猪肉 牛奶中91种兽药检测方案

(添加10.0及20.0ng/g于鲜牛奶样品) 以GETech FaVEx-NM快速萃取净化套组分析猪肉及牛奶产品中多重兽药残留量 应用批注 食品 绪论 作者 古宜加、华宏达 巨研科技股份有限公司 高雄市左营区裕裕路392号 14楼 现行动物用药检验分析由于药物种类多元及化学差异大，针对畜禽产品检验时需使用一类一个方法方可进行检测·惟每个方法大都需要较多步骤及溶剂·至检验密度无法提升·同一样品为求检验时效无法针对太多项目进行检测，只能选择重点药项进行监控·这让不肖业者仍有机可乘；目前世界前处理大厂及学者均投入心力朝多重兽残一次分析之目标·目前较普遍的前处理方法为固相萃取法·处理一批样品最快也要数小时并且需要大量溶剂冲堤净化·也有不少学者采用QuEChERs进行多重兽残检验也有很好的结果可供参考；巨研科技公司中综合现行检验趋势及对环保之要求并鉴于前处理技术为食品检验分析之最重要矣键点·朝高效能绿色前处理技术发展·本公司发展一种用于食品中动物用药检验的快速萃取前处理技术FaVEx(Fast Veterinary Extraction)·是目前全球最快的动物用药检验前处理技术，此技术结合了一支专利净化管加上简化萃取步骤达到省时间、操作简单、再现性佳及省溶剂之效果。 摘要 以FaVEx-Nm分析牛鲜奶及猪肉样品中多重兽药(表二，三)·与传统动物用药前处理技术相比，样品前处理整体效率可提高10倍以上，因操作更简单，不须过多精密设备辅助·使得人力成本减少90%·有机溶剂的使用减少约90%·同时亦减少了废弃物的产生。此方法适用于肉类、牛奶等禽畜产品·以Aqilent 6470液相色谱-三重四极杆质谱联用仪分析，可以同时检测牛奶中磺胺沙星等102项兽药药剂项目·检测猪肉中磺胺沙星等91项兽药药剂项目，本篇牛奶的回收率除了 Lincomycin， Amprolium， Narasin Sulfamethoxypyridazine低于50%外其余均高于50%·猪肉之回收率则有4个药项低于50%，其余在51.8~115.5%之间·变异性分别为0.9~21.9%，1.1~18.0%，(表二三)·定量极限最低可到0.005ug/g·为快速、稳定之检验方法。 样品制备流程 加入10mL1%醋酸乙腈以高速震荡机震荡10分钟 L 4C， 4000 rpm离心5分钟 取5mL上清液加入FaVEx-NM萃取套组以每秒1滴流速加压净化收集并以0.22 umsyringe filter过滤 以LC-MS/MS分析 液相/气相层析参考条件 移动相流速：0.3mL/min。层析管柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18内径3.0×100mm 1.8-Micron流动相溶液-A液：水+0.1%甲酸流动相溶液-B液：甲醇+0.1%甲酸流动相溶液：A液与B液以下列条件进行梯度分析。分析仪器：1290/6470液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(Agilent) 时间 (min) A (%) B(%) 0.0 98 2 2.5 95 5 3.5 80 20 6.0 75 25 8.0 70 30 11.5 50 50 13.0 30 70 14.0 10 90 14.5 5 95 20.0 5 95 21.0 98 2 post time： 2.0min 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数 Compound Name Precursorlon Productlon Ret Time(min) Fragmentor CollisionEnergy Cell AcceleratorVoltage Polarity 5-Hydroxythiabendazole 218 147.1 6.42 158 40 7 Positive 218 191 6.42 158 28 7 Positive Albendazole 266.1 234 12.81 118 20 7 Positive 266.1 191 12.81 118 40 7 Positive Amino albendazole sulfone 240.1 198 6.76 113 4 7 Positive 240.1 133 6.76 113 36 7 Positive 240.1 106 6.76 113 50 7 Positive Amprolium 243.1 150 2.38 80 18 7 Positive 243.1 94 2.38 80 25 7 Positive Azaperol 330 149 7.06 112 25 7 Positive 330 121 7.06 112 29 7 Positive Azaperone 328 165 7.88 134 7 7 Positive 328 121 7.88 134 21 7 Positive Carazolol 299.2 222.1 10.41 82 17 7 Positive 299.2 116.1 10.41 82 17 7 Positive Carbadox 263.1 231.1 7.74 102 7 7 Positive 263.1 129.1 7.74 102 29 7 Positive 263.1 90.1 7.74 102 29 7 Positive Chloramphenicol 321.1 257.1 12.11 120 5 4 Negative 321.1 194.1 12.11 120 5 4 Negative 321.1 152.1 12.11 120 10 4 Negative Ciprofloxacin 332.1 314.1 7.25 130 18 7 Positive 332.1 231 7.25 130 42 7 Positive Clarithromycin 748.5 158.1 13.11 164 29 7 Positive 748.5 116.1 13.11 164 49 7 Positive Clindamycin 425.2 377.1 9.87 149 17 7 Positive 