石斑鱼中异亮氨酸检测方案(氨基酸分析仪)

DKSH Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸 摘要： 以石斑鱼为原料，使用 Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。 一、样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，浓度≥36%，优级纯 1、2 6mol/L盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL，混匀。 1、3 水：去离子水 1、4 苯酚：须重蒸 1、5 17种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 2、 前处理设备 1)分析天平：感量分别为 0.0001g 和0.00001g。 2)水解管：耐压螺盖玻璃试管，体积为 25mL 3)匀浆机。 4)无油真空泵 5)干浴水解浓缩仪 6))移液管 7)0.22um 滤膜 3、 样品制备(参考国标 GB 5009.124-2016) 原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。 4、 试样水解 称取含蛋白7.5-25mg的试样，加入水解管中，加入 15mL 6mol/L 盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻 3min~5min，接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近OPa)，然后充入氮气，重复抽真空-充入氮气3次后，在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110℃水解22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°C吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解，振荡混匀后，吸取溶液通过 0.22 um 滤膜后，转移至仪器进样瓶，为样品测定液，供仪器测定用。 二、分析方法描述(Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1)色谱柱： Biochrom Na 型阳离子交换树脂月，4.6x20cm 2)分离程序： NO. Time Temp Buffer Pump Nin Rec Comman ds 1 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h 2 00：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Reset h 3 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Load h 4 06：40 48 1 35.0ml/ ON ON h 5 13：00 52 2 35.0ml/ ON ON h 6 01：00 52 5 35.0ml/ ON ON h 7 16：00 95 5 35.0ml/ ON ON h 8 04：00 95 6 35.0ml/ ON ON h 9 04：00 95 1 35.0ml/ ON ON h 10 09：00 48 1 43.0ml/ OFF OFF h 11 02：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h End 3)运行时间：经分析时间+再生时间 57min 反应单元温度：135°C。5 检测波长：570nm、440nm 同时检测。 三、样品中氨基酸含量的计算 样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算： 式中： ci__-样品测定液氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； Ai一―—试样测定液氨基酸i的峰面积； As -氨基酸标准工作液氨基酸 s的峰面积； cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s 的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。 试样中各氨基酸的含量按式(3)计算： 式中： Xi -试样中氨基酸i的含量，单位为克每百克(g/100g)； ci -试样测定液中氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； F —-―—稀释倍数； V———试样水解液转移定容的体积，单位为毫升(mL)； M———氨基酸i的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)； m――—称样量，单位为克(g)； 10°一——将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数； 100 -――—换算系数。 附、石斑鱼分析图谱及做样结果 300 Minutes 570nm Results Pk # Name Retention Time Are8 ESTD concentration(mg/100g) 4 Asp 7.833 4986085 1935.714 5 Thr 9.533 2412632 827.479 6 Ser 10.366 2471512 709.646 7 Glu 12.566 6838580 2792.827 9 Gly 19.232 4863357 969.887 10 Ala 20.532 4332267 1140.825 12 Val 22.599 2668043 906.092 13 Met 24.465 1329635 531.548 14 Ile 25.965 2040541 852.780 15 Leu 27.032 4095148 1508.791 17 Tyr 30.065 1165749 655.386 18 Phe 31.065 1659250 769.522 19 His 36.231 1126272 434.657 20 Lys 38.031 4971214 1817.234 23 Arg 45.964 2555368 1179.309 Totals 47515653 17031.696 440nm Results Pk # Name Retention Time Area ESTD concentration(mg/100g) 3 Pro 14.299 794906 721.417 Totals 794906 721.417 更多应用文章，关注“大昌华嘉科学仪器部”公众号 选择大昌华嘉，就是选择仪器应用专家Think Asia. Think DKSH.www.dksh-instrument.cn 电话： 邮箱： ins.cn@dksh.com 以石斑鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。