唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮 检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-161Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-473 Shimadzu (China) Co.，LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定唾液中苯丙胺等四种苯丙胺类毒品和氯胺酮 LCMSMS-473 摘要：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-40 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用测定唾液中苯丙胺等四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的方法，该方法可在6 min 内完成对目标物的检测。四种苯丙胺类毒品和氯胺酮在 2.0 ng/mL~40.0 ng/mL 浓度范围内线性良好，校准曲线线性相关系数r在0.999以上，且精密度和回收率实验结果均符合标准要求。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的快速检测。 关键词：三重四极杆质谱 唾液 苯丙胺类毒品 氯胺酮 近几年，毒品信息传播多元化，犯罪手段也呈现现代化和高技术化的特点。我国毒品案件数量持续上升，禁毒斗争面临着越来越严峻的形式，新型毒品频现，毒品检测的要求也越来越高。常见的新型毒品有冰毒，氯胺酮等， 吸食毒品会让人变得狂躁不安、具有很强的攻击性，甚至会出现精神恍惚、具有自杀的倾向。 目前，毒品检测生物样本主要有血液、毛发和唾液等。与其他两种检材相比，唾液样品具有易获得、较易净化、可以检测药物及其代谢物的游离态浓度以及通过分析代谢物在唾液中的比率，可以推断药物的摄入时间等特点。当前，检测唾液中四种苯丙胺类毒 品和氯胺酮毒品的前处理方法主要有蛋白沉淀法、液液萃取法等。蛋白沉淀法由于方法可靠、操作简单、成本低，是目前采用最普遍的前处理方法。 本文参照《法庭科学液中苯丙胺等四种苯丙胺类毒品和氯胺酮检验液相色谱-质谱法》标准报批稿，建立了使用岛津超高效液相色谱 LC-40 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用测定唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮残留量的方法。唾液样品经乙腈沉淀蛋白后，离心，取上清液上机测试。此方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的快速检测。 实验部分 1.1仪器 本实验使用超高效液相色谱仪 LC-40 X3与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为 LC-40B X3×2输液泵， SIL-40C X3自动进样器， CTO-40S 柱温箱， CBM-40 系统控制器，LCMS-8045 三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack Velox PFPP (100 mm×2.1 mm l.D.， 2.7 um， SGLC， P/N： 227-32021-03) 流动相：A相-含20mmol/L乙酸胺和 0.1%甲酸的水溶液；B相-乙腈溶液 流速：0.30mL/min 进样体积：1.0uL 洗脱方式：梯度洗脱，初始浓度为B相10%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 1.00 Pumps Pump BConc. 10 1.50 Pumps Pump B Conc. 50 3.50 Pumps Pump B Conc. 50 3.60 Pumps Pump B Conc. 90 4.20 Pumps Pump B Conc. 90 4.30 Pumps Pump B Conc. 10 6.00 Controller Stop 质谱条件 离子源：ESI，正离子模式离子源接口电压： 3.5kV雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10 L/min DL管温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 加热气：空气10 L/min MRM 参数：见表2 碰撞气：氩气 驻留时间： 27 ms 表2 MRM 参数 化合物名称 监测离子对 Q1 pre (V) CE Q3 Pre(V) 甲基苯丙胺 150.0>91.0* -10.0 -20.0 -16.0 150.0>119.1 -10.0 -13.0 -23.0 苯丙胺 136.1>91.0* -28.0 -17.0 -16.0 136.1>119.1 -28.0 -10.0 -18.0 MDA 180.1>105.2* -13.0 -20.0 -21.0 180.1>135.1 -13.0 -20.0 -21.0 MDMA 194.2>163.1* -13.0 -11.0 -29.0 194.2>105.2 -15.0 -25.0 -20.0 氯胺酮 238.1>125.1* -16.0 -30.0 -21.0 238.1>179.1 -11.0 -17.0 -18.0 注：*表示定量离子对 1.3标准溶液的配制 根据标准物质纯度和盐型换算后，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0 mg/mL MA、AM、MDMA、MDA和氯胺酮标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存，有效期12个月。 1.4样品前处理方法 移取唾液检材样品，8000 r/min 离心30 min， 取上清液100 uL于具盖离心管中，加入乙腈400 uL， 振荡15 min， 3000 r/min 离心15 min，用0.22 um 的有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取夜供仪器分析。 结果与讨论 2.1标准样品的 MRM 色谱图 Q150.00>91.05(+) 1.06e5 Q136.10>91.05(+) 3.07e4 RT=2.866 RT=2.727 R1 22.04%(95.81) 3.0e4+1R1 23.10%(104.99) 9.0e4 RT {mir 图 1 基质标准曲线中5ng/mL标准品 MRM 色谱图 2.2线性范围与检出限 取与检材样品等量离心后的空白唾液样品六份，添加苯丙胺类和氯胺酮混合标准物质工作液，使其浓度分别为10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、75 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL， 作为添加样品，与检材样品平行操作。