杀菌剂中硫酸链霉素检测方案(液相色谱仪)

Yunnan Chemical TechnologyVol.39，No.3第39卷第3期 ·41·谌 芳等：高效液相色谱法测定72%农用硫酸链霉素2012年第3期 高效液相色谱法测定72%农用硫酸链霉素 谌 芳，陈 萌，熊宝林术 (1.云南省化工产品质量监督检验站，云南昆明650228；2.云南省化工研究院，云南昆明650228) 摘 要： 采用反相高效液相色谱法测定硫酸链霉素，使用C心g柱和紫外可变波长检测器，以已烷磺酸钠-磷酸水溶液(三乙胺调pH=4)为流动相，用外标法对硫酸链霉素进行分析和定量。方法的线性相关系数为0.9997，样品平均回收率100.9%，变异系数为 0.47。 关键词： 硫酸链霉素；高效液相色谱法；测定 中图分类号： 0657.7*2 文献标识码： A 文章编号： 1004-275X(2012)03-0040-03 农用硫酸链霉素属抗生素类农用杀菌剂，对防治黄瓜细菌性角斑病、大白菜软腐病、柑橘树溃疡病、烟草野火病、水稻白叶枯病等均具有较好的防治效果。 农用硫酸链霉素可溶粉剂产品目前没有行业标准，也没有国家标准。本文采用反相高效液相色谱法对硫酸链霉素分析方法进行了探索研究，此方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，为该产品的质量检测提供了很好的依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Agilent 1200 型高效液相色谱仪，具可变波长紫外检测器，Agilent Chemstation 工作站； MET-TLER XS205型十万分之一电子天平；METTLERAB204-S分万分之一电子天平；超声波清洗器(AS5150A)；超纯水系统(Milli-Q)。 链霉素标准品：729单位/mg(中国药品生物制品检定所)，折硫酸链霉素质量分数为91.35%；85%磷酸(分析纯)；已烷磺酸钠(离子对试剂)；三乙胺(分析纯)；新蒸二次蒸馏水；72%农用硫酸链霉素(市售)。 1.2 色谱条件 色谱柱：ZORBAXSB-Cs(4.6×250mm，5 p.m Agilent)；检测波长：200 nm；流动相：称取1.88g的己烷磺酸钠，溶于1L二次蒸馏水中，加5 mL磷酸，用三乙胺调节pH=4.0，再加人100 mL乙青，混合均匀后，用0.45 um 滤膜过滤，超声作用 10 min；流速：1.0ml/min；进样量：5pL；柱温：室温。在上述色谱条件下，硫酸链霉素的保留时间约为6.3 min。 1.3 溶液配制 1.3.1 标样溶液的配制 称取链霉素标样0.1g(准确0.000 02g)，置于100mL容量瓶中，加水90 mL，在超声波清洗器上超声作用5min，使标样全部溶解，冷去至室温，加水定容，摇匀。 1.3.2 试样溶液的配制 称取硫酸链霉素样品0.14g(准确0.0002g)，置于100mL容量瓶中，加水90 mL，在超声波清洗器上超声作用5 min，使样品溶解，冷却至室温，加水定容，摇匀。用0.45 pm 滤膜过滤。 1.4 测定 在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注人数针标样溶液，直至相邻2针硫酸链霉素的响应值相对变化小于1.2%时，按照标未溶液、样品溶液、样品溶液、标羊溶液的顺序进样进行分离测定。72%农用硫酸链霉素样品的高效液相色谱图见图1. ( 收稿：2012-02-06 ) ( 作者简介：谌芳(1965-)，女，云南昆明人，高级工程师，从事化工产品分析检测工作。 ) 图1 72%农用硫酸链霉素高效液相色谱图 Figure 1 HPLC of 72 % streptomycin sulfate 1.5 计算 硫酸链霉素的质量分数X(%)按下式计算： 式中：A一标样溶液中硫酸链霉素峰面积的平均值； A一样品溶液中硫酸链霉素峰面积的平均值； m一硫酸链霉素标样的质量，g； mz一样品的质量，g； p-标样中硫酸链霉素的质量分数，%。 2 结果与讨论 2.1 流动相的选择 在分析过程中为了保证硫酸链霉素及其杂质的完全分离，经过反复试验，确定了以0.01 mol/L的己烷磺酸钠水溶液(1L加5mL磷酸，用三乙胺调节pH=4.0)-乙腈为该试验的流动相，分离效果较好，保留时间适当，可以满足分析要求。 2.2 波长的选择 通过紫外波长扫描，小于 205 nm 波长，硫酸链霉素溶液的吸光度开始逐渐增大，考虑到基线的稳定性，确定硫酸链霉素的检测波长为200 nm。 2.3 方法线性相关性的测定 分别配置0、5、25、45mg/mL5个不同质量浓度的硫酸链霉素标准溶液，按1.2所述色谱操作条件，测定相应的响应值，并以质量浓度为横坐标(x)，响应值为纵坐标(y)做图，得硫酸链霉素线性相关性曲线。其线性方程为y=338.42x，相关系数为0.9997。硫酸链霉素的标准工作曲线见图2。 50 图2 硫酸链霉素的标准工作曲线 Figure 2 Standard working curve of streptomycin sulfate 2.4 精密度的测定 对72%农用硫酸链霉素试样，按1.2所述色谱条件平行测定5次，计算硫酸链霉素的标准偏差和变异系数，结果见表1。 