425.2 126.1 9.87 149 29 7 Positive Clopidol 192.1 101.1 6.98 144 29 7 Positive 192.1 87.1 6.98 144 33 7 Positive *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) *为定量离子对，定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) Compound Name Precursorlon Productlon Ret Time(min) Fragmentor Collision Energy Cell AcceleratorVoltage Polarity Florfenicol 356.1 336.1 11.63 90 2 4 Negative 356.1 219.1 11.63 90 5 4 Negative 356.1 185.1 11.63 90 14 4 Negative Florfenicol amine 248 230 4.75 87 4 7 Positive 248 130 4.75 87 20 7 Positive Fluazuron 506.1 307.1 17.19 144 5 4 Negative 504.1 305.1 17.19 144 5 4 Negative Flubendazole 314.1 281.9 13.6 133 24 7 Positive 314.1 123.1 13.6 133 40 7 Positive Flumequine (FQ) 262.2 244.1 14.24 150 13 7 Positive 262.2 202.1 14.24 150 30 7 Positive Furaltadone 325.1 281 6.73 99 8 7 Positive 325.1 252 6.73 99 16 7 Positive 325.1 100.1 6.73 99 28 7 Positive Furazolidone 226 122.1 10.47 128 24 7 Positive 226 95.1 10.47 128 12 7 Positive 226 67.2 10.47 128 36 7 Positive Halofuginone 416.1 120.1 10.27 129 17 7 Positive 416.1 100.1 10.27 129 17 7 Positive Josamycin 828.5 174.1 13.7 206 37 7 Positive 828.5 109.1 13.7 206 49 7 Positive Kitasamycin 772.6 174.1 12.87 206 33 7 Positive 772.6 109.1 12.87 206 45 7 Positive lasalocid A 613.8 596.3 0 192 32 7 Positive 613.8 578.2 0 192 36 7 Positive 613.8 378.2 0 192 40 7 Positive Levamisole 205.2 178.1 6.86 100 22 7 Positive 205.2 123 6.86 100 30 7 Positive 205.2 91.1 6.86 100 30 7 Positive *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) Compound Name Precursorlon Productlon Ret Time(min) Fragmentor CollisionEnergy Cell Accelerator Voltage Polarity Ofloxacin 362.2 318.2 7.14 120 20 7 Positive 362.2 261.2 7.14 120 20 7 Positive Olaquindox 264.3 212.2 6.37 110 22 7 Positive 264.3 143 6.37 110 30 7 Positive Oleandomycin 772.01 586.2 13.34 158 16 7 Positive 772.01 158 13.34 158 28 7 Positive Orbifloxacin 396.2 295.1 8.05 144 25 7 Positive 396.2 267 8.05 144 41 7 Positive 396.2 226 8.05 144 49 7 Positive Ormetoprim (OMP) 275.1 259.1 7.44 107 25 7 Positive 275.1 123.1 7.44 107 25 7 Positive Oxolinic acid(OXA) 262.1 244 12.15 100 13 7 Positive 262.1 215.9 12.15 100 30 7 Positive 262.1 159.9 12.15 100 41 7 Positive Pefloxacin 334 316 7.2 120 20 7 Positive 334 233 7.2 120 25 7 Positive Penicillin G 357.1 198 7.62 104 12 7 Positive 335.1 176 7.62 89 12 7 Positive 335.1 160 7.62 89 8 7 Positive Pipemidic acid 304 217 6.56 120 20 7 Positive 304 189 6.56 120 30 7 Positive Piromidic acid 289 271 15.03 120 20 7 Positive 289 243 15.03 120 30 7 Positive Pyrimethamine 249.2 233.1 10.29 120 30 7 Positive 249.2 177 10.29 120 30 7 Positive Robenidine 334.1 155.1 14.05 119 