肉类中兽药检测方案(液相色谱仪)

利用 Agilent 1290/6545UHPLC-Q-T0F 系统通过全离子MS/MS分析肉类中的122种兽药 应用简报 作者 摘要 Dan-Hui Dorothy Yang 和 Jerry Zweigenbaum 安捷伦科技有限公司 Wilmington， DE 肉类中存在的兽药(VD)可能在人们食用肉类时构成健康风险；因此，在执法和风险评价过程中通常需要监测 VD 残留。可能的VD有几百种，涵盖化学特性差异极大的多类化合物。这通常需要立足于 LC-MS/MS的先进分析方法和仪器、复杂的工作流程，以及大多繁琐的数据处理。本研究针对肉类中的122种重点 VD 开发出了一种用时12分钟的分析方法。为实施该方法，使用了安捷伦 Q-TOF液质联用仪上的安捷伦全离子 MS/MS， 并结合了安捷伦兽药个人化合物数据库与谱库 (PCDL)测试该方法。以每种药物最大容许浓度的0.5、1和2倍将将部122种VD 加入牛肝、牛肾和牛肉组织中。然后使用 Agilent6545 Q-TOF液用联用仪在全离子数据采集模式下分析这些加标样品。利用 AgilentMassHunter 分子式查找软件检出和确认这些化合物的存在。 PCDL 提供了每种化合物的MS/MS 谱图和保留时间信息，以便通过数据审查过程快速而可靠地过滤出假阳性结果。在所有三种加标浓度下，每种基质中均检出了92%以上的VD。为证明该系统提供定量分析结果的能力，得到了碎牛肉和牛肝低至 ng/g 浓度起的校准曲线。在未采用任何内标进行校正的情况下，85%以上的 VD 具有高于0.99的R2， 因此该方法可用于在一次分析运行中对动物基质中的 VD 进行筛查和定量分析。 饲养食肉用家畜需要以受控方式使用兽药(VD)达到预防疾病或促进快速生长的目的。然而，药物管理策略不当以及对家畜的不合理给药可能会使药物残留于动物的肉及其他器官中，在人食用过程中对其构成健康风险。耐药性是农业中使用抗生素过程中出现的另一个引人关注的问题。因此，肉类及其他食品中的 VD 浓度受到最大残留限量(MRL)或容许浓度的监管，而对各种药物来说，最大残留限量或容许浓度的差异很显著[1-3]。已知畜牧业中采用的VD有几百种，这些药物的类别、化学结构和极性各不相同，难以通过同一个方法进行分析。此外，在复杂基质中对付通常很低的 MRL，这需要灵敏而稳定的分析仪器[4，5]。 通过多类别多残留分析方法已证明 LC/MS技术能够提供高灵敏度和高选择性，还能节省时间、人工和成本[2，6]。然而，使用精确质量的高分辨飞行时间 (TOF)质谱仪能够为用户提供一些额外功能。全谱数据采集可确保采集到样品中所有电离化合物的信号。因此，使用这项技术的监测方案能够无需进行任何方法开发即可用于新兴化合物。此外，无需重新运行样品即可对新分析物进行回顾性数据挖掘。况且， TOF谱图可检出和解析尚不存在分析标准的新型 VD 及代谢产物。 本研究旨在开发一种快速筛查方法以针对120多种经常监测的、跨越多种类别的 VD。所分析的 VD 表是以美国农业部的农业研究局 (USDA-ARS) 和食品安全检验局 (USDA-FSIS)以往所实施的工作为基础[2，7]。使用全离子 MS/MS 采集模式下运行的 AgilentQ-TOF液质用用系统分析牛肉、牛肝和牛肾中的VD。该数据采集模式可同时提供分子离子(低能量通道)和碎片离子(高能量通道)的高分辨率精确质量谱图。 随后采用安捷伦 PCDL 中的 MS/MS 谱图来验证分子离子及相应碎片离子是否与样品中的那些离子相匹配。本研究还包括使用商品化 Agilent QuEChERS 增强型脂质去除产品 EMR-Lipid 净化肉类萃取物。此前的研究已经表明，该方法能够高效而选择性地去除高脂肪食品中的脂质。 通过 ng/g 浓度下生成的碎牛肉和牛肝基质匹配校准曲线， 对整个方法的定量分析能力进行了评估。 实验部分 标准品和试剂 大量的兽药标准品由 USDA-ARS 东部地区研究中心 (Wyndmoor，PA) 以乙腈 (MeCN)、甲醇、水或三者组合配制的溶液形式提供，浓度为 214-1200 mg/L。