化妆品中氯普鲁卡因麻醉剂药物检测方案(固相萃取仪)

Raykol Applications Collection-RKFT-F006 全自动固相萃取-高效液相色谱法串联质谱测定化妆品中7种局部麻醉剂药物 近年来，药物麻醉剂作为整容手术后常用止疼手段，越来越被各大诊所使用。虽然局部麻醉药品能起到一定的效果，但常伴随着过敏等副作用，反而使痛苦延长。个别人群由于身体原因，导致其对于局部麻醉剂有非常严重的过敏，产生皮肤炎症，呼吸衰竭严重导致死亡等。 基于此本文采用 SPE 净化，在 HPLC-MS/MS正离子模式下检测，建立化妆品中7种局部麻醉剂 (苯佐卡因、利多卡因、、丁丁卡因、辛可卡因、普鲁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因)测试的一种新方案。建立霜和精油类前处理方法，使用 MCX 固相萃取柱进行净化，加标量为 10 ug/kg， 回收率在70-120%之间；液质中能达到对浓度为 10 ug/kg 的以上七种局麻药回收率70%以上，即对最低定量浓度回收率应达到以上标准的要求。 关键字：全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱；化妆品；局部麻醉剂 2.仪器和耗材 Raykol Fotector Plus 全自动固相萃取仪 高效液相色谱 (HPLC) Agilent 1260，质谱检测器(MS)Agilent 6410 氮气吹干装置： Raykol AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪 MCX固相萃取柱 (Waters 60mg/3 mL) 3.样品制备与净化 3.1提取 3.1.1霜类化妆品前处理方法 准确称取霜类化妆品(极草堂霜，0.5g)，加入2 mL乙腈振荡2 min，加入8mL1%三氯乙酸溶液，超声振荡10 min， 3800 r/min 离心5 min； 取上清溶液过 MCX 柱 (Oasis， 60 mg/3 mL)净化。 3.1.2霜类化妆品前处理方法 准确称取精油类化妆品(市售，0.5g)，加入2mL乙腈振荡2 min，加入8mL1%三氯乙酸，超声振荡 10 min， 3800 r/min 离心5 min， 取下层清溶液过 MCX 柱 (Oasis， 60mg/3mL) 净化。 3.3净化 分别以5mL甲醇和5 mL 1%三氯乙酸水溶液活化 MCX 柱 (Waters 60 mg/3 mL)后，将上述的 甲醇、乙腈均为色谱纯(Sigma，美国)，氨水、三氯乙酸为分析纯(国药，，上海)，超纯水(MerckMillipore Aquelix 5， 德国) 麻醉剂固体标准品(山西食品药检所提供)。将上述混标组分以甲醇为溶剂配制成100 mg/L 的混标储备液，置于-20℃冰箱保存。 样品溶液以1 mL/min 的速度进行上样，并用5 mL的1%三氯乙酸水溶液清洗样品瓶。以10 mL 的甲醇溶液对固相萃取柱进行淋洗出去残留的有机物；在20 psi 的氮气流下吹干 MCX柱，最后以10 mL的 5%氨水甲醇洗脱目标化合物(具体的净化步骤请见图-1)。将所得洗脱液在浓缩仪上进行吹干，氮气压力为 5 psi， 温度为40℃，浓缩至近干，用20%甲醇水定容至1 mL溶解解留物，经0.22 um滤膜过滤后上机测试。 3.2固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科Fotector Plus 固相萃取柱 MCX强阳离子交换柱( Waters60mg/3mL) 活化 甲醇 淋洗 甲醇溶液 洗脱 5%氨水甲醇溶液 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间[minJ 1 清洗样品通道 CH30H 40 5 1.7 2 活化 CH30H 废液1 3 5 2.1 3 活化 1%三氯乙酸... 废液2 3 5 2.1 4 上样 废液1 1 10 10.8 5 清洗样品瓶 1%三氯乙酸... 废液2 100 5 5.9 6 气推 废液2 20 10 1.3 7 淋洗 CH30H 废液1 3 10 3.9 8 气推 废液1 20 10 1.3 9 吹干 2 10 清洗注射泵 5%氨水甲醇. 40 2 0.4 11 洗脱 5%氨水甲醇.. 收集 1 10 10.5 12 气推 收集 20 10 1.3 13 结束 图-1 Fotector Plus 对化妆品中麻醉剂的固相萃取净化方法 4.