红花样品中羟基红花黄色素A检测方案

2020版《中国药典》红花中羟基红花黄色素A的测定 我们按照20版《中国药典》，通过色谱柱筛选，并尝试在不同柱温下对红花样品进行测试，我们最终得到红花样品的良好分析结果。 2020版药典方法 含量测定 羟基红花黄色素A照高效液相色谱法((通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅硅键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液液(26：2：72)为流动相；检测波长为 403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备耳取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含 0.13mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL， 称定重量，超声处理里(功率300W，频率50kHz) 40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素 A (C27H32016))不得少于1.0%。 由于羟基红花黄色素A 方法中流动相使用0.7%磷酸溶液， pH 较低(约1.4)超过常规 C18 色谱柱 pH使用范围，容易导致固定相水解断裂，影响色谱柱寿命。 因此大曹色谱使用 pH耐受范围1-10的特殊耐强酸型色谱柱 CAPCELL PAK C18ACR S5 4.6mm i.d.×250mm，按照20版《中国药典》方法，对客户提供红花样品进行分析。 20版药典方法测定结果 红花样品分析色谱图 9866 NKAA S1662 寸 二 Minutes 红花样品分析色谱图局部放大图 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 ACR S5；4.6mm i.d.×250mm 流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液 (26：2：72) 流速：1.0mL/min 温度：35℃ 检测： UV403nm 浓度：取样品粉末0.4g， 加入25%甲醇50mL， 超声提取40min，补足重量，过 0.22um滤膜 进样羊： 10uL 如上图所示，样品分析中羟基红花黄色素A保留时间为 11.036min，与前后基质峰均能够实现基线分离，主峰峰形略拖尾，理论塔板数3682，能够满足药典大于3000 要求。 温度验证 由于该方法中未规定柱温，我们分别尝试在25、35、45℃下对红花中的羟基红花黄色素A进行分析。实验结果表明，柱温越高保留时间越短，理论塔板数有明显上升趋势，在45℃柱温下理论塔板数可达到5000左右，但由于该方法中 pH较低，提高柱温对于色谱柱整体寿命可能产生影响，客户可根据实际需要选择合适柱温分析。 另外，我们建议实验完毕后及时使用甲醇水进行冲洗替换流动相，在分析过程中请注意压力变化。 不同柱温分析结果 综上所述，对于红花红品中羟基红花黄色素A的分析，可使用 CAPCELL PAK C18ACR S5 4.6mm i.d.× 250mm 色谱柱完成，理论塔板数满足2020 版药典要求，可以得到稳定良好的结果。 2020版《中国药典》红花中羟基红花黄色素A的测定2020版药典方法含量测定羟基红花黄色素A  照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备  取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含0.13mg的溶液，即得。供试品溶液的制备  取本品粉末（过三号筛）约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A（C27H32O16）不得少于1.0%。 由于羟基红花黄色素A方法中流动相使用0.7%磷酸溶液，pH较低（约1.4），超过常规C18色谱柱pH使用范围，容易导致固定相水解断裂，影响色谱柱寿命。因此大曹色谱使用pH耐受范围1-10的特殊耐强酸型色谱柱CAPCELL PAK C18 ACR S5 4.6mm i.d.× 250mm，按照20版《中国药典》方法，对客户提供红花样品进行分析。 20版药典方法测定结果HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6mm i.d.×250mm流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26:2:72）流  速：1.0 mL / min温  度：35°C检  测：UV 403nm浓  度：取样品粉末0.4g，加入25%甲醇50mL，超声提取40min，补足重量，过0.22µm滤膜进样量：10µL 如上图所示，样品分析中羟基红花黄色素A保留时间为11.036min，与前后基质峰均能够实现基线分离，主峰峰形略拖尾，理论塔板数3682，能够满足药典大于3000要求。 温度验证 由于该方法中未规定柱温，我们分别尝试在25、35、45℃下对红花中的羟基红花黄色素A进行分析。实验结果表明，柱温越高保留时间越短，理论塔板数有明显上升趋势，在45℃柱温下理论塔板数可达到5000左右，但由于该方法中pH较低，提高柱温对于色谱柱整体寿命可能产生影响，客户可根据实际需要选择合适柱温分析。另外，我们建议实验完毕后及时使用甲醇水进行冲洗替换流动相，在分析过程中请注意压力变化。综上所述，对于红花样品中羟基红花黄色素A的分析，可使用CAPCELL PAK C18 ACR S5 4.6mm i.d.× 250mm色谱柱完成，理论塔板数满足2020版药典要求，可以得到稳定良好的结果。