牛乳中六六六、滴滴涕检测方案(二手分析仪器)

表1回归方程及检出限 气相色谱检测牛乳中六六六、滴滴涕残留方法研究 李飞、柴彦兵、张耀广、李兴佳、王玉英(石家庄君乐宝乳业有限公司质量管理中心 050221) 摘要：本文建立了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱测定方法。样品用丙酮和石油醚提取，旋转蒸发仪浓缩，佛罗里硅土小柱净化后，用气相色谱仪测定， RTX-5毛细管柱分离，保留时间定性，外标法定量。标准曲线相关系数在 0.9983-0.9998 之间，方法检出限在 0.25-0.75ug/kg 之间，平均加标回收率在98.18-107.98%之间，相对标准偏差在0.28-4.79%之间，精密度相对标准偏差在1.09-6.22%之间。结果表明所建立的方法经济、准确、可靠，适用于牛乳中六六六、滴滴涕的检测。 关键词：气相色谱 牛乳六六六 滴滴涕 Determination of 666 and DDT in milk by Gas chromatography Lifei； chaiyanbing；zhangyaoguang；lixingjia；wangyuying(Shijiazhuang Junlebao dairy co. ltd， Quality Center050221) Abstract ： In this paper， a method of Gas chromatography for detection of 666 and DDT in milk was be established：The sample wasextracted with acetone and petroleum ether， Concentrated by Rotary evaporation instrument， then purified by Silica SPE， finallydetected by Gas chromatography， it was separated by RTX-5 capillary column， qualitatived by Retention time and Quantitative byexternal standard method. The correlation coefficient of the standard curve in 0.9983-0.9998， the detection limit of the method in0.25-0.75ug/kg， the average recoveries in 98.18-107.98%，the relative standard deviation in 0.28-4.79%.The relative standarddeviation of precision in 1.09-6.22%. The results show that the established method is economic， accurate and reliable， applicable toDetermination of 666 and DDT in milk. Key words： Gas chromatography'Imilk666 DDT 六六六、滴滴涕属于有机氯农药中的两类，常见的各有4种异构体，分别为a-666、β-666、y-666、8-666及p.p'-DDE、o，p’-DDT、p.p’-DDD、p，p'-DDT。都属于广谱杀虫剂，具有胃毒、触杀和熏蒸三中作用方式。效力强而持久，属高残留农药品种，其中以 y-666 为比较重要的异构体，是杀虫剂的活性成分，俗称林丹。它们在防治蝗虫、稻螟虫、小麦吸浆虫等农业害虫和蚊、蝇、臭虫等卫生害虫以及防治疟疾发挥过比较重要的作用。但由于该类农药具有半衰期长，不易分解和亲脂性等特点，近年来害虫抗药性不断增强，残留污染严重"，并通过食物链进入人体在人体脂肪内长期蓄积，扰乱人体的荷尔蒙分泌， 2001年的《流行病学》杂志提到，科学家通过抽查24名16到28岁墨西哥男子的血样，首次证实了人体内 DDT 水平升高会导致精子数目减少。除此以外，新生儿的早产和初生时体重的增加也和 DDT 有某种联系，已有的医学研研还表明了它对人类的肝脏功能和形态有影响，并有明显的致癌性能。 我国政府已于1983年禁止使用此两种农药，但由于其半衰期长和不易分解的特点，可能在环境中还有残留，并通过各 种方式进入生物体内，《GB2763-2012食品中农药最大残留限量》中明确规定牛乳中六六六、滴滴涕的限量值为0.02mg/kg。目前食品中有机氯农药残留一般用气相色谱电子捕获检测器法检测。牛乳由于其基质较复杂造成前处理过程较难，本文研究 了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱检测方法，并通过加标回收率、精密度等指标验证了其科学有效性。 1、实验部分 1.1仪器与试剂 气相色谱仪：岛津 GC-2010；电子天平；旋转蒸发仪；固相萃取装置；氮吹仪。丙酮、石油醚(30-60℃)、乙酸乙酯、环己烷、氯化钠、无水硫酸钠。 1.2样品处理 1.2.1提取：称取 20g (精确到0.01g) 牛乳于200mL具塞三角瓶中，加入40mL 丙酮， 振摇 30min 后， 加入6g氯化钠，充分混匀。再加入30mL 石油醚，振摇 30min。