水中微囊藻毒素检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-AU-W003 解决方案 水中微囊藻毒素的测定 关键词 全自动固相萃取；高校液相色谱-串联质谱；微囊藻毒素 介绍 随着工业化进程的加快，人类在工农业生产过程中，向水体排入大量的含氮、磷的污染物，加速了水体的富营养。水体富营养化的一大表现就是藻类的大量繁殖，而藻类能释放的生物毒素-藻毒素，严重危害人类和其他生物的安全。其中的微囊藻毒素LR是目前已知毒性最强、危害最大的一种淡水蓝藻毒素。它是一种肝毒素、是肝癌的促癌剂，长期饮用此水可能引发肝癌，所以对生活饮用水中的微囊藻毒素进行监测极为重要。 本文依据《GB/T 20466-2006水中微囊藻毒素的测定》采用睿科ASPE Ultra 06全自动固相萃取仪完成水中微囊藻毒素的富集、洗脱和氮吹浓缩，再结合高校液相色谱-串联质谱进行定性定量检测。在0.1mg/L的加标水平下，3种微囊藻毒素的回收率在84.4%-99.6%之间， RSD值小于10%，表明该方法具有操作自动化、准确度和精密度高等优点，适合饮用水和地表水中微囊藻毒素的测定。 1.仪器与耗材 仪器和耗材 睿科 ASPE Ultra 系列全自动固相萃取仪； 睿科 Auto Prep 200 全自动液体处理工作站； Agilent 1290+6470 三重四级杆串联质谱仪； 固相萃取柱：Ci8 (RayCure， 500mg/6mL，货号： RC-204-16004)； 气相色谱柱： HP-5气相色谱柱(30m×0.25mm×0.25um) 试剂 甲醇((HPLC)；三氟乙酸(AR)；水：超纯水，电阻率大于 18.2MQ；20%甲醇水溶液：20mL甲醇与80mL水混合；0.1%三氟乙酸甲醇溶液：取0.1mL三氟乙酸用甲醇定容至100mL； 标准物质：微囊藻毒素-LR，微囊藻毒素-RR，微囊藻毒素-YR纯度不低于95% 2..样品前处理 标准曲线配制 将100 u g/L 的微囊藻毒素标准使用液取出，用50%甲醇水作定容液，于室温平衡后用 AP200 配制成浓度为2ug/L， 5ug/L，10ug/L， 20g/L， 50 ug/L的标准系列，也可根据仪器灵敏度或目标物浓度配制。 图-1 Auto Prep 200 的液体配标程序 样品采集与保存 采集自来水水样时，先打开自来水放水约2min，调节水流量至500mL/min，用采样瓶采集水样，封好采样瓶。样品送到实验室后，加入约40-50mg亚硫酸钠去除余氯(在加酸调pH前必须脱氯)，放于冰箱中4°C保存。样品如果有杂质， 要经过0.45 um 孔径的滤膜过滤，所有样品必须在采集后14天之内进行固相萃取，萃取液装于密闭玻璃瓶，要避光并储存于4℃以下，并在萃取后30天内完成分析，要求每批样品要带一个现场空白。 样品富集与净化 活化：分别用10mL甲醇和 10mL 水以5mL/min的速度活化； 吸附：取1000mL 水样以 10mL/min 的速度通过固相萃取柱； 淋洗：依次用10mL水，，10mL 20%甲醇水溶液淋洗固相萃取柱； 洗脱：用10mL 0.1%三氟乙酸甲醇溶液洗脱固相萃取柱； 浓缩：用氮气在40°C的条件下将10mL洗脱液浓缩至干。 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 活化 甲醇 废溶 5 10 活化 水 废水 5 10 正置上样 废水 10 1020 淋洗 水 废水 10 10 淋洗 20%甲醇水 废溶 10 10 气推 废水 80 20 干燥 氮气 30 1200 清洗注射泵 0.1%三氟乙酸甲醇 5 洗脱 0.1%三氟乙酸甲醇 收集1 1 10 气推 收集1 10 10 浓缩 40 1800 结束 图-2 ASPE Ultra 06 水中微囊藻毒素的固相萃取方法 3.