本文建立了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱测定方法。 样品用丙酮和石油酪提取, 旋转蒸发仪浓缩, 佛罗里硅土小柱净化后, 用气相色谱仪测定, RTX-5毛细管柱分离, 保留时间定性, 外标法定扭。 标准曲线相关系数在0.9983-0.9998之间,方法检出限在0.25-0.75?g/kg之间, 平均加标回收率在98.18-107.98%之间 , 相对标准偏差在0.28-4.79%之间 , 精密度相对标准偏差在1.09-6.22%之间。 结果表明所建立的方法经济、准确、可靠, 适用千牛乳中六六六、滴滴涕的检测。
表1回归方程及检出限 气相色谱检测牛乳中六六六、滴滴涕残留方法研究 李飞、柴彦兵、张耀广、李兴佳、王玉英(石家庄君乐宝乳业有限公司质量管理中心 050221) 摘要:本文建立了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱测定方法。样品用丙酮和石油醚提取,旋转蒸发仪浓缩,佛罗里硅土小柱净化后,用气相色谱仪测定, RTX-5毛细管柱分离,保留时间定性,外标法定量。标准曲线相关系数在 0.9983-0.9998 之间,方法检出限在 0.25-0.75ug/kg 之间,平均加标回收率在98.18-107.98%之间,相对标准偏差在0.28-4.79%之间,精密度相对标准偏差在1.09-6.22%之间。结果表明所建立的方法经济、准确、可靠,适用于牛乳中六六六、滴滴涕的检测。 关键词:气相色谱 牛乳六六六 滴滴涕 Determination of 666 and DDT in milk by Gas chromatography Lifei; chaiyanbing;zhangyaoguang;lixingjia;wangyuying(Shijiazhuang Junlebao dairy co. ltd, Quality Center050221) Abstract : In this paper, a method of Gas chromatography for detection of 666 and DDT in milk was be established:The sample wasextracted with acetone and petroleum ether, Concentrated by Rotary evaporation instrument, then purified by Silica SPE, finallydetected by Gas chromatography, it was separated by RTX-5 capillary column, qualitatived by Retention time and Quantitative byexternal standard method. The correlation coefficient of the standard curve in 0.9983-0.9998, the detection limit of the method in0.25-0.75ug/kg, the average recoveries in 98.18-107.98%,the relative standard deviation in 0.28-4.79%.The relative standarddeviation of precision in 1.09-6.22%. The results show that the established method is economic, accurate and reliable, applicable toDetermination of 666 and DDT in milk. Key words: Gas chromatography'Imilk666 DDT 六六六、滴滴涕属于有机氯农药中的两类,常见的各有4种异构体,分别为a-666、β-666、y-666、8-666及p.p'-DDE、o,p’-DDT、p.p’-DDD、p,p'-DDT。都属于广谱杀虫剂,具有胃毒、触杀和熏蒸三中作用方式。效力强而持久,属高残留农药品种,其中以 y-666 为比较重要的异构体,是杀虫剂的活性成分,俗称林丹。