静置分层后，将有机相全部转移至100mL 具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥，并量取 35mL于旋转蒸发瓶中，旋转蒸发浓缩至1mL，加入2mL乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL，用乙酸乙酯-环己烷(1+1)洗涤旋转蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中，定容至10mL，待净化。 1.2.2净化：采用佛罗里硅土小柱净化，安装好固相萃取装置，打开真空泵，设定真空压力为254mmHg， 每根小柱加4mL石油醚，慢慢打开柱阀让正己烷通过吸附层，赶出气泡、关上阀门，溶剂浸泡吸附层约 5min 后，慢慢打开柱阀待石油醚通过小柱，于吸附剂上层含1毫米溶剂时关闭柱阀。不得使小柱淋干。转移提取液至小柱中，打开柱阀，使提取液以大约 2mL/min的流速通过吸附剂，不得使小柱淋干。用 10mL 丙酮/石油醚(10/90， v/v) 洗脱柱子，打开真空泵调节泵压至254mmHg，让溶剂浸泡吸附层约1min后，慢慢地打开柱阀，收集洗脱液。 1.2.3上机：将收集到的洗脱液在50℃下氮气吹至近干，用石油醚准确定容至1mL， 上气相色谱测定。 1.3标准溶液的配制 六六六、滴滴涕混标浓度：50ug/mL 分别吸取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mL标准溶液正容烷定容至100mL容量瓶中，得到六六六、滴滴涕标准溶液浓度分别为 0.05、0.1、0.2、0.4、0.5ug/mL。 1.4 GC 仪器条件 色谱谱： Rtx-5毛细管柱[30mx0.25mm(内径)x0.25um]；进样口口度：260℃； 升温程序：初始柱温60℃，保持 1min， 以 30℃/min 升温至 190℃，保持 1mim， 再以 5℃/min 升温至230℃，保持 10min，再以10℃/min 升温至250℃， 保持 2min； 载气：氨气(纯度≥99.999%)，线速度25cm/s； 进样方式：不分流进样；进样量：1pL. 检测器： ECD， 温度：300℃， 电流：0.5nA。 2、 结果与讨论 2.1提取液的选择 食品中有机氯农药的提取一般采用正己烷或石油醚，对于含水量较低的样品可直接采用正己烷或石油醚，而牛乳中含水量较高，需加入极性溶剂丙酮组成的混合溶剂提取，本试验采取丙酮：石油醚为 4：3 的混合液提取，效果良好。 2.2前处理优化 牛乳中含有大量蛋白质，加入丙酮提取液后形成乳浊液，本实验加入氯化钠，利用盐析的原理使水层与有机层可以有效分离41，有利于后面净化步骤。 2.3净化方法的选择 国标中采取凝胶色谱系统(GPC)净化，而凝胶色谱净化仪器较昂贵，凝胶柱使用有机溶剂较多，成本较高，不适用于一般企业使用，固本实验采用了固相萃取法进行净化。比较了佛罗里硅土、中性氧化铝及活性炭小柱的净化效果，综合回收率及成本因素，最终在净化时选取佛罗里硅土小柱。 2.4色谱柱的选择 本实验采取的是岛津随机配备的标准 Rtx-5(固定相为5%的苯基十95%二甲基聚硅氧烷)熔融弹性石英毛细管柱，与之类似固定相的还有 DB-5、HP-5等型号柱子，都适用于农药残留的检测，六六六、滴滴涕标准溶液色谱图见下图。 从图中可以看出，8种异构体能在26分钟内有效的分开，峰型尖锐，对称性好，出峰附近都没干扰峰，各峰间间隔适宜，是理想的色谱检测条件。 2.5标准曲线和检出限(LOD) 取8种六六六、滴滴涕的异构体混合标准系列溶液，按照上述第1.4节所述仪器条件进行分析，外标法定量。样1pL，以峰面积Y对浓度X(ug/mL)进行线性回归，回归方程和相关系数见表1. 最低检出限按下面公式进行计算，详见表1 CL=3Nd*C/(H*V) CL：最低检测限(mg/kg)； C：标准液的浓度 ug/mL； Nd：基线噪声峰高； H：标准液色谱峰高；V：进样体积1pL。 浓度(ug/mL) 0.05 0.1 0.2 0.4 0.5 回归方程 相关系 检出限 数(R) (ng/kg) a-666 440455 835679 1723787 3556892 4210073 Y=9×106+9344.1 0.9990 0.25 β-666 221766 451236 892314 1646792 2136554 Y=4×10°+28894 0.9992 0.50 y-666 399850 812356 1635478 3102458 4011763 Y=8×10°+17861 0.9995 0.25 8-666 403054 784631 1548450 3058711 3610237 Y=7×10°+71620 0.9989 0.25 p，p’-DDE 333337 652148 1350244 2651230 3184568 Y=6×10+31264 0.9993 0.60 o，p'-DDT 267113 511426 1143689 2104567 2536120 Y=5×10°+41926 0.9983 0.50 p，p'-DDD 195661 394566 814231 1625789 1914756 Y=4×10+16453 0.9987 0.75 p，p'-DDT 179453 352478 699476 1412356 1804550 Y=4×10-9095.4 0.9998 0.50 由表1可以得出8种六六六、滴滴涕的异构体在 0.05-0.5ug/mL 线性范围内其峰面积呈线性关系，相关系数在0.9983-0.9998之间，表明线形良好，符合准确度的要求。检出限在 0.25-0.75pg/kg 之间。 2.6方法准确度(样品回收率) 为了验证方法的准确度，本论文对样品进行了标准加标回收实验，做2份平行实验，计算平均回收率和标准偏差。