检测条件 色谱条件 色谱柱： Agilent EC-Cis (3.0×50 mm，2.7um)；洗脱梯度：A相：纯水；B相：0.1%甲酸乙腈 表-1梯度洗脱程序 时间(min) A(%) B(%) 0.01 60 40 4 60 40 5 45 45 5.01 0 100 7.5 0 100 7.51 60 40 10 60 40 质谱条件 采集模式 ESI+ 干燥气温度 350℃ 干燥气流量 10L/min 雾化器压力 15psi 毛细管电压 4000V 监测离子参数情况见表 2： 表-23种微囊藻毒素的特征离子参考质谱条件 Compound Name Precursor Ion Product Ion Dwell Fragmentor Collision Energy 微囊藻毒素-LR 995.5 134.8* 110 60 90 212.9 110 60 70 微囊藻毒素-YR 1045.5 135.1* 110 300 90 212.6 110 300 80 微囊藻毒素-RR 519.8 134.8* 110 160 50 102.9 110 160 70 总离子流图 图-3微囊藻毒素色谱图(50ug/L) 4.方法可行性验证 为了验证该方法的回收率，本实验向自来水(1000mL)中加入上述微囊藻毒素的标准品(100uL， 1ug/mL)进行加标回收验证(n=3)。在0.1 pg/L的加标水平下，三种化合物的回收率在84.4%-99.6%之间，相对标准偏差小于10.0%，满足标准要求。 表-3三种微囊藻毒素标准添加(0.1ug/L)回收率 编号 化合物名称 Ri(%) R2(%) R3(%) Avg(%) RSD((%) 1 MCs-LR 99.6 89.2 93.4 94.1 5.2 2 MCs-RR 84.4 91.6 96.4 90.8 6.1 3 MCs-YR 87.8 89.1 97.9 91.6 5.5 采用三重四级杆质谱作为检测器相较于《GB/T20466-2006水中微囊藻毒素的测定》中的纯液相 法具有更高的方法灵敏度和更好的抗干扰能力。 6.总结 本实验采用睿科ASPE Ultra 06全自动固相萃仪进行水样的富集、洗脱和浓缩，整个流程自动完成，无需过多的人工干预，并取得了比较理想的回收率和RSD结果。采用高精度的注射泵来控制活化、 上样、淋洗和洗脱过程的流速，从而避免了手动固相萃取装置无法准确控制流速的缺点，因此确保了整个实验有较好的准确度和精密度。 全自动液体样品处理工作站 标曲配制 全自动固相萃取仪净化 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.，Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2021年8月版 网址：www.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 邮箱： info@raykol.com热线：址：www.raykol.com 随着工业化进程的加快，人类在工农业生产过程中，向水体排入大量的含氮、磷的污染物，加速了水体的富营养。水体富营养化的一大表现就是藻类的大量繁殖，而藻类能释放的生物毒素-藻毒素，严重危害人类和其他生物的安全。其中的微囊藻毒素LR是目前已知毒性强、危害大的一种淡水蓝藻毒素。它是一种肝毒素、是肝癌的促癌剂，长期饮用此水可能引发肝癌，所以对生活饮用水中的微囊藻毒素进行监测极为重要。  本文依据《GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的测定》采用睿科ASPE Ultra 06全自动固相萃取仪完成水中微囊藻毒素的富集、洗脱和氮吹浓缩，再结合高校液相色谱-串联质谱进行定性定量检测。在0.1μg/L的加标水平下，3种微囊藻毒素的回收率在84.4%-99.6%之间，RSD值小于10%，表明该方法具有操作自动化、准确度和精密度高等优点，适合饮用水和地表水中微囊藻毒素的测定。