它们在防治蝗虫、稻螟虫、小麦吸浆虫等农业害虫和蚊、蝇、臭虫等卫生害虫以及防治疟疾发挥过比较重要的作用。但由于该类农药具有半衰期长,不易分解和亲脂性等特点,近年来害虫抗药性不断增强,残留污染严重",并通过食物链进入人体在人体脂肪内长期蓄积,扰乱人体的荷尔蒙分泌, 2001年的《流行病学》杂志提到,科学家通过抽查24名16到28岁墨西哥男子的血样,首次证实了人体内 DDT 水平升高会导致精子数目减少。除此以外,新生儿的早产和初生时体重的增加也和 DDT 有某种联系,已有的医学研研还表明了它对人类的肝脏功能和形态有影响,并有明显的致癌性能。 我国政府已于1983年禁止使用此两种农药,但由于其半衰期长和不易分解的特点,可能在环境中还有残留,并通过各 种方式进入生物体内,《GB2763-2012食品中农药最大残留限量》中明确规定牛乳中六六六、滴滴涕的限量值为0.02mg/kg。目前食品中有机氯农药残留一般用气相色谱电子捕获检测器法检测。牛乳由于其基质较复杂造成前处理过程较难,本文研究 了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱检测方法,并通过加标回收率、精密度等指标验证了其科学有效性。 1、实验部分 1.1仪器与试剂 气相色谱仪:岛津 GC-2010;电子天平;旋转蒸发仪;固相萃取装置;氮吹仪。丙酮、石油醚(30-60℃)、乙酸乙酯、环己烷、氯化钠、无水硫酸钠。 1.2样品处理 1.2.1提取:称取 20g (精确到0.01g) 牛乳于200mL具塞三角瓶中,加入40mL 丙酮, 振摇 30min 后, 加入6g氯化钠,充分混匀。再加入30mL 石油醚,振摇 30min。静置分层后,将有机相全部转移至100mL 具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥,并量取 35mL于旋转蒸发瓶中,旋转蒸发浓缩至1mL,加入2mL乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液再浓缩,如此重复3次,浓缩至约1mL,用乙酸乙酯-环己烷(1+1)洗涤旋转蒸发瓶数次,将洗涤液合并至试管中,定容至10mL,待净化。 1.2.2净化:采用佛罗里硅土小柱净化,安装好固相萃取装置,打开真空泵,设定真空压力为254mmHg, 每根小柱加4mL石油醚,慢慢打开柱阀让正己烷通过吸附层,赶出气泡、关上阀门,溶剂浸泡吸附层约 5min 后,慢慢打开柱阀待石油醚通过小柱,于吸附剂上层含1毫米溶剂时关闭柱阀。不得使小柱淋干。转移提取液至小柱中,打开柱阀,使提取液以大约 2mL/min的流速通过吸附剂,不得使小柱淋干。用 10mL 丙酮/石油醚(10/90, v/v) 洗脱柱子,打开真空泵调节泵压至254mmHg,让溶剂浸泡吸附层约1min后,慢慢地打开柱阀,收集洗脱液。 1.2.3上机:将收集到的洗脱液在50℃下氮气吹至近干,用石油醚准确定容至1mL, 上气相色谱测定。 1.3标准溶液的配制 六六六、滴滴涕混标浓度:50ug/mL 分别吸取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mL标准溶液正容烷定容至100mL容量瓶中,得到六六六、滴滴涕标准溶液浓度分别为 0.05、0.1、0.2、0.4、0.5ug/mL。 1.4 GC 仪器条件 色谱谱: Rtx-5毛细管柱[30mx0.25mm(内径)x0.25um];进样口口度:260℃; 升温程序:初始柱温60℃,保持 1min, 以 30℃/min 升温至 190℃,保持 1mim, 再以 5℃/min 升温至230℃,保持 10min,再以10℃/min 升温至250℃, 保持 2min; 载气:氨气(纯度≥99.999%),线速度25cm/s; 进样方式:不分流进样;进样量:1pL. 检测器: ECD, 温度:300℃, 电流:0.5nA。 2、 结果与讨论 2.1提取液的选择 食品中有机氯农药的提取一般采用正己烷或石油醚,对于含水量较低的样品可直接采用正己烷或石油醚,而牛乳中含水量较高,需加入极性溶剂丙酮组成的混合溶剂提取,本试验采取丙酮:石油醚为 4:3 的混合液提取,效果良好。 2.2前处理优化 牛乳中含有大量蛋白质,加入丙酮提取液后形成乳浊液,本实验加入氯化钠,利用盐析的原理使水层与有机层可以有效分离41,有利于后面净化步骤。 