17 7 Positive 334.1 111.1 14.05 119 45 7 Positive Ronidazole 201 140 7.31 80 2 7 Positive 201 55.2 7.31 80 20 7 Positive *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) Compound Name PrecursorIon Productlon Ret Time(min) Fragmentor CollisionEnergy Cell Accelerator Voltage Polarity Sulfamethazine (SMT) 279.1 186 9.09 120 14 7 Positive 279.1 156 9.09 120 20 7 Positive Sulfamethizole 271.1 156.1 9.08 100 10 7 Positive 271.1 92.1 9.08 100 25 7 Positive Sulfamethoxazole (SMX) 254.1 156 11.51 100 10 7 Positive 254.1 92 11.51 100 26 7 Positive Sulfamethoxypyridazine(SMP) 281.2 156.1 9.2 125 14 7 Positive 281.2 92.1 9.2 125 30 7 Positive Sulfamonomethoxine (SMM) 281.1 156 9.2 120 14 7 Positive 281.1 92 9.2 120 30 7 Positive Sulfamoxole 268.1 156 8.5 113 12 7 Positive 268.1 108.2 8.5 113 24 7 Positive 268.1 92.3 8.5 113 28 7 Positive Sulfanilamide 173 156 5.38 94 8 7 Positive 173 93 5.38 94 28 7 Positive 173 76 5.38 94 50 7 Positive Sulfanitran 358 316.8 15.9 69 8 7 Positive 358 88.1 15.9 69 36 7 Positive Sulfaphenazole 315.1 160 13.06 133 24 7 Positive 315.1 158 13.06 133 32 7 Positive 315.1 92.1 13.06 133 44 7 Positive Sulfapyridine (SPD) 250.1 156 7.85 100 14 7 Positive 250.1 92 7.85 100 30 7 Positive Sulfaquinoxaline (SQX) 301.2 156 12.81 110 11 7 Positive 301.2 92 12.81 110 29 7 Positive Sulfathiazole (STZ) 256.2 156.1 7.56 100 9 / Positive 256.2 92.1 7.56 100 30 7 Positive Sulfatroxazole 268 156 11.68 100 15 7 Positive 268 92 11.68 100 30 7 Positive *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 表一、兽药102项药剂之多重反应侦测模式参数(续) Compound Name Precursorlon Productlon Ret Time(min) Fragmentor CollisionEnergy Cell Accelerator Voltage Polarity Sulfinpyrazone 405.1 279 15.27 148 16 7 Positive 405.1 185.5 15.27 148 28 7 Positive 405.1 158 15.27 148 40 7 Positive Sulfisomidine 279.1 124.2 6.62 123 28 7 Positive 279.1 92.1 6.62 123 36 7 Positive Sulfisoxazole 268.08 155.9 11.68 104 12 7 Positive 268.08 113 11.68 104 16 7 Positive 268.08 92.1 11.68 104 28 7 Positive Sulfisozole 240 156 9.87 79 13 7 Positive 240 108.1 9.87 79 25 7 Positive 240 92.2 9.87 79 25 7 Positive Tetramisole 205 178 6.86 112 17 7 Positive 205 123 6.86 112 29 7 Positive Thiamphenicol 354.1 290 8.57 107 4 4 Negative 354.1 227 8.57 107 4 4 Negative 354.1 185 8.57 107 12 4 Negative Tiamulin 494.3 119 12.92 112 20 7 Positive Tilmicosin 869.6 174.1 10.52 285 49 7 Positive 869.6 132.1 10.52 285 53 7 Positive Trichlorfon 259 109 9.49 120 13 7 Positive 257 109 9.49 120 13 7 Positive Trimethoprim (TMP) 291.1 230.1 7.06 112 21 7 Positive 291.1 123.1 7.06 112 25 7 Positive Tylosin 916.5 174.1 12.29 223 45 7 Positive 916.5 101.1 12.29 223 53 7 Positive Virginiamycin