水产品中硝基呋喃类代谢物残留量检测方案(固相萃取仪)

水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定农业部1077号公告-2-2008 适用范围 本标准规定了水产品中呋喃妥因代谢物1-氨基-2内酰脲(AHD)、呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)和呋喃西林代谢氨基脲（SEM）残留量的高效液相色谱测定方法(样品为龙利鱼)。 参考标准：《农业部1077号公告-2-2008水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定》 溶液的配置 乙腈溶液:30mL乙腈与70mL水混合溶解。 5%甲醇溶液：5mL甲醇与95mL水混合溶解。 提取剂：三氯乙酸-甲醇溶液，称取22.7g三氯乙酸溶于250mL水中，加入250mL甲醇混合。 衍生化试剂:吸取100μL邻氯苯甲醛，溶解于5mL冰乙酸和20mL甲醇混合液中。 10mol/L氢氧化钠：称取固体氢氧化钠20g，加水溶解冷却后，定容到50mL。 1mol/L氢氧化钠：称取固体氢氧化钠2g，加水溶解冷却后，定容到50mL。 0.05%庚烷基磺酸钠溶液：称取0.500g庚烷基磺酸钠，加1000mL水溶解。 标准储备液：准确称取AHD、AOZ、SEM各5mg,分别用甲醇定容于50mL容量瓶中，配置成100μg/mL的标准储备液。 标准工作液：将标准储备液分别用甲醇稀释得到10μg/mL的标准工作液。 提取步骤 称取试样5.0g，置于50mL离心管中，加入10mL提取剂，40℃超声30min,6000rpm离心10min,吸取上清液于另一离心管中；重复上述步骤两次，第三次提取剂量为5mL。合并三次提取液。 衍生化 于提取液中，加入0.5mL衍生化试剂混匀后，于40℃超声60min，取出冷却至室温。 萃取 将冷却后的上清液加入10mL水，再用10 mol/L氢氧化钠和1mol/L氢氧化钠调pH到7.0（±0.5）加入15mL乙酸乙酯萃取，4000rpm，离心5min后取出乙酸乙酯层于鸡心瓶中，再加入10mL乙酸乙酯，重复上述步骤两次，合并乙酸乙酯层，于35℃水浴旋转至近干，分两次加入5mL5%甲醇溶液溶解残渣，待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® C18-CN混合柱 规格： 400mg/3mL； 活化：5mL甲醇，5mL水； 上样：将待净化液以1.0mL/min-2.0 mL/min的流速通过小柱，弃去； 淋洗：5mL水,压干，弃去; 洗脱:3mL甲醇，压干，40℃氮吹至干，残留物用2.0mL30%乙腈溶液和4.0mL异辛烷溶解，振荡混匀，6000rpm离心5min，取下层乙腈水层过0.22μm有机微孔滤膜，待测。 注意事项 加标水平：在5.0g样中分别加入40μL10.0μg/mL标准工作液，加标水平0.08mg/kg，机读数为0.2mg/L 色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-CN,4.6×250mm,5μm 流动相：(乙腈+异丙醇+乙酸乙酯)+(冰醋酸+0.05%庚烷基磺酸钠溶液)=（5+10+5)+(0.1+80）=20:80 流速：1.000mL/min 柱温：30℃ 进样量： 20μL 检测波长：280nm 色谱图和加标回收率 图1.AHD、AOZ、SEM 0.2μg/mL标准图谱 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 分离度 塔板数 min mAU*min mAU % EP EP AHD 13.967 0.6456 2.00 30.76 0.92 2.34 12020 AOZ 15.205 0.5935 1.67 28.28 0.89 1.70 12214 SEM 16.105 0.8594 2.35 40.95 0.93 n.a. 12708 图2. 龙利鱼空白样过柱图谱 图3.龙利鱼样加标0.08mg/kg图谱 表1.加标回收率表 名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD % AHD 0.08 90.03 3.23 AOZ 0.08 92.75 1.53 SEM 0.08 94.37 1.75 10、相关产品信息 货号 名称 规格 00555-11049 SPE小柱 Welchrom® C18/CN,400mg/3ml,50pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00205-31043 液相色谱柱 Ultimate®XB-CN,4.6×250mm,5μm 00826-A105P100 AHD（呋喃妥因代谢物）盐酸盐标准品 CAS: 2827-56-7，100mg 00826-A164P010 AOZ（呋喃唑酮代谢物）标准品 CAS: 80-65-9，10mg 00826-S057P100 SEM（呋喃西林代谢物/氨基脲盐酸盐）标准品 CAS: 563-41-7，100mg 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号TeL:400-810-6969 邮编：321000 E-maiL:Lingyuyu@weLchmat.com 适用范围本标准规定了水产品中呋喃妥因代谢物1-氨基-2内酰脲(AHD)、呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)和呋喃西林代谢氨基脲（SEM）残留量的高效液相色谱测定方法(样品为龙利鱼)。 参考标准：《农业部1077号公告-2-2008 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 高效液相色谱法》 SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® C18/CN小柱 规格：400mg/3mL；活化：5mL甲醇，5mL水；上样：将待净化液以1.0mL/min-2.0 mL/min的流速通过小柱，弃去；淋洗：5mL水,压干，弃去;洗脱：3mL甲醇，压干，40℃氮吹至干，残留物用2.0mL30%乙腈溶液和4.0mL异辛烷溶解，振荡混匀，6000rpm离心5min，取下层乙腈水层过0.22μm有机微孔滤膜，待测。 色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® XB-CN,4.6×250mm， 5μm；流动相：(乙腈+异丙醇+乙酸乙酯)+(冰醋酸+0.05%庚烷基磺酸钠溶液)=(5+10+5)+(0.1+80）=20:80；流速：1.000mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；检测波长：280nm。 色谱图或者加标回收率结果相关产品信息