2.3净化方法的选择 国标中采取凝胶色谱系统(GPC)净化,而凝胶色谱净化仪器较昂贵,凝胶柱使用有机溶剂较多,成本较高,不适用于一般企业使用,固本实验采用了固相萃取法进行净化。比较了佛罗里硅土、中性氧化铝及活性炭小柱的净化效果,综合回收率及成本因素,最终在净化时选取佛罗里硅土小柱。 2.4色谱柱的选择 本实验采取的是岛津随机配备的标准 Rtx-5(固定相为5%的苯基十95%二甲基聚硅氧烷)熔融弹性石英毛细管柱,与之类似固定相的还有 DB-5、HP-5等型号柱子,都适用于农药残留的检测,六六六、滴滴涕标准溶液色谱图见下图。 从图中可以看出,8种异构体能在26分钟内有效的分开,峰型尖锐,对称性好,出峰附近都没干扰峰,各峰间间隔适宜,是理想的色谱检测条件。 2.5标准曲线和检出限(LOD) 取8种六六六、滴滴涕的异构体混合标准系列溶液,按照上述第1.4节所述仪器条件进行分析,外标法定量。样1pL,以峰面积Y对浓度X(ug/mL)进行线性回归,回归方程和相关系数见表1. 最低检出限按下面公式进行计算,详见表1 CL=3Nd*C/(H*V) CL:最低检测限(mg/kg); C:标准液的浓度 ug/mL; Nd:基线噪声峰高; H:标准液色谱峰高;V:进样体积1pL。 浓度(ug/mL) 0.05 0.1 0.2 0.4 0.5 回归方程 相关系 检出限 数(R) (ng/kg) a-666 440455 835679 1723787 3556892 4210073 Y=9×106+9344.1 0.9990 0.25 β-666 221766 451236 892314 1646792 2136554 Y=4×10°+28894 0.9992 0.50 y-666 399850 812356 1635478 3102458 4011763 Y=8×10°+17861 0.9995 0.25 8-666 403054 784631 1548450 3058711 3610237 Y=7×10°+71620 0.9989 0.25 p,p’-DDE 333337 652148 1350244 2651230 3184568 Y=6×10+31264 0.9993 0.60 o,p'-DDT 267113 511426 1143689 2104567 2536120 Y=5×10°+41926 0.9983 0.50 p,p'-DDD 195661 394566 814231 1625789 1914756 Y=4×10+16453 0.9987 0.75 p,p'-DDT 179453 352478 699476 1412356 1804550 Y=4×10-9095.4 0.9998 0.50 由表1可以得出8种六六六、滴滴涕的异构体在 0.05-0.5ug/mL 线性范围内其峰面积呈线性关系,相关系数在0.9983-0.9998之间,表明线形良好,符合准确度的要求。检出限在 0.25-0.75pg/kg 之间。 2.6方法准确度(样品回收率) 为了验证方法的准确度,本论文对样品进行了标准加标回收实验,做2份平行实验,计算平均回收率和标准偏差。结果见表2 表2加标回收率结果 本底浓度 理论加标浓度 检测浓度 回收率(%) 平均回收率 RSD(%) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (%) α-666 ND 0.05 0.05330 0.05282 106.59 105.63 106.11 0.90 B-666 ND 0.05 0.05351 0.05336 107.01 106.73 106.87 0.28 y-666 ND 0.05 0.04960 0.04943 99.20 98.87 99.04 0.34 8-666 ND 0.05 0.05087 101.74 104.33 103.04 2.50 0.05216 p,p'-DDE ND 0.05 0.05087 0.05271 101.74 105.402 103.58 3.55 o,p'-DDT ND 0.05 0.04897 97.94 98.43 98.18 0.51 0.04922 p,p'-DDD ND 0.05 0.05118 102.37 104.88 4.79 0.05369 107.38 P,p'-DDT ND 0.05 0.05308 106.17 107.98 3.35 0.05489 109.78 由表2可以得出在空白样品中添加浓度为 0.05mg/kg 的六六六、滴滴涕混标,两次平行试验平均回收率在98.18-107.98% 之间, RSD 在0.28-4.79%之间,其回收率及精密度均符合标准要求。 