食品中单辛酸甘油酯检测方案(二手分析仪器)

理化检验-化学分册PTCA(PART B： CHEM. ANAL.)2011年第47卷M11知识与经验 理化检验-化学分册赵娅鸿：气相色谱法测定食品中防腐剂单辛酸甘油酯 气相色谱法测定食品中防腐剂单辛酸甘油酯 赵娅鸿 (山西省食品质量监督检验中心，太原030012) 中图分类号：0657.7 文献标志码：B 文章编号：1001-4020(2011)11-1354-03 目前单辛酸甘油酯作为一种新型的防腐剂剂，它对细菌、霉菌、酵母均有抑制作用，较之传统防腐剂苯甲酸钾(钠)、山梨酸钾(钠)、丙酸盐、富马酸二甲酯，具有效果好、价格低、用量少的综合优势，且广谱、高效、无毒，对人和生物、生存环境没有破坏和副作用，在人体和动物体内不积累、无残留成分，最终代谢产物是水和二氧化碳，适应性好，在食品加工过程中使用越来越广泛。 国家标准 GB 2760-2011规定其作为一种防腐剂的允许使用范围[2]，还规定其在糕点、生湿面制品、焙烤食品馅料及表面用挂浆(仅限豆馅)的最大使用量为1g·kg，肉灌肠类最大使用量为0.5g·kg。我国目前还没有其检验方法，造成对上述食品的检验项目缺项，产品结论的判定有很大的风险。因此，为了保证食品质量安全，规范市场，建立食品中防腐剂单辛酸甘油酯残留量检测方法的研究具有重要的意义。 本工作建立了气相色谱法测定食品中单辛酸甘油酯的方法，不需对样品进行衍生化处理，直接用无水乙醇提取后进行检测。 试验部分 1.1 仪器与试剂 安捷伦7890A相相色谱仪，配氢化焰离子化检测器(FID)，ELITIST 离心机，IKA 匀浆机，GD-2B组织捣碎机。 单辛酸甘油酯标准溶液：称取单辛酸甘油酯标准品(纯度不小于99%)0.100 0 g，用乙醇(60+40)溶液溶解并定容至100 mL，配制成1.000gL-标准储备溶液。使用时用无水乙醇逐级稀释至 ( 收稿日期：20 10-12 - 09 ) ( 基金项目：国家质检总局科技计划项目(2009 QK 05 7 ) ) 所需浓度。 无水乙醇为分析纯。 1.2 色谱条件 HP-5(5%苯基聚甲基硅氧烷)石英弹性毛细管柱(0.32mm×30 m，0.25um)；进样口温度300℃，检测器温度300℃，分流比5比1，进样量2pL；载气为高纯氮气(纯度不小于99.995%)，流量1 mL·min-，尾吹气流量25 mL·min。升温程序：初始温度100℃，保持1 min，以 20℃·min速率升温至250℃，保持时间为3 min。 1.3 测定方法 糕点、肉灌肠类试样经组织捣碎机捣碎混匀后备用，豆馅类、生湿面制品类试样直接使用。称取事先均匀好的试样5.00g至50mL烧杯中，加入无水乙醇20 mL，在匀浆机中匀浆1 min 后，转移试样至25mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。将样液全部转移至50mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r·min转速离心10 min，取上清液，经0.22 um微孔滤膜过滤后，按气相色谱条件进行测定。按下式计算试样中单辛酸甘油酯的质量分数： 式中：w为样品中单辛酸甘油酯质量量数(g·kg)；p为由标准曲线得出的样液中单辛酸甘油酯的质量浓度(g·L-)；V为样液定容体积(mL)；k为样液稀释倍数；m为样品质量(g)。 2 结果与讨论 2.1 色谱条件的选择 2.1.1 色谱柱 色谱柱根据“相似性原则”，即安分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则选择3，单辛酸甘油酯的极性较强，应选择极性柱，但该物质的沸点较 高，一般极性柱的最高使用温度为225℃，满足不了要求。 