以待测物特征离子峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，外标法绘制标准曲线，如图2所示。根据检出限 MDL=3.3S/N， 计算检出限，所得校准曲线线性关系良好，线性方程及相关系数见表3。 图2 四种苯丙胺类毒品和氯胺酮校准曲线 表 3 标准曲线与检出限信息 化合物 R 线性范围(ng/mL) 检出限(ng/mL) 准确度，% 甲基苯丙胺 0.9990 2.0~40.0 0.075 94.67-101.3 苯丙胺 0.9997 2.0~40.0 0.23 91.31-105.9 MDA 0.9997 2.0~40.0 0.40 97.25-105.4 MDMA 0.9996 2.0~40.0 0.0042 94.96-107.2 氯胺酮 0.9992 2.0~40.0 0.038 95.11-104.82 2.3精密度 对浓度为 2 ng/mL、10 ng/mL 和40 ng/mL的四种苯丙胺类毒品和氯胺酮标准工作液连续测定6次，考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表4所示。结果显示：不同浓度样品中待测物保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.03%~0.13%和0.95%~4.13%之间，仪器精密度良好。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 2ng/mL 10ng/mL 40 ng/mL RSD%(R.T.) RSD% (Area) RSD%(R.T.) RSD% (Area) RSD% (R.T.) RSD% (Area) 甲基苯丙胺 0.04 4.13 0.13 2.02 0.07 1.21 苯丙胺 0.06 2.58 0.12 1.21 0.07 1.80 MDA 0.07 3.79 0.12 4.12 0.09 1.22 MDMA 0.05 1.18 0.13 0.95 0.08 0.95 氯胺酮 0.03 3.44 0.13 1.16 0.07 1.43 2.4回收率 称取空白唾液样品，加入五种化合物标准溶液，使加标浓度为 10 ng/mL。按照1.4样品前处理方法提取净化后，测定四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的加标回收率。空白唾液样品和加标浓度为 10 ng/mL唾液样品 MRM色谱图如图4所示，加标回收率结果见表5。 Q150.00>91.05(+) 2.55e4 Q136.10>91.05(+) 7.20e3 2.5e4- ：sample-1 sample--1 3blank0017.De.blank0016.0e33-2.0e45.0e3 苯丙胺加标1.5e4 甲基苯丙胺加标 4.0e3空白唾液1.0e44- 空白唾液 3.0e2.0e35.0e31.0e3VwWN0.0e0- 0.0e02 2 3空白唾液加标甲基苯丙胺 (10 ng/mL) 空白唾液加标苯丙胺(10ng/mL)Q 180.10>105.20(+) 1.53e3 Q194.20>163.15(+) 1.50e51.6e33sample-13sample-11.4e3blank001 .3 1.4e55blank001：=1.2e3- 1.2e51.0e33 1.0e5 MDA加标MDMA加标8.0e2 空白唾液.8.0ee6.0e22 6.0ee4 空白唾液4.0e22- 4.0ee42.0ee2 2.0e40.0eO- 0.0eC2空白唾液加标 MDA (10 ng/mL) 空白唾液加标 MDMA (10ng/mL)Q238.10>125.10(+) 2.35e4sample-12.0e41.5e 氯胺酮加标1.0e4 空白唾液5.0e30.0e0 3 空白唾液加标氯胺酮(10ng/mL) 图3 空白唾液及加标浓度为 10 ng/mL唾液样品 MRM图谱 表5 四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的加标回收率结果(n=3) 化合物名称 平均回收率% 回收率 (10ng/mL) RSD.% 甲基苯丙胺 109.2 1.51 苯丙胺 61.8 8.84 MDA 70.1 4.33 MDMA 60.2 7.42 氯胺酮 84.9 5.84 结论 本文参照《法庭科学唾液中苯丙胺等四种苯丙胺类毒品和氯胺酮检验液相色谱-质谱法》标准报批稿，建立了使用岛津超高效液相色谱 LC-40 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用测定唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的方法。该方法使用 Shim-pack Velox PFPP色谱柱，可在6 min 内完成对待测目标物的分析。四种苯丙胺类毒品和氯胺酮在2.0~40 ng/mL 浓度范围内线性良好，校准曲线线性相关系数r在0.999 以上，且精密度和回收率实验结果良好。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用 岛津应用云 于唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮残留量的快速分析。 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心 本文参照《法庭科学 唾液中苯丙胺等四种苯丙胺类毒品和氯胺酮检验 液相色谱-质谱法》标准报批稿，建立了使用岛津超高效液相色谱LC-40和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用测定唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮的方法。该方法使用Shim-pack Velox PFPP色谱柱，可在6 min内完成对待测目标物的分析。四种苯丙胺类毒品和氯胺酮在2.0 ~40 ng/mL浓度范围内线性良好，校准曲线线性相关系数r在0.999以上，且精密度和回收率实验结果良好。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于唾液中四种苯丙胺类毒品和氯胺酮残留量的快速分析。