带鱼中水解氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

DKSH Biochrom30+氨基酸分析仪检测带鱼中水解氨基酸 摘要： 以带鱼为原料，使用 Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明带鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为 24921.217mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.62%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的 39.01%。 -、样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，浓度≥36%，优级纯 1、2 6mol/L盐酸：取500mL盐酸加水稀释至1000mL，混匀。 1、3 水：去离子水 1、4 苯酚：须重蒸 1、5 17 种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 2、 前处理设备 1)分析天平：感量分别为 0.0001g 和0.00001g。 2)水解管：耐压螺盖玻璃试管，体积为25mL 3)匀浆机。 )无油真空泵 5)干浴水解浓缩仪 6)移液管 7))0.22um 滤膜 3、 样品制备(参考国参 GB 5009.124-2016) 原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打 成肉糜，于-18C冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。 4、 试样水解 称取含蛋白7.5-25mg的试沐，加入水解管中，加入15mL6mol/L 盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻 3min~5min，接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近OPa)，然后充入氮气，重复抽真空-充入氮气3次后，在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110℃水解 22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°℃吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入 3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解，振荡混匀后，吸取溶液通过0.22 u m 滤膜后，转移至仪器进样瓶，为样品测定液，供仪器测定用。 二、分析方法方述(Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1)色谱柱： Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱，4.6×20cm 2)分离程序： NO. Time Temp Buffer Pump Nin Rec Comman ds 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h 1 2 00：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Reset h 3 01：00 48 1 35.0ml/ ON OFF Load h 4 06：40 48 1 35.0ml/ ON ON h 5 13：00 52 2 35.0ml/ ON ON h 6 01：00 52 5 35.0ml/ ON ON h 7 16：00 95 5 35.0ml/ ON ON h 8 04：00 95 6 35.0ml/ ON ON h 9 04：00 95 1 35.0ml/ ON ON 10 09：00 48 1 h 43.0ml/ OFF OFF h 11 02：00 48 1 35.0ml/ ON OFF h End 3)运行时间：经分析时间+再生时间 57min 4)反应单元温度：135°C。 5)检测波长：570nm、440nm同时检测。 三、样品中氨基酸含量的计算 样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算： 式中： ci -样品测定液氨基酸i的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； Ai――—试样测定液氨基酸i的峰面积； As __ _-氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积； CS -氨基酸标准工作液氨基酸 s 的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。 试样中各氨基酸的含量按式(3)计算： 式中： Xi -试样中氨基酸i的含量，单位为克每百克(g/100g)； ci―――试样测定液中氨基酸i 的含量，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)； F - -稀释倍数； ———试样水解液转移定容的体积，单位为毫升(mL)； M———氨基酸i的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)； m———称样量，单位为克(g)； 10°—―—将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数； 00-———换算系数。 附、带鱼分析图谱及做样结果 Pk # Name Retention Time Area ESTD concentration(mg/100g) 9 Asp 7.633 5386296 2560.917 10 Thr 9.499 2701933 1138.221 11 Ser 10.433 2839402 1015.988 12 Glu 12.799 7889615 3974.412 14 Gly 19.632 6059300 1534.460 15 Ala 20.932 4947902 1651.632 17 Val 22.799 2938908 1255.981 19 Met 24.632 1466098 731.048 20 Ile 26.132 2379608 1209.588 21 Leu 27.132 4614866 2112.535 23 Tyr 30.131 1376924 916.469 24 Phe 31.098 1764003 992.320 27 His 36.298 1275529 601.317 28 Lys 38.131 5450088 2434.223 32 Arg 46.030 2966922 1673.977 Totals 54057394 23803.088 2 Pro 14.599 1087797 1118.039 Totals 1087797 1118.039 选择大昌华嘉，就是选择仪器应用专家Think Asia. Think DKSH.www.dksh-instrument.cn 电话： 邮箱： ins.cn@dksh.com 以带鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明带鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为24921.217mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.62%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.01%。