根据文献资料，单辛酸甘油酯和其他脂肪酸甘油酯性质类似，常用的色谱分离柱为 HP-1柱+和HP-5柱51。图1为标准溶液和空白试剂式 HP-1柱和 HP-5柱上的色谱图。 图1 标准溶液和空白试剂的色谱图 Fig. 1(Chromatograms of standard solution and blank solution 由图1可知：用HP-1柱时，标准溶液和空白试剂的出峰情况没有明显的差异，单辛酸甘油酯仅在7.6 min 左右出现一个小峰，且不同浓度的标准溶液的峰面积不呈线性；使用HP-5柱时，单辛酸甘油酯在 8.2 min 出现一个明显的色谱峰，空白试剂在同一时间无色谱峰，且不同浓度标准溶液的峰面积与其浓度呈线性关系，为此试验选择 HP-5 柱。 2.1.2 柱温 柱温是气相色谱的重要操作条件，柱温直接影响色谱柱使用寿命、柱的选择性、主效能和分析速度。柱温一般为各组分沸点平均温度或稍低些，同时柱温必须高于固定液的熔点，低于固定液的最高使用温度，这样才能使固定液有效地发挥作用。 因辛酸、辛癸酸甘油酯等物质的沸点在230℃左右，考察了柱温为200，250，280℃时的标准样品色谱图，见图2. 结果表明：柱温200℃时单辛酸甘油酯的出峰 图2 不同柱温条件下标准样品的色谱图 ig. 2 Chromatogram of standard at different column temperatures 时间约为4.6 min；250℃时出峰时间约为2.6 min；280℃时的出峰时间为2.2 min，但与样品杂峰难以分开。250℃和280℃时的色谱峰的峰面积相近，200℃时峰面积约为250℃的一半，试验选择程序升温，终温为250℃。 2.1.3 载气及其流量 试验选择 FID 检测器，以氮气为载气，测定不同流量对待测组分的保留时间和峰底宽的影响，并计算塔板数。以载气流量为横坐标，塔板数为纵坐标，绘制曲线，曲线最高点处对应的载气流量为最佳流量，塔板数越大，柱效越高。结果表明：流量分别为0.5，1.0，2.0mL·min-时，计算得塔板数分别为210472，246223，195 261，试择选择载气流量为1.0 mL·min-. 2.1.4 气化室温度 合适的气化温度既能保证样品迅速且完全气化，又不引起样品分解，一般气化室温度比柱温高30℃~70℃或比样品组分中最高沸点高30℃~50℃。试验选择气化温度为300℃，该温度下重复进样，所得色谱峰峰形正常、峰数不变、重现性好，没有出现平头峰或宽峰等不规则峰形。 2.2 样品前处理方法的选择 试验考察了 20 mL 无水乙醇、乙醇(60+40)溶液和三氯甲烷作为提取剂时，对样品的提取效果，结果表明：对于生湿面制品、肉灌肠和焙烤食品馅料，3种溶剂提取的回收率差别不大，均在90%以上；但 对于糕点样品，用乙醇(60+40)溶液提取，所得色谱峰峰形不好，且峰面积小，推断原因可能是溶剂提取不完全，也可能是糕点中糖类溶解于提取剂的水中，而糖类的气化温度较高，最终导致样品气化不完全；无水乙醇和三氯甲烷提取时差别不大，但三氯甲烷有毒且价格较贵，试验选择无水乙醇作为提取溶剂。 2.3 标准曲线、检出限与重现性 按试验方法测定单辛酸甘油酯标准溶液系列，单辛酸甘油酯的质量浓度在0.01~1.0g·L范围内与其峰面积呈线性关系，线性回归方程为y=2961x-79，相关系数为0.999 3. 取一定量的标准溶液进行连续稀释后，按试验方法进行测定，以3倍信比计算检出限为0.05g·kg. 以10次平行测定的保留时间计算相对标准偏差小于0.30%；以10次测定的峰面积计算相对标准偏差小于5%。 2.4 样品分析 按试验方法对食品样品进行测定，4种样品均未检出单辛酸甘油酯，同时进行加标回收试验，结果见表1。 一+0 (上接第1353页) 进行测定。