结果见表2 表2加标回收率结果 本底浓度 理论加标浓度 检测浓度 回收率(%) 平均回收率 RSD(%) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (%) α-666 ND 0.05 0.05330 0.05282 106.59 105.63 106.11 0.90 B-666 ND 0.05 0.05351 0.05336 107.01 106.73 106.87 0.28 y-666 ND 0.05 0.04960 0.04943 99.20 98.87 99.04 0.34 8-666 ND 0.05 0.05087 101.74 104.33 103.04 2.50 0.05216 p，p'-DDE ND 0.05 0.05087 0.05271 101.74 105.402 103.58 3.55 o，p'-DDT ND 0.05 0.04897 97.94 98.43 98.18 0.51 0.04922 p，p'-DDD ND 0.05 0.05118 102.37 104.88 4.79 0.05369 107.38 P，p'-DDT ND 0.05 0.05308 106.17 107.98 3.35 0.05489 109.78 由表2可以得出在空白样品中添加浓度为 0.05mg/kg 的六六六、滴滴涕混标，两次平行试验平均回收率在98.18-107.98% 之间， RSD 在0.28-4.79%之间，其回收率及精密度均符合标准要求。 2.7方法精密度 精密度是使用特定的分析程序，在受控条件下重复分析均一样品所得的测定值之间的一致程度，检验分析方法的精密度时，通常以标准溶液、实际样品和样品加标3种方法法析样品。本实验采用加标样品做精密度试验。结果见表3 表3标准样品的方法精密度 平行样 1 2 3 4 5 平均值 RSD% a-666 0.01069 0.01073 0.01097 0.01107 0.01134 0.01096 2.42 B-666 0.01123 0.01059 0.01078 0.01119 0.01099 0.010956 2.48 y-666 0.01089 0.01029 0.01084 0.01121 0.01083 0.010812 3.06 8-666 0.0112 0.01112 0.0113 0.011 0.01127 0.011178 1.09 p，p'-DDE 0.01064 0.00996 0.01019 0.01045 0.00983 0.010214 3.28 o，p'-DDT 0.00992 0.00902 0.0105 0.01057 0.00993 0.009988 6.22 p，p'-DDD 0.01129 0.0111 0.01129 0.01059 0.01101 0.011056 2.60 p，p'-DDT 0.01132 0.01118 0.01093 0.01102 0.0105 0.01099 2.84 由表3可以得出：以浓度为 0.11mg/kg 的加标样品连续进样5次，所得进样液浓度(仪器读数)的平均值在0.009988-0.011178 之间， RSD值在1.09-6.22%之间，精密度符合标准要求。 3、结论 本文研究了牛乳中六六六、滴滴涕的残留气相色谱测定方法。根据牛乳的特点采用丙酮加石油醚混合液作为提取液，旋转蒸发浓缩，佛罗里硅土小柱净化。通过加标回收率验证了方法的准确性，重复性实验验证了方法的精密度，结果表明：标准曲线相关系数在 0.9983-0.9998 之间，方法检出限在0.25-0.75ug/kg 之间，平均加标回收率在98.18-107.98之间，相对标准偏差在0.28-4.79%之间，精密度相对标准偏差在 1.09-6.22%之间。回收率、相对标准偏差和精密度都符合相关要求，选取固相萃取装置节省了成本，可作为企业实验室检测牛乳中六六六、滴滴涕的方法。 ( 参考文献 ) [1]阎正，张亚莉，冯天铸等。毛细管气相色谱法测定5种中草药中有机氯农药的残留量。分析化学研究简报，2003，31(1)：95-98 [2]赵京晖，靳宝辉，谢丽琪等.气相色谱-质谱法测定茶叶中的25种有机氯农药残留。色谱，2006， 24(6)：629-632 [3]黄盈煜，谢维平等。茶叶中六种农药残留的气相色谱分析法，中华预防医学杂志，2005，39(6)：416-418 [4] 蒋开年，宋学伟等。气相色谱法测定黄芪甘草中有机氯农药残留量，西南民族大学学报自然科学版，2008，34(1)：120-123 [5]GB/T 5009.162-2008动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定 作者简介： 李飞(1982一)，男，硕士，从事乳制品检验方法研究，邮箱： fox706@163.com；联系方式：0311-67362611，13832114051 本文建立了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱测定方法。 样品用丙酮和石油酪提取， 旋转蒸发仪浓缩， 佛罗里硅土小柱净化后， 用气相色谱仪测定， RTX-5毛细管柱分离， 保留时间定性， 外标法定扭。 标准曲线相关系数在0.9983-0.9998之间，方法检出限在0.25-0.75?g/kg之间， 平均加标回收率在98.18-107.98%之间 ， 相对标准偏差在0.28-4.79%之间 ， 精密度相对标准偏差在1.09-6.22%之间。 结果表明所建立的方法经济、准确、可靠， 适用千牛乳中六六六、滴滴涕的检测。