水质样品中组胺等五种生物胺检测方案

水质组胺等五种生物胺的测定 生物胺是具有生物活性的有机化合物，常存在动植物及食品中。微量生物胺是生物体内的正常活性成分，但当人体摄入过量的生物胺时，会引起头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等不良反应。 本次大曹实验室按照 GB/T21970-2008《水质：组胺等五种生物胺的测定》中项下方法，对组胺等五种生物胺混合标准品及水质样品进行分析。 本方法规定了用苯甲酰氯衍生化-高效液相色谱-紫外检测法测定水中腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的含量方法。 五种生物胺混合标准品分析 为得到五种生物胺的良好分离，我们首先尝试使用3uum小粒径低压力的CAPCELL PAK C18 AQ S3 色谱柱，对组胺等五种生物胺混合标准品进行分析，结果如下图所示，除尸胺峰与其峰后杂质未得到基线分离，其他各峰间均可达到基线分离。 E 注：图中峰顺序1：腐按2：尸胺安3：亚精胺 4： 精胺 55：组胺 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6 mmi.d.×250 mm 流动相： A：0.02 mol/L CH3COONH4 B：CH3CN B% 30%(0min)-75%(5min)-75%(10min)-30%(15min) 流速： 1.0mL/min 柱主温：30℃ 进样量： 20uL 检 测： PDA 254nm 标准品配置： 2mL 10 ug/mL 的混合标准品溶液(溶剂为水) +1 mL 2 mol/L的氢氧化钠溶液+20uL苯甲酰氯，涡旋30s，37℃水浴中振荡，反应时间20 min， 反应期间每间隔5min 涡旋 30 s. 为了改善尸胺峰与其峰后杂质分离，我们尝试对流动相梯度条件进行了优化，结果如下面谱图所示，，组胺等五种生物胺均可与其相邻杂质得到分离度大于 1.5的基线分离结果。 E 12 N 5 4 800 注：图中峰顺序1：腐胺：2：尸胺33：亚精胺4：精胺安 55：组胺 HPLC Conditionss： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6 mm i.d.×250 mm 流动相：A：0.02 mol/LCH3COONH4 B：CH3CN B%30%(0min)-60%(5min)-60%(10min)-30%(15min)-30%(20min) 流 速：1.0 mL/min 柱 温：30℃ 进样量：20)pL 检 测：PDA254nm 标准品配置：2mL10ug/mL的混合标准品溶液友(溶剂为水)l +1 mL 2 mol/L的氢氧化钠溶液+20uL苯甲酰氯，涡旋30s，37℃水浴中振荡，反应时间20min，反应期间每间隔5 min 涡旋 30s。 在上述色谱条件下，我们对水质样品进行了分析，结果下图所示，水质样品中在亚精胺出峰位置处检出保留一致的色谱峰。 Minutes HPLC Conditionss ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3， 4.6 mm i.d.×250 mm 流动相： A：0.02 mol/L CH3COONH4 B：CH3CN B% 30%(0min)-60%(5min)-60%(10min)-30%(15min)-30%(20min) 流 速：1.0 mL/min 柱 温：30 ℃ 进样量：20) uL 检 测：PDA 254nm 水质样品配置：2mL自来水+1 mL 2 mol/L 的氢氧化钠溶液+20 uL苯甲酰氯，涡旋30s，37℃水浴中振荡，反应时间 20 min，反应期间每间隔5 min 涡旋30s。 综上所述，使用 CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6mmi.d.×250 mm 色谱柱，在GB/T21970-2008《水质组胺等五种生物胺的测定》中中项下方法基础之上，i对梯度条件进行优化，得到了组胺等五种生物胺混合标准品及水质样品的良好分析结果。水质样品中检出与亚精胺峰保留一致的色谱峰。 水质 组胺等五种生物胺的测定 生物胺是具有生物活性的有机化合物，常存在动植物及食品中。微量生物胺是生物体内的正常活性成分，但当人体摄入过量的生物胺时，会引起头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等不良反应。本次大曹实验室按照GB/T21970-2008《水质 组胺等五种生物胺的测定》中项下方法，对组胺等五种生物胺混合标准品及水质样品进行分析。本方法规定了用苯甲酰氯衍生化-高效液相色谱-紫外检测法测定水中腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的含量方法。 五种生物胺混合标准品分析为得到五种生物胺的良好分离，我们首先尝试使用3 μm小粒径低压力的CAPCELL PAK C18 AQ S3色谱柱，对组胺等五种生物胺混合标准品进行分析，结果如下图所示，除尸胺峰与其峰后杂质未得到基线分离，其他各峰间均可达到基线分离。注：图中峰顺序 1：腐胺 2：尸胺 3：亚精胺 4：精胺 5：组胺 HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6 mm i.d.×250 mm流动相：A:0.02 mol/L CH3COONH4   B:CH3CNB% 30%(0min)-75%(5min)-75%(10min)-30%(15min)流   速：1.0 mL/min柱   温：30 ℃进样量：20 μL检   测：PDA 254 nm 标准品配置：2 mL 10 μg/mL的混合标准品溶液（溶剂为水）+1 mL 2 mol/L的氢氧化钠溶液+20 μL苯甲酰氯，涡旋30 s，37 ℃水浴中振荡，反应时间20 min，反应期间每间隔5 min涡旋30 s。 为了改善尸胺峰与其峰后杂质分离，我们尝试对流动相梯度条件进行了优化，结果如下面谱图所示，组胺等五种生物胺均可与其相邻杂质得到分离度大于1.5的基线分离结果。注：图中峰顺序 1：腐胺 2：尸胺 3：亚精胺 4：精胺 5：组胺 HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6 mm i.d.×250 mm流动相：A:0.02 mol/L CH3COONH4   B:CH3CNB% 30%(0min)-60%(5min)-60%(10min)-30%(15min)-30%(20min)流   速：1.0 mL/min柱   温：30 ℃进样量：20 μL检   测：PDA 254 nm 标准品配置：2 mL 10 μg/mL的混合标准品溶液（溶剂为水）+1 mL 2 mol/L的氢氧化钠溶液+20 μL苯甲酰氯，涡旋30 s，37 ℃水浴中振荡，反应时间20 min，反应期间每间隔5 min涡旋30 s。 水质样品分析在上述色谱条件下，我们对水质样品进行了分析，结果下图所示，水质样品中在亚精胺出峰位置处检出保留一致的色谱峰。 HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3, 4.6 mm i.d.×250 mm流动相：A:0.02 mol/L CH3COONH4   B:CH3CNB% 30%(0min)-60%(5min)-60%(10min)-30%(15min)-30%(20min)流   速：1.0 mL/min  柱   温：30 ℃进样量：20 μL检   测：PDA 254 nm 水质样品配置：2mL 自来水+1 mL 2 mol/L的氢氧化钠溶液+20 μL苯甲酰氯，涡旋30 s，37 ℃水浴中振荡，反应时间20 min，反应期间每间隔5 min涡旋30 s。 综上所述，使用CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，在GB/T21970-2008《水质 组胺等五种生物胺的测定》中项下方法基础之上，对梯度条件进行优化，得到了组胺等五种生物胺混合标准品及水质样品的良好分析结果。水质样品中检出与亚精胺峰保留一致的色谱峰。