阿维菌素、伊维菌素、硫尿嘧啶以及β-内酰胺类(阿莫西林、氨苄青霉素、头孢唑啉、去乙酰头孢匹林、氯唑西林、萘夫西林、苯唑西林和青霉素)购自Sigma-Aldrich (St. Louis， MO)。超纯水来自 Millipore (Billerica，MA)系统且>18.2 MQ-cm。乙腈(LC-MS级) 购自VWR International(Radnor， PA)， 甲酸(88%，经二次蒸馏)购自 GFS Chemicals(Powell， OH)。 样品提取 向牛肉、牛脏和牛肾的预混匀样品(各2g)中加标122种VD以及之前选择的两种内标(氟尼辛-d，和磺胺二甲嘧啶-13C，)[2]。在所有三种基质中，加标浓度为 USDA 容许浓度的0.5、1和2倍(x，如表1所示)。使用 Agilent Bond Elut 增强型脂质去除产品EMR-Lipid 进行样品前处理，流程如此前的应用简报所述 (5991-6096CHCN)[8]。将最终萃取物稀释至80/20水/乙腈的比率，在进样至 LC/MS之前储存于2mL聚丙烯自动进样器样品瓶中。以0.5倍、1倍和2倍浓度将加标溶液加入溶剂和空白基质萃取液中(后萃取)以评估仪器方法和分析方法的性能以及基质效应。所有萃取物均储存于-10℃的冷冻冰箱中，并在样品前处理两周之后进行分析。 表1.PCDL 中监测的兽药及其容许浓度 1x容许 1x容许 浓度 (ng/g) 1x容许 仪器分析 该方法使用配有 40 pL定儿环 HiPALS 自动进样器的 Agilent 1290Infinity 超高效液相色谱仪 (UHPLC)。利用 Agilent ZORBAXEclipse Plus C-18 (2.1 ×150 mm， 1.8 pm)色谱柱以及水 +0.1%甲酸 (A)和乙腈+0.1%甲酸(B)的梯度进行分离。安捷伦在线过滤器(部件号5067-4638)安装于自动进样器之后，并且在分析柱之前采用 Agilent ZORBAX Eclipse Plus 保护柱(部件号959757-902)保护色谱柱并延长柱寿命。表2列出了用于本分析的液相色谱条件。图1示出了 80/20水/乙腈中的50 ng/mL VD标准品获得的样品色谱图。 表2. 液相色谱条件 参数 值 仪器 Agilent 1290 Infinity LC 色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C-18， 2.1 ×150 mm， 1.8pm (部件号959759-902) 流动相 A)水+0.1%甲酸 B)乙腈+0.1%甲酸 梯度 时间 (min) B (%) 2 2 11 100 11.1 2 流速 0.5 mL/min 后运行时间 3.0 min 柱温 30°C 进样量 15 pL A 图1. 122种50 ng/g兽药的样品色谱图 该分析使用了正离子模式下运行的 Agilent 6545 精确量量四极杆飞行时间液质联用仪，此系统配备有安捷伦喷射流双电喷雾离子源。质谱仪运行条件详细列于表3中。使用安捷伦调谐溶液(部件号 G1969-85000)在整个质量数范围内对6545 Q-TOF液质联用系统进行调谐。使用 6545 Q-TOF液质联用仪的“群集”调谐功能，在2GHz扩展的动态范围内用易碎裂离子调谐法对仪器的m/z 50-750 质量范围进行调谐。在分析过程中，包括嘌呤 (m/z122.0509)和 HP-921 (m/z 922.0098)的参比离子由质谱仪的参比瓶A被输送至质谱仪中。 参数 值 仪器 Agilent 6545 精确质量数 Q-TOF LC/MS系统 电离模式 采用喷射流的正离子电喷雾电离 仪器模式 2 GHz，扩展的动态范围 仪器调谐范围 采用易碎裂离子(m/z50-750)进行“群集”调谐 质量数范围 m/z 50-1000 干燥气温度 200 °C 干燥气流速 11L/min 鞘气温度 375°C 鞘气流速 11 L/min 雾化器压力 35 psi 碎裂电压 135V 毛细管电压 3500 喷嘴电压 300V 锥孔电压 45 碰撞能量 0、10、40V 全离子 MS/MS 工作流程和数据分析 设计全离子 MS/MS工作流程是为了在低碰撞能量和高碰撞能量通道中同时采集高分辨率质谱数据，其收集原理为：(A)从低碰撞能量 (CE)通道收集假分子离子或母离子数据，以及(B)从高碰撞能量通道收集碎片离子信息。