猪肉中四环素类药物残留量检测方案(其它色谱仪及分离设备)

猪肉中类四环素的测定 适用范围 适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定（该实验选用基质为猪肉）。 参考标准：《GB/T 20764-2006 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》 溶液的配置 标准储备液：各称取土霉素、四环素、金霉素、强力霉素 5mg，用甲醇溶解并定容至10mL，溶度为500 μg/mL，于-18℃储存。 标准工作液：各吸取0.2mL标准储备液，用甲醇溶解并定容至10mL，溶度为10 μg/mL。 淋洗液：量取5mL甲醇与95mL水混合。 流动相：乙腈+甲醇+0.01mol/L草酸溶液（2:1:7）。 磷酸氢二钠溶液：称取28.41g磷酸氢二钠，用水水溶解，定容至1000mL，超声溶解混匀。 柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸，用水水溶解，定容至1000mL，超声溶解混匀。 Mcllvaine缓冲液：将1000mL柠檬酸溶液与625mL磷酸氢二钠溶液混合，（pH=4.0±0.05）。 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液:称取60.5g乙二胺四乙酸二钠加入1625mLMcllvaine缓冲液，超声混匀。 提取步骤 称取试样6g（精确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入20mL 。Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液，涡旋混匀，8000r/min离心5min，吸取上清液于另一离心管中，残渣中加入20mL提取液，重复提取一遍，合并提取液，吸取10mL上清液，待净化。 净化 SPE小柱：Welchrom® BRP规格：500mg/6mL。 活化：5mL甲醇，10mL水，弃去； 上样：全部上样，弃去； 淋洗：5mL淋洗液，弃去； 洗脱：15mL乙酸乙酯； 洗脱液于40℃氮吹除去乙酸乙酯，用流动相加至5mL，待测。 5、注意事项 1） 加标水平：6g样中加入200μL 10μg/mL混合标准工作液，40mL提取液取10mL上样，复溶5mL上机，因此加标水平为0.3mg/kg，最终机度数为 0.1mg/L。 6、色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，4.6×150mm,3μm； 流动相：2-4 流速：0.5mL/min； 柱温：30℃； 进样量：60μL； 波长：350nm。 7、色谱图或者加标回收率结果 图1. 四环素类混标0.1mg/L图谱 表1、出峰情况 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 min mAU*min mAU % EP (USP) 土霉素 5.775 0.270 2.408 37.08 0.98 18589 四环素 6.658 0.257 2.065 35.28 0.98 20538 金霉素 12.836 0.069 0.276 9.51 0.97 15239 强力霉素 18.703 0.132 0.346 18.13 0.98 14166 图2. 猪肉样品空白图谱 图3. 猪肉样加标0.3mg/kg图谱 表2、加标回收率表 名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD %（n=2） 土霉素 0.3 104% 1.62% 四环素 102% 4.46% 金霉素 107% 0.70% 强力霉素 80% 3.38% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00522-20006 SPE小柱 Welchrom® BRP,500mg/6mL,30pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-21041 液相色谱柱 UItimate® XB-C18，4.6×150mm,3μm 00826-O024P250 盐酸土霉素标准品 A2S, CAS No.:2058-46-0,250mg 00826-T156P250 四环素盐酸盐标准品 A2S, CAS No.:64-75-5,250mg 00826-C162P250 金霉素盐酸盐标准品 A2S, CAS No.:64-72-2,250mg 00826-D428P100 盐酸强力霉素(脱氧土霉素盐酸盐，盐酸多西环）标准品 A2S, CAS No.:24390-14-5,100mg 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:上海市松江区明南路85号启迪漕河泾（中山）科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel:400-810-6969E-mail:lingyuyu@welchmat.com 一、适用范围适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定（该实验选用基质为猪肉）。参考标准：《GB/T 20764-2006 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》 二、提取步骤称取试样6g（j确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入20mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液，涡旋混匀，8000r/min离心5min，吸取上清液于另一离心管中，残渣中加入20mL提取液，重复提取一遍，合并提取液，吸取10mL上清液，待净化。 三、净化SPE小柱：Welchrom® BRP规格：500mg/6mL。活化：5mL甲醇，10mL水，弃去；上样：全部上样，弃去；淋洗：5mL淋洗液，弃去；洗脱：15mL乙酸乙酯；洗脱液于40℃氮吹除去乙酸乙酯，用流动相加至5mL，待测。 四、色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，4.6×150mm,3μm；流动相：乙腈-甲醇-0.01mol/L草酸溶液（2:1:7）流速：0.5mL/min；柱温：30℃；进样量：60μL；波长：350nm。 五、色谱图或者加标回收率结果六、相关产品信息