表1 硫酸链霉素精密度测定 Table 1 Precision determination of streptomycin sulfate 序号 质量分数/% 平均值/% 标准偏差 变异系数/% 1 72.49 2 72.14 3 72.11 72.36 0.34 0.47 4 72.17 5 72.90 2.5准确度的测定 在已知含量的硫酸链霉素样品中加入一定量的链霉素标准品，按上述色谱操作条件分析其含量，计算回收率，结果见表2。 表2硫酸链霉素回收率测定 Table2Recoveries determination of streptomycin sulfate 批号 加人量/mg 实测值/mg 回收率/% 平均回收率/% 1 10.54 10.71 101.6 2 11.11 11.08 99.8 2 11.47 11.72 102.2 100.9 4 11.90 12.11 101.8 5 12.50 12.39 99.1 3 结论 试验结果表明：采用高效液相色谱法测定72%农用硫酸链霉素中硫酸链霉素的含量，其准确度和咪密度能满足要求，线性关系良好，具有分 离效果好、简便、快速、准确的优点，是进行产品质量检测较理想的分析方法。 ( 参考文献： ) ( [1] ： 全国农药标准化技术委员会. GB19308-2003 白草 枯水剂[S].北京：中国标准出版社，2003. ) Determination of 72 % Streptomycin Sulfate by HPLCCHEN Fang'， CHEN Meng'，XIONG Bao-lin (1. Chemical Product Supervision & Inspection Station of Yunnan Province， Kunming 650228， China；2. Yunnan Research Institute of Chemical Industry， Kunming 650228，China) Abstract： The streptomycin sulfate was determined by HPLC， with the Cig column， UV-absorbancedetector，sodium 1-heptanesulfonate-Orthophosphoric acid solution (triethylamine regulating pH=4) as mo-bile phase， external standard method for quantitive analysis. The linear coorelation of this method was 0.9997. The average recovery rate was 100.8%. The cofficient of variation was 1.30%. Key words： streptomycin sulfate；HPLC；determination EEEEEEEECCECCECECEEEECECEECCEEEEECECECECCCCCECECECCEECECECEECECECEECCECEEEEEECEESEEECEEEEE (上接第39页) Spectrophotometric Determination of Vanadium with Diantipyryl-( m-hydroxy) phyenylmethane RUAN Qiong， WU Zhang-mei，RUAN Zhao (1. College of Chemistry and Chemical Engineering， Yunnan Normal University， Kunming 650092， China； 2. College of Foreign Language， Yunnan University， Kunming 650091， China) Abstract： The optimum conditions of color reaction of diantipyryl-( m-hydroxy) phenylmethane(DAmHM) with trace V(V) were studied in the presence of Tween-80 and MnⅡ. The maximum absor-bance of the complex is at 510 nm. The apparent molar absorptivity is 2.06×10L· mol·cm. Beerslaw is obeyed in the range of 0~5 jug/25 mL. The method was applied to the determination of trace V(V) inthe samples with satisfactory results. Key words： diantipyryl-(m-hydroxy) phenylmethane (DAmHM) ；vanadium ； spectrophotometry dedededed 滴滴滴滴滴滴 Drdrdr 打扰打扰打扰 采用反相高效液相色谱法测定硫酸链霉索，使用 C18柱和紫外可变波长检测器， 以己烷磺酸钠－磷酸水溶液（三乙胺调 pH =4) 为流动相，用外标法对硫酸链霉素进行分析和定量。 方法的线性相关系数为 0. 9997, 样品平均回收率 100.9%,变异系数为 0.47。