在本实验中将仪器 CE 设置为0V、10V和40V。利用0V设置采集母离子信息，而10V则足以使大多数VD 获得良好的碎片离子信息。·一些分子量较大的VD (如菌素类)需要较高的 CE 才可使母离子碎裂；因此采用40V通道收集第三个通道数据。 使用 Agilent MassHunter 软件(B.06.01版)进行数据采集，而Agilent MassHunter 定性分析软件(B.07.00版)则用于数据分析。将 MassHunter 定性分析软件中的分子式查找功能与数据搜索功能配合使用，以充分利用PCDL 信息。PCDL给予本研究所需的所有VD，以分子式、单同位素精确质量、CAS号、在用于[M+H]+ 离子的0、10、20和40V下所采集的 MS/MS 谱图以及采用开发出来的液相色谱分析方法运行标准品所获得的保留时间。这能够显著提高鉴定的特异性。图2示出了全离子 MS/MS工作流程，包括本研究中用于分析VD 的数据处理过滤器。 结果与讨论 肉类中兽药的鉴定 全离子 MS/MS工作流程用于鉴定母离子质量数，并使用安捷伦PCDL中可利用的谱图数据寻找高碰撞能量通道中的共流出碎片离子。在展示高通量情形下如何查看此类数据之前，图3示出了数据组成部分，这些数据被用来自动来证 MassHunter 定性分析软件中全离子 MS/MS方法的结果。插图 3A显示了从牛肉中鉴定出1x容许浓度新生霉素的质谱图，红括号内的预期同位素丰度和质量间距与实际数据(垂直红色条)相符。质量准确度、同位素质量间距、同位素丰度和保留时间(RT)与 PCDL 的匹配总得分达到了98.41。图3中的插图B为安捷伦 PCDL 中包含的 CE 10V的新生霉素 MS/MS 谱图，图中标注了 [M+H]+母离子(I) 和三个丰度最高的碎片离子(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)。图3C显示了在四个离子的正确RT下，从牛肉样品中测得的实际色谱峰。碎片离子Ⅱ(m/z189.0910)和Ⅲ (m/z 218.1023)是合格的，但S/N<9.0的Ⅳ (m/z 396.1442) 未能落入合格之列(根据数据分析方法所设定白S/N阈值：图2)。在 MassHunter 定性分析软件中通过共流出得分和曲线图评估碎片离子数据。 图2..：安捷伦全离子 MS/MS 数据分析工作流程 图3.A)牛肉中新生霉素的质谱图和同位素质量间距。B)安捷伦 PCDL 中 CE 10 eV 下的新生霉素谱库谱图，其中包括母离子(l)和三个最高丰度碎片(、Ⅲ/和IV)与(C)实际样品数据的对比。化合物得到了可靠鉴定 在图4A中，将牛肉中新生霉素的分子离子峰与碎片离子峰的提取离子色谱图进行了叠加。根据每个碎片离子与洗脱时间范围内经过归一化的参比离子间的强度比值计算其共流出得分(值为0-100，其中100为最高可能得分)，并应用加权因子弱化参比离子峰开始与结束处的贡献。RT 偏移、不同峰宽或不同峰对称性(前沿、拖尾)均对共流出得分有不良影响。图4B显示了牛肉样品中新生霉素的离子共流出曲线图。通过叠加归一化(使碎片离子与参比离子在参比离子的洗脱时间范围内均获得最大强度)后的每个碎片离子与参比离子(LC/MS中的母离子)的色谱图以及在参比 离子的时间范围内对强度比率绘图得到该共流出曲线。在参比离子峰中心得到1或接近1的比率，表明碎片离子具有很强的共流出现象。该曲线为评估碎片离子信号的有效性提供了一种强大而直观的手段。 相关的离子共流出得分也是一种验证软件中匹配结果可靠性的有效途径。此外，可通过设置阈值来过滤出可能的假阳性结果。在该方法中，数据分析需要至少有一个碎片离子得到高于90.0的共流出得分。因此，能够可靠鉴定出此样品中含有图4中的新生霉素。 减少假阳性结果 实际样品中存在的异构体、同质异构化合物、干扰物和共流出基质元素通常意味着仅母离子精确质量的测定结果并非为明确的化合物鉴定结果。