农产品中农药残留检测方案(液质联用仪)

结论 农产品中203种农药多残留正负模式同时检测LC-MS/MS分析方法 农药，通常是指农业上用于防治病虫害、杂草及调节植物生长的化学药剂。农药按用途主要可分为杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂等，按化学结构分， 主要有有机磷、氨基甲酸酯、酰胺类化合物、脲类化合物、醚类类合物、酚类化合物、苯氧羧酸类、脒类、三唑类、杂环类、苯甲酸类等。 随着现代农业的发展，农药使用越来越普遍和频繁。带来高产的农产品的同时，也给环境和人类的健康带来负面的影响。由于抗药性、农药价格和环保健康等因素，农药的使用越来越呈现多种农药联合使用，不同季节轮换使用等新的方式，因此农药检测就不仅只是局限于某种或者某类化合物，而是更广泛的筛查各类农药残留的可能性。在食品安全会议的议题上，农药残留往往是大家最先关注的，某些高附加值的经济作物如茶类更是需要严格监控农药残留的残留状况。近年，消费者越来越重视环境保护，消费者转向关注农药使用与残留量，无农药残留的有机农产品更是受到消费者的青睞。因此法规日趋严格并注重多种农药残留的同时检测。本文参照台湾食品药物管理署TFDA公告之食品中残留农药检验方法一多重残留分析方法(五)建立多重残留农药之检测方法，研究了QSight@210LC-MS/MS系统应用于农产品中203种农药多残留正负模式同时检测LC-MS/MS分析方法。 样品前处理方法 样品采用QuEChERS方法(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)前处理 蔬果类、香辛植物及其他草本植物鲜食 取均质后检体约10g，精确称定，置于离心管中，冷冻后加入含1%醋酸乙腈溶液10mL及50ug/mL内部标准溶液10pL再依序加入陶瓷均质石1颗及萃取用粉剂，盖上离心管盖随即激烈震荡数次，防止盐类结块，再以高速组织研磨震荡均质机于1000rpm震荡或以手激烈震荡1分钟后于15℃3000转离心1分钟。取上清液6mL置于净化用离心管I以高速组织研磨震荡均质机以1000rpm震荡或以手激烈震荡1分钟后，于15C 3000转离心2分钟。取上清液1mL以氮气吹至刚干，残留物以甲醇1mL溶解，混合均匀，以滤膜过后以LC-MS/MS分析。 谷类及干豆类 取磨粉后检体约5g，精确称定，置于离心管中，加入冷藏预冷去离子水10mL，静置20分钟，加入含1%醋酸乙腈溶液10mL及50ug/mL内部标准溶液10pL再依序加入陶瓷均质石1颗及萃取用粉剂盖上离心管盖随即激烈振荡数次，防止盐类结块，再以高速组织研磨振荡均质机于1000rpm振荡或以手激烈振荡1分钟后，于15℃3000转离心1分钟。取上清液6mL置于净化用离心管II以高速组织研磨振荡均质机以1000rpm振荡或以手激烈振荡1分钟后，于15℃3000转离心2分钟。取上清液1mL，以氮气吹至刚干残留物以甲醇1mL溶解，混合均匀，以滤膜过滤后以LC-MS/MS分析。 茶类、蔬果类、香辛植物及其他草本植物(干燥) 取磨粉后检体约2g，精确称定，置于离心管中加入冷藏预冷去离子水10mL静置20分钟，加入含1%醋酸乙腈溶液10mL及50ug/mL内部标准溶液10pL再序序加入陶瓷均质石1颗及萃取用粉剂盖上离心管盖随即激烈振荡数次，防止盐类结块，再以高速组织研磨振荡均质机于1000rpm振荡或以手激烈振荡1分钟后，于15℃3000转离心1分钟。取上清液6mL置于净化用离心管Ⅲ，以高速组织研磨振荡均质机以1000rpm振荡或以手激烈振荡1分钟后，于15℃3000转离心2分钟。取上清液1mL，以氮气吹至刚干残留物以以醇1mL溶解，混合均匀，以滤膜过滤后，以LC-MS/MS分析。 萃取用粉剂：无水硫酸镁4g和无水醋酸钠1g净化粉剂 净化用离心管I：含PSA300mg及无水硫酸镁900mg检液负荷量6mL，适用于水分含量高蔬果类检体。 净化用离心管II：含PSA300mg、C18EC300mg及无水硫酸镁900mg检液负荷量6mL，适用于蜡、油脂及糖类含量高谷类检体。 净化用离心管Ⅲ：含PSA450mg、无水硫酸镁900mg、C18EC300mg及GCB50mg检液负荷量6mL，适用于高色素含量及茶叶类检体。 基质匹配检量线制作 取空白样品，依萃取流程调制未添加内部标准准品化后上清液，分别量取1mL以氮气吹至刚干，分别加入适量甲量、1ug/mL标准溶液及5ug/mL内部标准溶液10uL使体积为1mL，混合均匀，配制浓度如下表： SampleName Conc.(ppb) STD-0.4 0.4 STD-1 1.0 STD-2 2.0 STD-5 5.0 STD-10 10.0 STD-20 20.0 STD-50 50.0 STD-100 100.0 STD-200 200.0 LC-MS/MS仪器方法 液相色谱和质谱参数分别参见表1，2和3(表3详见附录) 表1液相色谱参数 液相色谱仪 PerkinElmer LX50TM系统 色谱柱 C18， 100×2.1mm， 1.6 um 流动相 A：5mM乙酸铵溶液+0.1%甲酸水溶液 B：5mM乙酸安溶液+0.1%甲酸甲醇溶液 梯度洗脱程序 Step Time(min) Flow Rate(mL/min) %A %B Curve 1 Initial 0.3 99 1 2 2.0 0.3 50 50 Linear 3 12.0 0.3 30 70 