威力酸中有机酸检测方案(二手分析仪器)

第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30177 离子色谱法测定威力酸中的有机酸 闫巍 焦霞'叶明立朱岩” (1.浙江大学西溪校区化学系杭州3100282.戴安中国有限公司杭州310028) 摘要：采用离子排斥分离，电导检测模式，对威力酸中的四种有机酸成份进行分离测定。将威力酸样品通过萃取，洗涤，过滤之后进样，可以测定其四种有机酸柠檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸的的量，在一定的色谱条件下，4种阴离子都具有很好的线性和较低的检出限。威力酸中的柠檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸4种物质的检出限分别是0.10、0.14、0.30和0.12ugl，线性相关系数r在0.9997-0.9999范围内，样品中待测离子峰面积的RSD在4.29%以下(n=10)，回收率在94%—105%之间。采用抑制电导的离子色谱法是一种威力酸中的有机酸成份的高效、准确的方法。 关键词：离子色谱；威力酸；柠檬酸；乳酸；苹果酸；富马酸 引言： 有机酸添加在饲料中，藉以取代抗生素的功能，在科学上已经得到了证实，威力酸是一种新型的动物理想的有机酸饲料助消化剂.它可有效调节肠道PH值，促进蛋蛋质的消化吸收，抑制有害微生物的繁殖，防治下痢，加速动物生长，提高饲料报酬，降低成本。其主要成分是柠檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸。但各种有机酸的含量影响着其是否能长久在肠胃道中产生预期的作用，是否会对粘膜产生刺激和不良影响，因此有机酸的测定显得尤为重要。近年来有机酸测定越来越受到人们的重视，月气相色谱测定有机酸时，常因酸的沸点较高、不易气化而需要先对其衍生再进行测定，方法繁琐"回收率不高，对热稳定性差和含量极低的有机酸难以测定；高效液相色谱测定有机酸比气相色谱法简便2.31，在测定芳香族有机酸和多元酸时更是如此；毛细管电泳法分析有机酸也有少量应用41；离子色谱法是分析有机酸的有效方法5~81，在环境样品、试剂、饮料等的成分分析中均有应用9. 但对四种有机酸的分离分析未见报道，本实验部分应用离子排斥，电导检测模式的方法对饲料添加剂威力酸中四种有机酸的含量进行测定。 2.实验部分 2.1仪器与试剂 Dionex ICS 90 离子色谱仪(美国Dionex 公司)； DS5电导检测器； Dionex AMMS-ICEⅡ自再生抑制器； Chromeleon6.0色谱工作站； Millipore 纯水器；0.45mm过滤膜(天津富集色谱技术发展公司)。 所有试剂均为分析纯。柠檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸。各标准溶液均由1000 u g/mL的贮备液配制，溶液均用18.3MQ.cm 的二次去离子水配制，储备液置于4℃冰箱中。 2.2色谱实验条件 Dionex Ion Pac ICE-AS6分离柱(250mm×2mm)； 淋洗液： 0.4mM的七氟丁酸；再生液：5mM的四丁基氢氧化胺 流速： 1ml/min；进样量：25mL 3.结果与讨论 3.1色谱条件的挑选 淋洗液选择上面，首先选用的是0.7mM的七氟丁酸，由于淋洗液浓度过高，H离子浓度增加，酸性较弱的富马酸以不离解的中性分子存在的比例增加，因而保留增加，峰形较差，拖尾严重。选用低浓度 0.1mM的七氟丁酸，虽然富马酸的峰形有所改善，但与其他酸的分离度减小，达不到良好的分离效果。最后，选用0.4mM的七氟丁酸作为淋洗液对四种有机酸进行分离，实验结果表明，四种有机酸得到良好的分离且峰形较好。 3. 1.1重现性，线性和检出限 所选择的色谱分析条件，各种待测离子的相互的色谱峰的分离度均大于1.50，能够很好地保证定量和定性，图1是标准混合溶液色谱图。 方法的稳定性是通过连续10针同一样品的各指数的相对标准偏差 RSD 进行测定，同一天内的峰保留时间和峰面积的相对标准偏差分别小于2.082%和4.290%，实验方法有很好的重现性和稳定性。 表1和表2概括了常见的各种数据，如线性，重现性，检测限等。线性方程的相关系数大于 0.9997，有较好的线性和线性范围。检测限是通过比较3倍噪音峰高来得出的，在电导检测的离子色谱中，各种待测离子的检测限是十分理想的。 表1.保留时间、峰面积、峰高重现性 Table1.repeatability of retention time， peak area， peak height for anions Anion % % 柠檬酸 2.082% 1.851% 2.605% 苹果酸 0. 107% 0.305% 0.238% 乳酸 1.354% 4.290% 1.514% 富马酸 0.558% 1.012% 0.592% "RSDs为同一天时间连续10次进样所得。 表2.线性方程，线性范围，相关系数，检测限 Table 2 linearity and detection limits data of standard anions 待测离子 线性方程 所考察的线性范围 相关系数 检测限 Anion Linear range of anion Coefficient of Detection limit Linear equations (mg1) correlation (r) (S/N=3，ug1) 柠檬酸 y=0.0684x+0.0222 0.5-150 0.9997 0.10 苹果酸 y=0. 0174x-0.0175 0.5-150 0.9997 0.14 乳酸 y=0.0027x-0.0028 0.5-150 0.9998 0.3 富马酸 y=0.0155x-0.0091 0.5-150 0.9999 0.12 X：待测离子浓度；Y：峰面积。 3.2样品测定 3.2.1实际样品的测定 称取1g产品， 置250ml的分液漏斗中。加入150ml的四氯化碳，剧烈摇荡。用水洗涤萃取，每次用50ml水，连续萃取3次。收集萃取的溶液至200ml的烧瓶内，用超声水浴至70℃。冷却后加入水至200ml。过滤，取1ml滤液用水稀释至50ml。 图1.