M1 526.3 355.2 14.59 129 13 7 Positive 526.3 337.1 14.59 129 21 7 Positive *为定量离子对·定性离子对可视基质情况选择适合之离子对 图一、牛奶样品中102项兽药LC/MS/MS-MRM图谱(添加样品浓度为10.0 ng/g) 图二、猪肉样品中91项兽药LC/MS/MS-MRM图谱(添加样品浓度为10.0 ng/g) 表二、牛奶中兽药102项药剂之回收率和变异系数 表二、牛奶中兽药102项药剂之回收率和变异系数(续) (添加10.0及20.0ng/g于鲜牛奶样品) *重复性·n=4 表二、牛奶中兽药102项药剂之回收率和变异系数(续) (添加10.0及20.0ng/g于鲜牛奶样品) *重复性·n=4 表二、牛奶中兽药102项药剂之回收率和变异系数(续) (添加10.0及20.0ng/g于鲜牛奶样品) Compound Method 牛奶 10.0ng/g 牛奶 20.0ng/g Name CV%* Recovery% CV%* Recovery % Sulfaquinoxaline (SQX) 5.1 88.3 3.4 83.5 Sulfathiazole (STZ) 7.6 83.4 83.8 Sulfatroxazole 2.7 82.1 79.8 Sulfinpyrazone 4.7 75.6 79.0 Sulfisomidine 1.8 92.7 1.2 83.8 Sulfisoxazole 51.5 45.8 Sulfisozole 82.4 84.1 Tetramisole 98.6 90.5 Thiamphenicol 8.0 97.6 4.0 87.3 Tiamulin 1.5 88.8 3.0 90.6 Tilmicosin 5.0 83.3 3.2 85.2 Trichlorfon 6.0 84.0 79.6 Trimethoprim (TMP) 87.7 80.9 Tylosin 75.6 77.7 Virginiamycin M1 79.4 81.3 *重复性 · n=4 表三、猪肉中兽药91项药剂之回收率和变异系数(续)(添加10.0ng/g猪肉样品) ( *重复性·n=4 ) 表三、猪肉中兽药91项药剂之回收率和变异系数(续)(添加10.0 ng/g猪肉样品) 表三、猪肉中兽药91项药剂之回收率和变异系数(续)(添加10.0ng/g猪肉样品) Compound Method *重复性·n=4 表四、本篇对应中国国标方法符合项目列表 方法編號 方法名稱 定量限 備註 總藥劑數 符合數 GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定液相色谱-串联质谱法 0.1ug/kg0.5ug/kg 傳統法 8 3 GB/T21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法 3ug/kg6ug/kg10ug/kg HLB 14 12 GB 29688-2013 食品安全国家标准牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法 0.1ug/kg 傳統C18SPE 1 1 GB/T 20756-2006 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法 0.1ug/kg1ug/kg 傳統法 3 3 GB/T 20762-2006 畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1ug/kg HLB 9 9 GBT 21316-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱质谱法 50ug/kg10ug/kg 傳統法 23 22 GB/T 20744-2006 蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法 0.1ug/kg0.2ug/kg SPE 3 3 GB 29693-2013 食品安全国家标准动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法 50ug/kg HPLCHLB 1 1 结论 以FaVEx-Nm分析样品中磺胺沙星等多重兽药，对照国标公告之项目如表四·本篇方法与固相萃取前处理技术相比·样品前处理整体效率可提高10倍以上·因操作更简单，不须过多精密设备辅助·使得人力成本减少90%·有机溶剂的使用减少约90%·同时亦减少了废弃物的产生。此方法适用于肉类、牛奶等畜产品·同时检测91和102种兽药，牛奶的回收率除了Lincomycin， Amprolium，Narasin ，Sulfamethoxypyridazine低于50%外其余均高于50%(51.5~105.7%)·猪肉之回收率则有4个药项低于50%，其余在51.8~115.5%之间·变异性分别为0.9~21.9%，1.1~18.0%，(表二三)·体现高精确稳定之需求，定量极限最低可到0.005 ug/g·为快速、稳定之检验方法，针对回收低于50%之项目未来将在再进行优化研究朝更精准之方向前进· 详细信息 有矣本公司产品与服务的其他信息·请造访本公司网站：www.getech.com.tw www.getech.com.tw 本文内容如有任何错误·或是因为提供、实行或使用本数据·造成附带或衍生损害·巨研科技恕不负责。 本文件中的信息、说明和规格可能随时变更·恕不另行行知。 巨研科技股份公司·2019年2019年04月23日GET-AN2019003CN FaVEx-NM 通用型多兽残一步法净化柱适用于肉类、牛奶等禽畜肉类基质；检测牛奶中102项兽药，检测猪肉中91项兽药，包括磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、大环内酯类等；一步通过，收集目标物的策略；只需5min完成前处理净化步骤，操作简便；操作步骤：相关产品：品牌货号名称巨研FAVEX-NM50Fast Veterinary Drug   Extraction Kit- Normal 50/PK