上述全离子 MS/MS工作流程是实现这一目标的强大工具。不过，只有与 RT需要相结合功能才最强大。因此，我们使用的兽药 AMRT PCDL 就包括了本研究所述的液相色谱方法的特定 RT。在安捷伦 PCDL 中包括保留时间在内的高分辨碎片离子质谱图的可用性大大降低了假阳性结果的检出率，且无需连续不断地注射分析标准品。 图5展示的是使用安捷伦 VD PCDL中可用的 RT匹配和碎片离子验证来防止产生假阳性结果的示例。在肾萃取物的加标样品中，分别于4.088分钟和6.015分钟处检出了恩诺沙星(一种氟喹诺酮类药物)。与恩诺沙星的 [M+H]+ 离子 (360.1718)相比，两种物质的质量数误差小于 2.0 ppm， 这两种物质甚至在 5.0 ppm的窄质量量差窗口中也被视为检出物。然而，采用 MassHunter定性分析软件中的“碎片离子验证法”选项时，恩诺沙星的四个最高丰度碎片离子均未在6.015分钟处出现峰，而所有离子碎片均在4.088分钟处的峰中检出。 图5. 使用安捷伦全离子工作流程通过碎片离子确认功能鉴定恩诺沙星可能的假阳性结果 如前所述，保留时间也可作为一种有力的定性手段，也可用于通过 PCDL 中记录的数据对结果进行验证。在该方法中，采用包含这些化合物 RT 信息的安捷伦兽药 PCDL 对预计出现于4.23分钟的恩诺沙星峰进行验证。通过在 MassHunter 定性分析软件中利用“质量数和保留时间”功能选择定性离子来实现这一目的， RT设置为±0.2分钟。因此，无需在每次运行时对所有分析标准品进样，这一特点对于包含100多种化合物的样品非常有利。这还意味着其他实验室极其易于采用这种方法和使用与该方法相关联的带保留时间的 PCDL， 此外，运行该方法经济有效且简单直接。 牛肾、牛脏和牛肉萃取物中兽药的高灵敏度检测 如果 VD 在分子质量的容差限值内(<10.0 ppm)匹配， 在信噪比>9.0的情况下存在至少一种共流出碎片离子，并且 RT 处于0.2分钟内，则将该 VD 归类为已检出物质。如果母离子处于10.0 ppm的容差以内但 RT 偏移大于0.2分钟，或未找出碎片离子或离子共流出得分低于90.0，则将化合物视作为得到初步鉴定。图6显示了全部三种基质以及三种加标浓度下的试剂空白的结果。在所有样品中，至少92%的VD得到了可靠鉴定或初步鉴定。在标准品中分别检出了 98% (2x)、96%(1x)和94%(0.5x)的VD。在基质加标样品中，牛肝、牛肉和牛肾中的检出率分别为94%-96%、94%-97%和93%-97%。在全部三个加标浓度下，标准品中可靠检出的VD (通过碎片离子和RT匹配)为88%-90%。类似地，在基质样品中，81%-88%(牛肝)、82%-88%(牛肉)和79%-86%(牛肾)的VD 得到了可靠鉴定。 图6. 在三种不同浓度的试剂空白和基质加标样品中鉴定出的兽药百分比(x：容许浓度) 在所有样品或所有加标浓度的标准品中，仅有两种化合物(头孢匹林和西马特罗)未检出。表4列出了在一些样品中未鉴定出的几种化合物。需要通过一些额外研究来确定这九种化合物能够利用现有方法进行分析。多数情况下(即使不是全部)，可能是由于在加标样品或标准品中这些化合物本身发生了降解，其中一些化合物仅可作为溶液中的混合物形式存在。在两种情况下，从配制加标萃取物和标准品到仪器进样之间均不可避免地存在2周延迟。在另一台安捷伦 Q-TOF 仪器上执行的单独项目中，采用相同方法对所述基质中加标浓度为一半的所有六种正在讨论的β-内酰胺类均可实现可靠检测。若是这样，应采用更新鲜的样品和标准品。计划开展进一步研究的内容为确定所有这九种化合物能否使用上述筛查方法以其一半的容许浓度与其他化合物共同实现检测和鉴定。 在三种基质的每种基质中，约10%的化合物得到了初步鉴定。我们计划重新研究这些化合物中的某些化合物，以通过分析更新鲜的加标样品和标准品考察它们除实现母离子检测外，根据该方法规定的前述要求还能得到全面验证所需的诊断碎片离子。 总之，三种基质中的结果相似，所有化合物在不到15分钟的单次运行中均获得了较高检出率。 