液质检测条件 4.1色谱柱条件 柱子 流速 流动相 柱温 进样体积 离子模式 吹扫气 氮气温度 簇电压 雾化压力 梯度洗脱 4.2MRM 参数： 表-1.7种局部麻醉剂的串联质谱检测参数 母离子 子离子 保留时间 碰撞能 透镜电压 回归方程 相关系数 线性范围 Parent Daughter Retention Collision Tube Correlation Linear 名称 Regression ion ion time energy iens coefficients range equations (m/z) (m/z) (min) (ev) (v) (R2) (pg/L) 苯佐卡因 Benzocaine 166.1 138.1 5.233 55 6 Y=1.4×10x 0.9975 0.1~10 120 18 丁卡因 265.2 176.1 5.049 115 10 y=1.0×104x 0.9995 Tetracaine 72.1 20 利多卡因 Xylocaine 235.2 86.2 58.1 3.197 115 14 36 Y=1.3×10+x 0.9907 氯普鲁卡因 Chloroprocaine 271.1 154.0 1.875 115 24 Y=2.9×10+x 0.9978 100.2 10 hydrochloride 普鲁卡因 Procaine 237.2 120.1 100.2 1.277 90 24 10 Y=4.5×104X 0.9997 普鲁卡因胺 procainamide 236.2 163.1 120.1 1.054 115 10 30 Y=7.6x10+x 0.9990 辛可卡因 Cinchocaine 344.2 271.1 215.0 5.477 115 18 30 y=7.3×104x 0.9972 5.1基质效应验证 取空白样品，按照上述的样品处理步骤，加入标准使用液(1 ppm， 40 uL)， 定容成1mL，供LC/MS-MS检测，工作曲线计算。如果基质加标浓度准确，则可以直接用标准曲线对样品进行定量；如果不准确，请使用基质加标做工作曲线进行单点定量。 选择定量离子的峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，做相关曲线，曲线为线性回归，各点权重相等，拟合出工作曲线，要求R²0.99；此曲线两 周需要重新配置一次。 5.2样品基质加标测试 为了验证该方法的回收率，本实验向化妆品样品中(0.5g)中加入上述7种局部麻醉标品(50uL，100 ug/L)， 加标浓度为10 pg/kg， 进行加标回收验证(n=3)。测试结果如下表所示，回收率在70-120%之间；液质中能达到对浓度为10 ug/kg 的以上七种局部麻药回收率70%以上，即对最低定量浓度回收率应达到以上标准的要求。 表-2.化妆品的加标回收率(10g/kg) 名称 霜类 精油类 基质加标 霜加标 回收率/% 基质加标 精油加标 回收率/% 苯佐卡因 7.36 6.03 81.93 7.29 6.30 86.42 丁卡因 10.58 8.06 76.18 7.23 7.30 100.97 利多卡因 10.6 10.14 95.66 5.16 5.49 106.40 利多卡因 11.69 9.78 83.66 4.65 4.31 92.69 普鲁卡因 5.79 5.12 88.43 11.73 8.89 75.79 普鲁卡因胺 8.12 7.6 93.60 9.31 7.12 76.48 辛可卡因 7.28 5.52 75.82 6.09 7.00 114.94 6.结果与讨论 6.1化妆品中常常含有痕量的麻醉剂药品，因此在进行样品基质效应验证时，需要扣除样品空白的影响，以免造成标准基质工作曲线定量异常。同时需要对空白样品进行含量确认，如果某一化合物 的含量过高，加标量需要大于其空白含量的一倍以上，以便顺利完成加标回收实验。 6.2对于上述麻醉品标准曲线配置时，需要注意自身安全，做好防护措施，以免对实验人员造成 身体伤害。 6.3由于个别化妆品存在胶状物，易在管路及 7.仪器特征优势 本方法可实现化妆品麻醉剂药物净化过程自动化，首先利用Fotector Plus 全自动固相萃取仪对固相萃取小柱活化，然后将样品提取液，精准地移取上样体积和控制上样速度，再选择合适溶剂对其进行洗脱，整个过程只需将样品和溶剂放置于仪器中便可高效地自动完成净化任务(6个样品需0.5h， 注射器中残留，故可采用乙酸乙酯等脂溶性较好的溶剂进行清洗。 5h 可处理60个样品)；将处理好的60个样品直接转移至 Auto EVA-60全自动平行浓缩仪进行浓缩，样品架兼容性避免样品转移过程，减少样品的损失，60个样品浓缩时间仅需 30min 左右，轻松地解决样品量大的问题，减轻实验室人员工作量。 ERayK ERayKacal 全自动均质器样品提取 全自动固相萃取仪样品净化 全自动浓缩仪样品浓缩 热线：箱： info@raykol.com网址：： www.raykol.com 热线：箱： info@raykol.com网址：： www.raykol.com 基于此本文采用SPE净化，在HPLC-MS/MS正离子模式下检测，建立化妆品中7种局部麻醉剂（苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、辛可卡因、普鲁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因）测试的一种新方案。建立霜和精油类前处理方法，使用MCX固相萃取柱进行净化，加标量为10 µg/kg，回收率在70-120%之间；液质中能达到对浓度为10 μg/kg的以上七种局麻药回收率70%以上，即对最低定量浓度回收率应达到以上标准的要求。