2.7方法精密度 精密度是使用特定的分析程序,在受控条件下重复分析均一样品所得的测定值之间的一致程度,检验分析方法的精密度时,通常以标准溶液、实际样品和样品加标3种方法法析样品。本实验采用加标样品做精密度试验。结果见表3 表3标准样品的方法精密度 平行样 1 2 3 4 5 平均值 RSD% a-666 0.01069 0.01073 0.01097 0.01107 0.01134 0.01096 2.42 B-666 0.01123 0.01059 0.01078 0.01119 0.01099 0.010956 2.48 y-666 0.01089 0.01029 0.01084 0.01121 0.01083 0.010812 3.06 8-666 0.0112 0.01112 0.0113 0.011 0.01127 0.011178 1.09 p,p'-DDE 0.01064 0.00996 0.01019 0.01045 0.00983 0.010214 3.28 o,p'-DDT 0.00992 0.00902 0.0105 0.01057 0.00993 0.009988 6.22 p,p'-DDD 0.01129 0.0111 0.01129 0.01059 0.01101 0.011056 2.60 p,p'-DDT 0.01132 0.01118 0.01093 0.01102 0.0105 0.01099 2.84 由表3可以得出:以浓度为 0.11mg/kg 的加标样品连续进样5次,所得进样液浓度(仪器读数)的平均值在0.009988-0.011178 之间, RSD值在1.09-6.22%之间,精密度符合标准要求。 3、结论 本文研究了牛乳中六六六、滴滴涕的残留气相色谱测定方法。根据牛乳的特点采用丙酮加石油醚混合液作为提取液,旋转蒸发浓缩,佛罗里硅土小柱净化。通过加标回收率验证了方法的准确性,重复性实验验证了方法的精密度,结果表明:标准曲线相关系数在 0.9983-0.9998 之间,方法检出限在0.25-0.75ug/kg 之间,平均加标回收率在98.18-107.98之间,相对标准偏差在0.28-4.79%之间,精密度相对标准偏差在 1.09-6.22%之间。回收率、相对标准偏差和精密度都符合相关要求,选取固相萃取装置节省了成本,可作为企业实验室检测牛乳中六六六、滴滴涕的方法。 ( 参考文献 ) [1]阎正,张亚莉,冯天铸等。毛细管气相色谱法测定5种中草药中有机氯农药的残留量。分析化学研究简报,2003,31(1):95-98 [2]赵京晖,靳宝辉,谢丽琪等.气相色谱-质谱法测定茶叶中的25种有机氯农药残留。色谱,2006, 24(6):629-632 [3]黄盈煜,谢维平等。茶叶中六种农药残留的气相色谱分析法,中华预防医学杂志,2005,39(6):416-418 [4] 蒋开年,宋学伟等。气相色谱法测定黄芪甘草中有机氯农药残留量,西南民族大学学报自然科学版,2008,34(1):120-123 [5]GB/T 5009.162-2008动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定 作者简介: 李飞(1982一),男,硕士,从事乳制品检验方法研究,邮箱: fox706@163.com;联系方式:0311-67362611,13832114051 本文建立了牛乳中六六六、滴滴涕的气相色谱测定方法。 样品用丙酮和石油酪提取, 旋转蒸发仪浓缩, 佛罗里硅土小柱净化后, 用气相色谱仪测定, RTX-5毛细管柱分离, 保留时间定性, 外标法定扭。 标准曲线相关系数在0.9983-0.9998之间,方法检出限在0.25-0.75?g/kg之间, 平均加标回收率在98.18-107.98%之间 , 相对标准偏差在0.28-4.79%之间 , 精密度相对标准偏差在1.09-6.22%之间。 结果表明所建立的方法经济、准确、可靠, 适用千牛乳中六六六、滴滴涕的检测。
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