B-激动剂 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 B-内酰安 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 B-内酰胺 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 B-内酰安 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 B-内酰安 氨苄青霉素 氨苄青霉素 氨苄青霉素 氨苄青霉素 B-内酰胺 萘夫西林 萘夫西林 B-内洗安 苯唑西林 苯唑西林 所有其他 化合物 类别 牛肾0.5x 牛肾 1.0x 牛肾2.0x 牛肉 0.5x 牛肉1.0x 牛肉 2.0x -激动剂 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 西马特罗 -内酰胺 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 头孢匹林 β-内酰胺 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 氯唑西林 J-内酰胺 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 阿莫西林 β-内酰胺 氨苄青霉素 氨苄青霉素 氨苄青霉素 氨苄青霉素 β-内酰胺 萘夫西林 萘夫西林 萘夫西林 β-内酰胺 苯唑西林 苯唑西林 苯唑西林 其他 玉米赤霉醇 玉米赤霉醇 玉米赤霉醇 硫氧嘧啶类 丙基硫氧嘧啶 丙基硫氧嘧啶 所有其他 化合物 使用 Q-TOF LC/MS对兽药的定量分析 为确定用于VD 开发的全离子 MS/MS 方法中 LC Q-TOF的线性度，针对 EMR-Lipid 流程所萃取的碎牛肉和牛肝样品绘制了113种VD的四点或五点基质匹配校准曲线。浓度范围为2(或10)-100 ng/g。 对复杂基质中大量不同种类分析物进行定量分析通常是很难的，几乎总是需要在萃取和分析运行中使用若干种替代品和内标物来校正多变的离子抑制效应。选择合适的内标取决于多种因素，包 括分析因素和经济因素。为避免偏差，本节提供了未经内标校正的原始数据。为确定定量分析的线性度，计算了碎牛肉和牛肝基质中每种分析物的决定系数(R2)。在碎牛肉和牛肝中分别有超过95%和93%的目标分析物获得高于0.90的R2(其中分别有85%和86%的分析物R2>0.99)。牛肉和牛肝样品中仅有5%和7%的所分析 VD的 R2小于0.90。图7显示了碎牛肉和牛肝中浓度范围为 2-100 ng/g 的异丙硝唑与恩诺沙星的校准曲线。所有校准曲线均采用线性拟合，未进行加权。 图7.碎牛肉和牛肝样品中异丙硝唑(A和B)和恩诺沙星(C和D)的校准曲线，2-100 ng/g 本应用简报证明了 Agilent 6545 Q-TOF液质联用仪凭借其高分辨率高灵敏度，能够用于分析相关基质(包括牛肉、牛肝和牛肾)中的120多种 ng/g级VD。使用简单高效的安捷伦全离子MS/MS工作流程能够在同一分析运行中利用碎片离子进行分析物检测和鉴定。此举可显著减少可能的假阳性结果。安捷伦兽药PCDL库中的精确质量、MS/MS谱图以及特定液相色谱条件下修正的保留时间进一步改善了复杂基质中的化合物鉴定及其稳定性。生成的校准曲线证明了该方法执行定量分析的能力。因此，使用 6545 Q-TOF液质联用仪在单次分析运行中能够为肉类中的VD 提供高灵敏度定性及定量信息。 ( 致谢 ) ( 感谢 USDA-ARS 东部地区研究中心的 Steven Lehotay 为本研究 及应用简报提供兽药溶液和反馈意见。 ) ( 参考文献 ) ( 1. EuropeanCommision， D e cision of 1 2 August 2002 imple-menting Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and t h e i n terpretation o f results， O.J.E.C. L 221， Editor. ( 2002) ) ( 2. M 1 . J.S c hneider， S. J. Lehotay， A. R. Lightfield.