印迹膜蛋白中荧光western blot检测方案(凝胶成像系统)

结论 如何使用 AzureRed 进行 western blot 总蛋白归一化 HRP+H + ligghht 变得越来越流行，可以避免 依赖看家蛋白进行归一化的许多缺点。不易受样品之间蛋白变化的影响，不是观察一种蛋白的强度，而是每条泳道的总灰度值。由于TPN技术消除了许多与信号归一化相关问题，因此发表文章越来越多地要求使用总蛋白信号进行归一一。 AzureRed 荧光蛋白染色是一种用于凝胶和印迹膜定量总蛋白染色试剂，与 western blot 下游蛋白分析兼容。 AzureRed 是全蛋白定量的理想选择，包括转印后染色以确认从凝胶到膜的蛋白转印情况，以及定量蛋白等。 免费索取详细技术资料 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 HeLa细胞裂解 物，并将蛋白从凝胶转印至低荧光 PVDF膜。蛋 白转印后，用 AzureRed 荧光蛋白染色剂 (Azure Biosystems 产品 AC2124) 染色印迹 表1 膜。30分钟后，使用 Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer 封闭膜，之后进行抗体孵育 使用 Sapphire 双模式多光谱激光成像系统四种激光同时扫描印迹膜成像。如表1所示，使用520nm 激光检测 AzureRed 染色的总蛋白，使用 AzureSpot 软件分析图像。 结果 在 Sapphire 系统上同时扫描膜上 AzureRed 染色的总蛋白和三个靶标蛋白，得到一张四通道图片(图1)。所有四个通道都作为图像捕获的一部分进行成像和对齐，图像无需在后期进行位置对齐，也无需在工作流程中添加任何其它成像步骤。叠加图像容易将三种蛋白与总蛋白进行比较。 图2.与常见的看家蛋白相比，AzureRed具有更宽的线性动态范围 单色通道图像象A))AureRed 染色总蛋白{B)Tubulin C) B-action 和 D) GAPDH。AzureRed信号的优异动态范围与实际加载的蛋白量显示 图3.使用 AzureRed 对 Tubulin 条带信号进行归一化 使用 AzureSpot 软件定量 Tubulin 蛋白条带。原始的 Tubulin 条带灰度(蓝色直方图)和总蛋白归一化的条带灰度(橙色直方图)。使用AzureRed 归言化信号可校正上样误差或膜转印所产生的差异。 AzureRed 荧光蛋白染色是荧光 Westernblot全蛋白定量的理想选择。宽广的线性动态范围确保AzureRed 成为解决蛋白上样变化的有效标准。AzureRed 的一个关键特性是将其融入现有 Western blot 工作流程的简单性(图4)。 AzureRed 染料可与常用荧光抗体同时检 测，无干扰，允许在一张印迹膜上检测多种蛋白质。有关 AzureRed 荧光蛋白染色的更多信息， 请访问 www.azurebiosystems.com 免费试用可通过以下方式 免费索取详细技术资料 北京深蓝云生物科技有限公司 地址：北京市北京经济技术开发区经海四路25号院2号楼2单元2层201室电话：010-57256059E-mail： info@cycloudbio.com 网址：Wwww.cycloudbio.com @深蓝云生物科技同时承担法国 Stilla Technologies 公司 Naica crystal 数字 PCR 系统、美国 ECHO公司 Revolve 正倒置一体荧光显微镜和 Rebel 2IN1 正倒置 Hybird 显微镜、美国 Azure Biosystems公司 Azure Imager多功能成像系统、 Sapphire 双模式多光谱激光成像系统和 IRIS 荧光定量 PCR 系统、美国 Phoseon Technology 公司 KeyPro"KP100 生物污染快速净化仪在中国的技术示范与服务职能。 如何使用 AzureRed 进行 western blot 总蛋白归一化“总蛋白归一化”或 TPN变得越来越流行，可以避免依赖看家蛋白进行归一化的许多缺点。不易受样品之间蛋白变化的影响，不是观察一种蛋白的强度，而是每条泳道的总灰度值。由于 TPN 技术消除了许多与信号归一化相关问题， 因此发表文章越来越多地要求使用总蛋白信号进行归一化。AzureRed 荧光蛋白染色是一种用于凝胶和印迹膜定量总蛋白染色试剂，与 western blot 下游蛋白分析兼容。AzureRed 是全蛋白定量的理想选择，包括转印后染色以确认从凝胶到膜的蛋白转印情况，以及定量蛋白等。图1通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 HeLa 细胞裂解物，并将蛋白从凝胶转印至低荧光 PVDF 膜。蛋白转印后，用 AzureRed 荧光蛋白染色剂（Azure Biosystems 产品 AC2124）染色印迹膜。30 分钟后，使用 Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer 封闭膜，之后进行抗体孵育。表1使用 Sapphire 双模式多光谱激光成像系统四种激光同时扫描印迹膜成像。如表 1 所示， 使用 520nm 激光检测 AzureRed 染色的总蛋白，使用 AzureSpot 软件分析图像。在 Sapphire 系统上同时扫描膜上 AzureRed 染色的总蛋白和三个靶标蛋白，得到一张四通道图片（图 1）。所有四个通道都作为图像捕获的一部分进行成像和对齐，图像无需在后期进行位置对齐，也无需在工作流程中添加任何其它成像步骤。叠加图像容易将三种蛋白与总蛋白进行比较。AzureRed 荧光蛋白染色是荧光 Westernblot 全蛋白定量的理想选择。宽广的线性动态范围确保 AzureRed 成为解决蛋白上样变化的有效标准。AzureRed 的一个关键特性是将其融入现有 Western blot 工作流程的简单性（图 4）。AzureRed 染料可与常用荧光抗体同时检测，无干扰，允许在一张印迹膜上检测多种蛋白质。