Linear 4 16.00 0.3 0 100 Linear 5 19.00 0.3 0 100 Linear 6 19.20 0.3 99 1 Linear 7 23 0.3 99 1 Linear 柱温 进样量 表2质谱参数 MS PerkinElmer QSight 210 lonization Mode and ESI Negetive Drying Gas Setting 100 HSID Temperature(C) 200 Nebulizer Gas Setting 200 Electrospray Voltage(V)Pos 5000 Electrospray Voltage(V)Neg -4500 Source Temperature(C) 实验结果 在上述实验条件下得到数种农药化合物的MRM色谱图，见图1。 × 图1 20ng/mL多重农药残留色谱图(部分农药化合物) 田2盘‘7w/8uot「纤身 衫甲秋单和号外提7 Time(min) 图3茶叶样品中添加浓度10ng/mL多重农药的色谱图(部分农药化合物) 公告之食品中残留农药检验方法去多重残留分析方法(五)中进一步增加了的农药的数目(详见详见附录表格各农药参数)，目前新版本中正离子模式检测农药193种，负离子模式10种，图4为ESI负离子模式下10种农药的总离子流色谱图。近来，同一个方法检测的化合物数目越来越多，且在日趋严格的检测法规要求和下，ESI正负模式同时检测也变得越来越重要。PerkinElmer QSight@系列三重四极杆质谱仪具有专利技术UnifieldTM检测器。其超快正负模式切换速度使得检测效率大大提高，，一针进样正负模式同时检测200种以上的农药，从容应对越来越严格的法规和标准。UnifieldTM检测器专利名称： Method and apparatus for detecting positivelycharged and negatively charged ionized particles， 专利号WO2008025135A1、US7728292、CA2661703A1。 图4 ESI负离子模式下10种农药的总离子流色谱图 面对农产品检测越来越多样和复杂的检测样品，三重四极杆质谱的稳定性和抗污染能力对于仪器的使用和维护来说也是非常重要的内容。以待测样品中常见而且非常复杂的茶叶基质为例(见图5)，基质加标浓度20ng/mL连续进样100针，测试QSight的耐脏性能。图6展示了部分农药在100针进样条件下峰面积重现性均小于5%的良好数据。PerkinElmerQSight@系列三重四极杆质谱具有独特的“不怕脏、脏不怕、怕不脏”的硬件设计：1.带有反吹干燥气的双锥孔质谱接口结合离子源主动排放废气泵设计，具有优异的抗污染能力，长时间无需维护离子源；2.HSID热表面诱导去溶剂质谱接口技术，320℃加热的质谱接口使得仪器有效防止样品中的复杂基质污染仪器，长时间运行免于频繁维护；3.层流气离子导向技术， 提高离子传输效率避免频繁的仪器调谐。优异的耐脏基质和污染物的硬件设计，保证满足检测灵敏度要求的同时，最大程度使得仪器免于频繁停机清洗和维护，大大提高了仪器的利用效率。 图5绿茶样品、QuEChERS前处理提取净化后的样品、最终样品实物照片 3-0H carbofuran， CV% (Area) 3.472% acephate acetamiprid CV% (Area) 1.739 mevinphos CV% (Area) 2.697 thiabendazoleCV%(Area) 2.697 PerkinElmer QSight 210°系统完全可以遵从法规满足实验室对于农产品中多重农药残留的日常监测工作。QSight 210°系统具有超快的检测速度和正负切换速度，从容应对日趋严格的检测法规和要求，此外自清洁免维护的硬件设计，可以大大提高仪器的抗污染能力和数据稳定性，为实验室面对复杂基质样品时带来更大方便。 ( 参考文献 ) 台湾食品药物管理署TFDA公告之食品中残留农药检验方法一多重残留分析方法(五)修正草案总说明 附录 表3各农药MRM参数(按待测物字母顺序排序) 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司地址：上海张江高科技园区张衡路1670号邮编：201203电话：021-60645888传真：021-60645999ww.perkinelmer.com.cn ‘胖‘利任张套w/uooz-w/uto 要获取全球办事处的完整列表，请访问http：// www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs版权所有 C PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer 是PerkinElmer， Inc. 的注册商标。其标所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。CHN_ 本文采用PerkinElmer QSight 210®系统建立了遵从法规满足实验室对于农产品中多重农药残留的日常监测工作的方法。QSight 210系统具有超快的检测速度和正负切换速度，从容应对日趋严格的检测法规和要求，此外自清洁免维护的硬件设计，可以大大提高仪器的抗污染能力和数据稳定性，为实验室面对复杂基质样品时带来更大方便。