钠(AR)；甲醇-水溶液(5+95，V/V)：量取 5mL甲醇与95 mL 水混合。 甲醇-水溶液(10+90，V/V)：量取 10mL 甲醇与90mL 水混合。 氢氧化钠溶液(1mol/L)：称20g氢氧化钠，用水溶解并定容至 500 mL. 标准品：3种有机磷农药标准溶液，，含量≥98.0% 有机磷混合标准中间溶液：：使用 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站的配液功能吸取适量毒死蜱、马拉硫磷、对硫磷标准储备溶液于 1.5mL色谱瓶中，用乙酸乙酯定容至1mL，各种有机磷农药标准溶液的浓度为 500 ug/L。 有机磷混合标准工作液：以500 ug/L 的有机磷混合标准溶液为源液，用乙酸乙酯作定容液，于室温平衡后用 AP200 的直接稀释功能配制成浓度为10、20、30、50、80、100 ug/L的系列标准工作溶液，现用现配，也可根据仪器灵敏度或目标物浓度配制。 图-1 Auto Prep 200 的氯吡脲标准溶液配制方法 3.样品前处理 3.1样品制备 取可乐样品于烧杯中，放置 60 min， 并用玻璃棒搅拌排气。准确称取150g(精确至0.01g)可乐样品，加入 1 mol/L 的氢氧化钠溶液调节溶液 pH值至7左右。将调节至中性的可乐样品转移至500mL 分液漏斗中，加入15g氯化钠和100mL 乙酸乙酯，剧烈振荡 2 min并不时排气，静置10 min 后，取上层有机相，过预先填充的无水硫酸钠柱(在玻璃砂芯漏斗中装入15g左右无水硫酸钠，并用 20mL乙酸乙酯淋洗)，收集于 500mL 圆底烧瓶中。在分液漏斗中分两次加入200mL 乙酸乙酯，每次100 mL， 重复以上提取步骤，合并提取液于40℃水浴下旋转蒸发至3mL~4mL， 转移至15mL 离心管中，用9mL 正己烷分三次洗涤圆底烧瓶，，合并洗涤液于15mL 离心管中，40℃水浴下吹氮至近干。 HLB 固相萃取柱使用前分别用3mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6mL水活化，保持柱体湿润。将5.1中的提取液用 5 mL 10%甲醇水溶液溶解，以2mL/min 速率过 HLB固相萃取柱，弃去流出液，再用10 mL 5%甲醇水溶液润洗离心管并并HLB柱，弃去从 HLB柱流出的润洗液，氮气吹干小柱10 min。用10 mL 乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱液于15mL 离心管中，加入3g无水硫酸钠，振荡3 min， 5000 r/min条件下离心2min， 将溶液转移至 EVA 80 高通量真空平行浓缩仪中，于40℃水浴中吹氮浓缩至近干，用乙酸乙酯定容至1.0 mL， 供 GC-FPD 测定。具体固相萃取方法见图2。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积 时间\min， 1 清洗样品通道 H20 2.8 2 活化 CH3C02C2CH5 有机废液 3 3 1.5 3 活化 CH30H 有机废液 3 6 2.5 4 活化 H20 废水 3 6 2.5 5 上样 有机废液 2 5 3.1 6 清洗样品瓶 5%甲醇水 有机废液 60 10 6.3 7 吹干 10 8 洗脱 CH3C02C2CH5 收集 2 10 5.8 9 气推 收集 30 10 1.1 10 结束 图2 Fotector Plus 可乐中有机磷的固相萃取方法 4.检测条件 4.1气相色谱条件 柱子 DB-1701石英毛细管柱：30m×0.32mm(内径)，膜厚0.25 um 色谱柱温度 90℃(1min)30C/min.210℃ (8 min)10C/min 240℃， postrun： 280℃(5min) 进样口温度 250°C 检测器温度 250°C 载气 氮气，纯度99.999%， 恒压0.071Mpa 进样量 1uL 进样方式 不分流进样， 1.0 min 后打开分流阀，吹扫流量 50 mL/min 检测器 FPD 表-1气相色谱串联质谱检测条件 4.2 MRM 参数 化合物 定量离子对(碰撞能量Ⅴ、 定性离子对(碰撞能量V、 锥孔电压V) 锥孔电压V) 氯吡脲 248.0>129.0(16，20) 248.0>93.0 (34，20) 表-2氯吡脲串联质谱检测参数 5.