“Validation of a streamlined multiclass， multiresidue method for deter- mination of veterinary drug r esidues in bovine muscle by liquid chromatography-tandem mass spectrometry" Analytical and Bioanalytical Chemistry (2014) ) ( 3.F Health Canada. Administrative Maximum Residue Limits (AMRLs) and Maximum Residue Limits (M R Ls) s et byCanada.(2012) ) 4.J. A. Park， et al.“Single-step multiresidue determinationof ten multiclass veterinary drugs in pork， milk， and eggsusing liquid chromatography with tandem mass spectrom-etry"Journal of Separation Science 38(16)，2772-2780(2015) 5.FH. Wei， et al."Development and validation of a multi-residue screening method for veterinary drugs， theirmetabolites and pesticides in meat using liquid chro-matography-tandem mass spectrometry" Food Additivesand Contaminants- Part A Chemistry， Analysis， Control，Exposure and Risk Assessment 32(5)，686-701 (2015) 6..1R. Yamada. et al.“Simultaneous determination of residualveterinary drugs in bovine， porcine， and chicken muscleusing liquid chromatography coupled with electrosprayionization tandem mass spectrometry" Bioscience，Biotechnology and Biochemistry 70(1)，54-65 (2006) 7.DL. Geis-Asteggiante， et al."Structural characterization ofproduct ions by electrospray ionization and quadrupoletime-of-flight mass spectrometry to support regulatoryanalysis of veterinary drug residues in foods" RapidCommunications in Mass Spectrometry 28(10)， 1061-1081(2014) 8.L. Zhao、D. Lucas， 采用LC/MS/MS 进行牛肝中的兽药多残留分析，安捷伦科技公司应用简报，出版号5991-6096(2015) 更多信息 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com. 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年4月8日，中国出版 5991-6651CHCN Agilent Technologies 摘要肉类中存在的兽药(VD) 可能在人们食用肉类时构成健康风险；因此，在执法和风险评价过程中通常需要监测VD 残留。