标准溶液离子色谱图 Peaks (mgL-1)：1=柠檬酸；2=苹果酸；3=乳酸；4=富马酸 Peaks(mgL)：1=柠檬酸；2=苹果酸；3=乳酸；4=富马酸 3.2.1回收率测定 在威力酸样品中添加四种有机酸的标准品，按照2.2所述的实验方法进行前处理，测其回收率见表3。 表3.标准加入回收实验 Table.3 The recovery test for samples 待测组分 柠檬酸 苹果酸 乳酸 富马酸 溶液中含量(rgl) 8.1 5.8 19.8 12.2 加入量(ugl) 10.0 10.0 10.0 10.0 测得量(ugl) 18.6 15.49 29.19 13.25 回收率(%) 105.46 96.94 93.86 104.50 4 结论 实验结果表明，该方法对于威力酸样品中四种有机酸的测定十分重要，色谱方法有很好的重现性、线性，加标回收率也表明有较为准确，使用淋洗液发生器产生的KOH溶液，抑制电导检测，有十分理想的检测限，在稀释较大倍数的情况下，照常能满足样品监控的需要。很方便地对威力酸样品中的四种有机酸进行分离，峰形良好，并不受其它杂质干扰。 ( 参考文献： ) ( [1 ]寇 登民，祁静·自制新型毛细管色谱柱分析有机羧酸[J]·色谱， 1 999， 1 7(6)：550-552·(Kou ) ( DM， Qi J. Determination of carboxyl i c aci d on a n ew capillary column prepared by ourselves[ J ] . C h i ne s e J ou r nal o f Ch ro matog r a p h y ， 199 9 ，17 (6 )： 550-5 5 2. ) ) ( [ 2 ] P o taman N ， Chern o v I P ， Demidov V V . H i gh2perfo rm ance li q u i d chr o m atography of th ephotoproducts of nuclei c acid components [ J ] . J o ur n a l of C h r o matog raph y ， 199 3 ， ( 648) ： 151-156. ) ( [ 3 ] Z hou F X ， Krull I S. Solid2phase derivatization of amino acids and peptides in high2performance liquid chromatograph y [ J] . J o urnal o f Ch r omato gra p h y ， 199 3 ，(648 ) ：357-365. ) ( [ 4 ] K enney F B . D eterminati o n of o rganic a ci d s in f o od sampl e s by c apil l ary e lect ro phoresis[J ]. J o ur nal of Ch r o matogra ph y ，1991 ， 546 ： 423- 4 30. ) ( [5 ] 牟世芬， 刘 开录·离子 色 谱[ M ]· · 北 京：科学出版社，1 9 8 6.1 0 0- 1 03·(Mou S F ， Liu K L. I on c hr o m a tograph y [ M ]. B eijing ： S eience P ress ， 1 986. 1 00-103.) ) ( [ 6 ] L u dwig C R . A p plicati on of a p e lli cu la r an i on2exchang r es i n to t h e s ep a ration of ino r ganic and organic a ni o ns by single2 column anion exchange[J ] . J o u r nal o f C h r o m a t ogr aphy ，1992， ( 592)：101-108. ) ( [ 7 ] Sang H H，Kang S L ， G eun S C . P o tentio m etric de t ection in ion chromatography usi n g multi2ionophore membrane electrode s [ J ] . J o u r n al of C hro ma t ogra p h y ， 1 993 ， ( 6 4 8) ： 283-288. ) ( [ 8 ] M artin M W， Giacofei R A . U l tratrace a nion analysis o f h igh2 p urity w ater [J] . J o u r nal o f Chrom a t ogra ph y ， 1993， (644 ) ：333-340. ) ( [ 9 ] G l od B K ， H a ddad P R ， A l e xander P W . Po t entiometric de t ection of ca r boxylic ac i ds an d inorganic anions i n i o n2 exc l usion c hromatora p hy u sing c a mphorsulphonic a cid a s eluent [ J ] . J o u rn al of Ch r o matog raphy ， 1992 ， 592： 2 09 - 214. ) 采用离子排斥分离，电导检测模式，对威力酸中的四种有机酸成份进行分离测定。将威力酸样品通过萃取，洗涤，过滤之后进样，可以测定其四种有机酸拧檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸的含量，在一定的色谱条件下，4种阴离子都具有很好的线性和较低的检出限。威力酸中的拧檬酸，乳酸，苹果酸，富马酸4种物质的检出限分别是0.10、0.14、0.30和0.12μg/L,线性相关系数r在0.9997-0.9999范围内，样品中待测离子峰面积的RSD在4.29%以下(n=lO),回收率在94%—105%之间。采用抑制电导的离子色谱法是一种威力酸中的有机酸成份的高效、准确的方法。