结果与讨论 为了验证该方法的回收率，本实验向样品(150 g)中加入上述标准品(30uL， 1 mg/L)进行回收验证(n=3)。数据如表2所示：四种目标化合物的加标回收率均在80.6%~90.7%之间，RSD 值控制在5%以内。说明该方法能够很好地运用于可乐中有机磷的检测。 图3 50pg/L的有机磷农药标准色谱图 1：毒死蜱2：：马拉硫磷3：对硫磷 化合物 回收率(%) 回收率(%) 回收率(%) 平均回收率 样品-1 样品-2 样品-3 Average RSD(%) (Compound) Sample-1 Sample-2 Sample-3 Recoveries(%) 毒死蜱 85.6 90.7 88.5 88.3 2.6 马拉硫磷 80.6 84.3 82.4 82.4 1.9 对硫磷 81.7 89.6 90.4 87.2 4.8 表2.可乐中有机磷的加标回收率及 RSD 值(0.2 ug/kg) 6.总结 本文以 GB 23200.40-2016为基础，结合睿科全自动前处理设备建立了一套快速、高效、准确的可乐中有机磷的测定方法。标准曲线的配置使用睿科 AP 200全自动液体样品处理工作站，可实现混标制备、标准曲线制备、样品添加和分液等液体样品处理功能，全程无需人员值守，仪器程序化运行可以有效避免人为误差，保证曲线的精密性和准确性。 睿科 MPE 真空平行浓缩仪为样品处理过程提供了极大的便利，大体积的样品体积浓缩，通过真空、水浴辅助震荡，使得浓缩时间更短，浓缩效果更加稳定。 本方法使用睿科 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪可实现净化过程的自动化，从活化到上样、洗脱一步到位；最多一天能够处理180个样品，高效便捷地完成固相萃取过程。同时搭配睿科 Auto EVA 80 高通量全自动平行浓缩仪进行浓缩，二者的样品架可兼容使用，无需进行样品转移，操作连贯简便，避免样品的损失。有机磷在氮吹浓缩时不可吹干，否则会极大的影响实验效果。而采用 Auto EVA 80 进行氮吹浓缩，19首先氮吹针随着浓缩页面下降 而下降，提高浓缩效率的同时，节约氮气；其次，，可视化的窗口，可以随时随地观察浓缩进度，而保证样品不被过度浓缩。 全自动液体样品处理工 系列高通量真空平行浓 高通量全自动固相萃取仪净化 全自动平行浓缩仪浓缩 作站标曲配制 缩仪浓缩 RayKol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.，Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2021年9月版 热线：箱： info@raykol.com网址：www.raykol.com 热线：址：www.raykol.com邮箱： info@raykol.com 农药由于其具有高效、速效、方便、适应性广、经济效益显著等特点而被广泛应用于农产品生产、采后保鲜等过程。长期大量地使用农药，在得到效益的同时，也产生了广泛的副作用。有机磷类农药是使用量较大的农药中的一类，作为有机氯类农药的替代品，具有成本低、药效高、品种多、选择性好、防治范围广，在环境中降解快、残留低等诸多优点，被广泛地应用于世界范围。然而有机磷可以通过多种方式进入人体，消化道的摄入是最为普遍的方式，同时有机磷也可以被皮肤、粘膜、呼吸道所吸收，在有机磷中毒以后使酶不能起催化乙酰胆碱水解的作用, 导致组织中能使神经过度兴奋的乙酰胆碱过量蓄积。近年来，频繁爆出饮料中农药超标的问题，这说明对饮料中的农药进行监测同样非常有必要的。而有机磷作为农药中使用量较大的一类，必须建立一套完善的检测方法对饮料中的有机磷进行检测。为此，我们以GB 23200.40-2016为基础，结合睿科全自动前处理设备建立了一套快速、高效、准确的可乐中有机磷的测定方法。该方法可实现自动标准曲线配制和自动固相萃取，节约人力成本的同时改善实验结果。关键字：全自动固相萃取；气相色谱；有机磷农药