可能的VD 有几百种，涵盖化学特性差异极大的多类化合物。这通常需要立足于LC-MS/MS 的先进分析方法和仪器、复杂的工作流程，以及大多繁琐的数据处理。本研究针对肉类中的122 种重点VD 开发出了一种用时12 分钟的分析方法。为实施该方法，使用了安捷伦Q-TOF 液质联用仪上的安捷伦全离子MS/MS，并结合了安捷伦兽药个人化合物数据库与谱库(PCDL) 测试该方法。以每种药物最大容许浓度的0.5、1 和2 倍将全部122 种VD 加入牛肝、牛肾和牛肉组织中。然后使用Agilent 6545 Q-TOF 液质联用仪在全离子数据采集模式下分析这些加标样品。利用Agilent MassHunter 分子式查找软件检出和确认这些化合物的存在。PCDL 提供了每种化合物的 MS/MS 谱图和保留时间信息，以便通过数据审查过程快速而可靠地过滤出假阳性结果。在所有三种加标浓度下，每种基质中均检出了92% 以上的VD。为证明该系统提供定量分析结果的能力，得到了碎牛肉和牛肝低至ng/g 浓度起的校准曲线。在未采用任何内标进行校正的情况下，85% 以上的VD 具有高于0.99 的R2，因此该方法可用于在一次分析运行中对动物基质中的VD 进行筛查和定量分析。前言饲养食肉用家畜需要以受控方式使用兽药(VD) 达到预防疾病或促进快速生长的目的。然而，药物管理策略不当以及对家畜的不合理给药可能会使药物残留于动物的肉及其他器官中，在人食用过程中对其构成健康风险。耐药性是农业中使用抗生素过程中出现的另一个引人关注的问题。因此，肉类及其他食品中的VD 浓度受到最大残留限量(MRL) 或容许浓度的监管，而对各种药物来说，最大残留限量或容许浓度的差异很显著。已知畜牧业中采用的VD 有几百种，这些药物的类别、化学结构和极性各不相同，难以通过同一个方法进行分析。此外，在复杂基质中对付通常很低的MRL，这需要灵敏而稳定的分析仪器。通过多类别多残留分析方法已证明LC/MS 技术能够提供高灵敏度和高选择性，还能节省时间、人工和成本。然而，使用精确质量的高分辨飞行时间(TOF) 质谱仪能够为用户提供一些额外功能。全谱数据采集可确保采集到样品中所有电离化合物的信号。因此，使用这项技术的监测方案能够无需进行任何方法开发即可用于新兴化合物。此外，无需重新运行样品即可对新分析物进行回顾性数据挖掘。况且，TOF 谱图可检出和解析尚不存在分析标准的新型VD 及代谢产物。本研究旨在开发一种快速筛查方法以针对120 多种经常监测的、跨越多种类别的VD。所分析的VD 表是以美国农业部的农业研究局(USDA-ARS) 和食品安全检验局(USDA-FSIS) 以往所实施的工作为基础。使用全离子MS/MS 采集模式下运行的Agilent Q-TOF 液质联用系统分析牛肉、牛肝和牛肾中的VD。该数据采集模式可同时提供分子离子（低能量通道）和碎片离子（高能量通道）的高分辨率精确质量谱图。随后采用安捷伦PCDL 中的MS/MS 谱图来验证分子离子及相应碎片离子是否与样品中的那些离子相匹配。本研究还包括使用商品化Agilent QuEChERS 增强型脂质去除产品EMR-Lipid 净化肉类萃取物。此前的研究已经表明，该方法能够高效而选择性地去除高脂肪食品中的脂质。通过ng/g 浓度下生成的碎牛肉和牛肝基质匹配校准曲线，对整个方法的定量分析能力进行了评估。结论本应用简报证明了Agilent 6545 Q-TOF 液质联用仪凭借其高分辨率高灵敏度，能够用于分析相关基质（包括牛肉、牛肝和牛肾）中的120 多种ng/g 级VD。使用简单高效的安捷伦全离子MS/MS 工作流程能够在同一分析运行中利用碎片离子进行分析物检测和鉴定。此举可显著减少可能的假阳性结果。安捷伦兽药 PCDL 库中的精确质量、MS/MS 谱图以及特定液相色谱条件下修正的保留时间进一步改善了复杂基质中的化合物鉴定及其稳定性。生成的校准曲线证明了该方法执行定量分析的能力。因此，使用6545 Q-TOF 液质联用仪在单次分析运行中能够为肉类中的 VD 提供高灵敏度定性及定量信息。