DNA 样品中氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA )检测方案(抗体 试剂盒)

氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸 实验原理: 氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剥离染色质上的蛋白质（Kondo 1979)。因此，质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀，从而可通过低速离心加以分离（实例请见Kondo et al. 1991)。 实验材料:DNA 样品 试剂、试剂盒:乙醇 异丙醇 LiCl 乙酸钠 TE 仪器、耗材 :Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子 操作步骤: 一、材料 1. 缓冲液和溶剂 乙醇，异丙醇，LiCl ( 4 mol/L)，乙酸钠（3mol/L, pH 5.2)，TE ( pH 8.0)，含有浓度为 20 μg/ml RNase A 的 TE ( pH 8.0)。 2. 核酸和寡核苷酸 DNA 样品，CsCl 密度梯度离心纯化。 3. 离心机和转子 Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子 二、方法 1. 测定质粒制备物体积，加入 0.1 体积的 3 mol/L 乙酸钠（pH 5.2 ) 和 2 倍体积的乙醇，置混合物于 4℃ 30 min。 2. 于 4℃ 以大于 10000 g ( > 9000 r/min, 用 Sorvsll SS-34 转子 ) 的转速离心 15 min 回收核酸沉淀，尽可能多地倾去上清液。而后打开管盖置于工作台上数分钟以蒸发乙醇。 3. 用含有 RNase A ( 浓度 ≥ 100 μg/ml ) 的 1 ml TE ( pH 8.0) 溶解湿的核酸沉淀。 4. 加入 3 ml 4 mol/L LiCl 溶液，置于冰上 30 min。 5. 于 4℃ 以 12000 g ( 10000 r/min，用 Sorvsll SS-34 转子）离心 15 min, 从沉淀的核酸中分离 DNA 质粒。 6. 将上清液转至一新的离心管，加入 6 ml 异丙醇，室温放置 30 min 以沉淀质粒 DNA。 7. 于 4℃ 以 12000 g ( 10000 r/min, 用 Sorvsll SS-34 转子）离心 15 min, 回收沉淀的质粒 DNA。 8. 小心倾去上清液，加入 5~10 ml 70% 乙醇，简单振荡离心管，而后于 4℃ 以 12000 g 离心 10 min。 9. 小心倾去上清液，打开管盖置于工作台上数分钟直至乙醇蒸发殆尽。 10. 用 TE ( pH 8.0 ) 溶解湿的 DNA 沉淀。 实验原理:氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剥离染色质上的蛋白质（Kondo 1979)。因此，质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀，从而可通过低速离心加以分离（实例请见Kondo et al. 1991)。 实验材料:DNA 样品试剂、试剂盒:乙醇  异丙醇  LiCl  乙酸钠  TE仪器、耗材   :Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子  操作步骤:一、材料 1. 缓冲液和溶剂 乙醇，异丙醇，LiCl ( 4 mol/L)，乙酸钠（3mol/L, pH 5.2)，TE ( pH 8.0)，含有浓度为 20 μg/ml RNase A 的 TE ( pH 8.0)。 2. 核酸和寡核苷酸 DNA 样品，CsCl 密度梯度离心纯化。 3. 离心机和转子 Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子