水产品中亚甲基蓝残留量检测方案(其它色谱仪及分离设备)

进出口水产品中亚甲基蓝残留量检测方法 SN/T 1974-2007 适用范围 本标准规定了水产品中亚甲基蓝残留量测定的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于鱼、虾及其制品中亚甲基蓝残留的测定和确证。（本实验样品为龙利鱼） 参考标准：《SN 1974-2007 进出口水产品中亚甲基蓝残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法和高效液相色谱法 》 溶液的配置 对甲苯磺酸溶液（1.0mol/L）：称取4.3g一水对甲苯磺酸，并用水稀释至25mL。 乙酸钠缓冲溶液：（0.1mol/L，pH=4.5）：称取1.64g无水乙酸钠溶解于200mL水中，用冰乙酸调pH至4.5。 20%二甘醇溶液：量取100mL二甘醇和400mL水，混匀。 10%甲醇溶液：量取10mL甲醇和90mL水，混匀。 30%甲醇溶液：量取30mL甲醇和70mL水，混匀。 0.1%甲酸水：量取1mL甲酸，加水定容至1000mL，混匀。 亚甲基蓝标准储备液：称取1mg亚甲基蓝，用30%甲醇溶液定容至10mL，配制成100μg/mL的标准储备液。 亚甲基蓝标准工作液：吸取100μL标准储备液，用30%甲醇溶液定容至10mL，配制成1μg/mL的标准工作液。 提取步骤 样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用 准确称取5 g鱼肉试样（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入5g中性氧化铝，再依次加入1mL对甲苯磺酸溶液、4mL乙酸钠缓冲溶液，涡旋1min。加入8mL乙腈，10000r/min均质2min，4000r/min离心5min，将上清液转移到另一个50mL离心管中，再加入4mL乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。然后在上清液中加入8mL二甘醇溶液，10mL二氯甲烷，涡旋1min，4000r/min离心5min，收集下层有机层于浓缩瓶中，在40℃下减压旋转蒸发至近干，加入6mL乙腈溶解残渣，待净化。 净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® Alumina-N小柱，规格：500mg/3mL。 活化：3mL乙腈，弃去； 上样：待净化液全部上样，收集； 淋洗：2mL乙腈，收集； 洗脱：4mL甲醇，收集； 浓缩：40℃氮吹至近干后用10%甲醇溶液定容至1mL，过0.22μm微孔滤膜，供上机检测。 注意事项 加标水平：5g样品中加入25μL 1μg/mL标准工作液，定容至1mL，因此加标水平为5μg/kg，最终机度数为 0.025μg/mL。 前处理中的6mL乙腈分三次润洗浓缩瓶后进行上样。 本实验标准品溶液用鱼肉基质溶液进行配置。 色谱条件 6.1高效液相色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm，5μm 洗脱程序：梯度洗脱，0min时，甲醇与0.1%甲酸水体积比为10:90；7min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；9min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；12min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90；15min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90。 流速：0.5mL/min 柱温：30℃ 进样量：50μL 检测波长：655nm 色谱图或者加标回收率结果 图1. 亚甲基蓝空白加标0.025μg/mL图谱 表1、出峰情况 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 分离度 塔板数 min mAU*min mAU % (EP) (EP) 亚甲基蓝 8.672 0.1039 1.40 100.00 1.74 n.a. 108040 图2. 鱼肉样品空白图谱 图3. 鱼肉样品加标0.005mg/kg图谱 表2、加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD值（n=2） 亚甲基蓝 0.005mg/kg 103.08% 1.78% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00518-20005 SPE小柱 Welchrom® Alumina-N,500mg/3mL, 50pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-31041 液相分析柱 Ultimate® XB-C18，4.6×150mm， 5μm 00802-02201 针头式过滤器 Welchrom® 进口NY,13mm*0.22μm,100pk 一、适用范围本标准规定了水产品中亚甲基蓝残留量测定的高效液相色谱检测方法。本标准适用于鱼、虾及其制品中亚甲基蓝残留的测定和确证。（本实验样品为龙利鱼）参考标准：《SN 1974-2007 进出口水产品中亚甲基蓝残留量检测方法  液相色谱-质谱/质谱法和高效液相色谱法 》二、提取步骤样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。准确称取5g鱼肉试样（j确至0.01g）于50mL离心管中，加入5g中性氧化铝，再依次加入1mL对甲苯磺酸溶液、4mL乙酸钠缓冲溶液，涡旋1min。加入8mL乙腈，10000r/min均质2min，4000r/min离心5min，将上清液转移到另一个50mL离心管中，再加入4mL乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。然后在上清液中加入8mL二甘醇溶液，10mL二氯甲烷，涡旋1min，4000r/min离心5min，收集下层有机层于浓缩瓶中，在40℃下减压旋转蒸发至近干，加入6mL乙腈溶解残渣，待净化。三、净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® Alumina-N小柱，规格：500mg/3mL。活化：3mL乙腈，弃去；上样：待净化液全部上样，收集；淋洗：2mL乙腈，收集；洗脱：4mL甲醇，收集；浓缩：40℃氮吹至近干后用10%甲醇溶液定容至1mL，过0.22μm微孔滤膜，供上机检测。四、色谱条件高效液相色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm，5μm；洗脱程序：梯度洗脱，0min时，甲醇与0.1%甲酸水体积比为10:90；7min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；9min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；12min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90；15min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90；流速：0.5mL/min；柱温：30℃；进样量：50μL；检测波长：655nm。五、色谱图或者加标回收率结果六、相关产品信息