由于取样锥孔堆积盐类易造成信号强度降低，采用在线内标进行校正，选择高丰度、无干扰元素铋、铍为内标，补偿基线效应，并通过优化仪器工作参数，使得基体干扰效应的程度得以改善，保证测量的准确性。 2.3 标准曲线及检出限 按仪器工作条件对汞、硼标准溶液系列进行测定，两元素的质量浓度均在0.01~100 pg·L-以内呈线性。按试验方法对空白样品进行了11次测定，汞和硼的检出限(3S/N)均为0.0025ug·L。 2.4 样品分析 按试验方法对两个冰硼散样品消解后，稀释1000倍进行分析，导得样品中汞和硼的含量分别为4.007，4.741 mg·g，相示标准偏差(n=5)分别为2.3%，4.1%。同时在样品中加入50pg·L-的汞和硼标准溶液做回收试验，回收率分别为98%和101%. 表1 样品分析结果 Tab. 1 Analytical results of samples 样品 加标量 回收量 回收率 w/(g·kg-) w/(g·kg-1) /% 生切面 0.20 0.184 92.0 0.80 0.762 95.3 糕点 0.20 0.180 90.0 0.80 0.730 91.3 月饼馅料 0.20 0.195 97.5 0.80 0.804 100.5 肉灌肠 0.10 0.103 103.0 0.40 0.376 94.0 ( 参考文献： ) ( [1 ] 修祥菊，郑尚基.新型防腐剂单辛酸甘油酯在食品中的 应用[J].中国食品添加剂，1997，4：29- 3 2. ) ( GB 27 6 0 -2 0 1 1 食品添加剂使用卫生标准[S ] . ) ( 刘珍.化验员读本[M] . 4版.北京：化学工业出版社 2 0 0 4 . ) ( 李长秀，唐忠.气相色谱法测定生物柴油样品中脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油酯的含量[J].分析测试学报 200 5， 24( 5) ：6 6 -68. ) ( [ 5] 邹建凯.辛癸酸甘油酯的气相色谱/质谱分析[J] . 香精 香料化妆品，2002， 6 ：16- 1 7 . ) 本方法采用微波消解后，ICP-MS同时测定硼、汞的含量，准确度和精密度均满足样品分析要求，适用于冰硼散中硼和汞的测定。 ( 参考文献： ) ( [ 1 ] 杜利芳.冰硼散临床新用途[J].现代中西医结合杂志 200 4 ，13 (1 8)：2465-246 5. ) ( 2 7 葛德洲，刘赏兰.旋光度法测则冰硼散中硼砂含量[J]. 中国药事，1998，12(6)： 3 60 - 361. ) ( [3 ] 隋迎军，杜志茂，冯春堂，等.高效液相色谱法测定冰硼散中硼砂的含量[J ] . 解 放军药学学报，200 2 ，18( 2 )： 125-1 2 6. ) ( [ 4 ] 国家药典委员会.中国药典一部[M].北京：化学工业 出版社，2010：70 2 . ) ( [ 57 侯韬乔，潘碧枢.电感耦合等离子体质谱法测食品中的：铅、鬲、伸、汞 [ J].中国卫生检验杂志，200 7 ， 17 (9)： 17 07- 1 70 8. ) C China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net 国家标准GB 2760 -2011规定其作为一种防腐剂的允许使用范围还规定其在糕点、生湿面制品、焙烤食品馅料及表面用挂浆（限豆馅）的zui大使用量为1g/kg,肉灌肠类zui大使用量为0. 5 g/kg。 我国目前还没有其检验方法，造成对上述食品的检验项目缺项 ，产品结论的判定有很大的风险。 因此 ，为了保证食品质量安全，规范市场，建立食品中防腐剂单辛酸甘油酕残留量检测方法的研究具有重要的意义。本工作建立了气相色谱法测定食品中单辛酸甘油酷的方法，不需对样品进行衍生化处理 ，直接用无水乙醇提取后进行检测。