血液中样品分离检测方案(色谱配件)

成就中国版血液制品巨头“CSL”，纳微能为您做什么? 摘要：纳微专业血液制品分离纯化，期待与您合作。 血液制品是全球人类临床使用和必备的一线用药，其品种的多样性和质量的高低会直接影响医疗救助水平。此前有报道称截至2015年，我国由于存在年投浆量少、分离技术起步晚、研发力度不足等原因，导致血液制品仅能生产近10个品种，远少于国外发达国家的28个品种，而我国目前需求量最大的白蛋白、静脉注射用免疫球蛋白、凝血因子VII、 0-1蛋白酶抑制剂(API)、纤维蛋白原和抗凝血酶ⅢI这6个品种中，凝血因子VII和 API 此前对国外进口的依赖程度仍非常高。因此，我国血液制品行业一直以来都面临着产品品种偏少、产量低、血浆利用率低等问题。 对标国际，我们离 CSL 还有多远? CSL 公司是全球最大的血液制品公司，总部位于澳大利亚，是全球血液制品巨头，其营收占全球血液制品行业的20%，在过去几十年里，因治疗和预防用血液制品的大量研制与应用，使原本无法治愈和控制的疾病获得了有效遏制，因此世界各国对其品种和工艺进行了深入的研发，如果我们按照血液制品不同作用将其分为人血白蛋白、免疫球蛋白类、凝血因子类、特殊蛋白及微量蛋白和纤维蛋白粘合剂五大类的话，国际和国内的市场占有率数据情况见表1，从中可以明显看出，各类品种的市场占有率迥异，然而造成这种现象的原因除了市场供需因素外，还有一个重要的因素就是取决于分离纯化技术。 表1国际与国内市场五类血液制品市场占有率 项目 人血白蛋白日 免疫球蛋白类 凝血因子类 特殊及微量蛋白 纤维蛋白粘合剂 国际市场 13% 43% 17% 27% 国内市场 75% 20% 5% *资料来源：《中国输血杂志：世界血浆蛋白制品的市场与前景》 事实上，在血液制品方面，放眼全球除了美国能够实现本国的供应，其他国家都或多或少需要进口，并且因为美国采浆量占全球采浆量的比重高达70%左右，半数可满足本国需求，半数可供出口，所以全球血制品价格体系基本受美国市场决定。尽管我们与国外差距甚大，但同时也意味着我们的市场潜力更大，有人甚至直言这就是一个几乎看不到天花板的细分行业，并且早在2001年我国政府为了遏制艾滋病通过血液传染，对血液制品公司实行了牌照管理，不再审批相关许可牌照，这就进一步造成了牌照的稀缺性，意味着在血液制品行 业就那么几个玩家。 表2国内血液制品企业产品线情况 类别 上海莱士 天坛生物 华兰生物 博雅生物 上海生物所 成都蜀阳 广东双林 白蛋白 √ √ √ √ √ √ √ 静丙 √ √ 肌丙 √ √ 乙免 √ √ √ √ √ PCC √ 因子VII √ 破免 √ √ √ √ 纤胶 凝血酶 狂免 √ √ √ 纤原 √ *资料来源：中国产业信息网 随着分离工艺的发展，层析技术已越来越多地应用到血浆蛋白的分离和提纯中，其中应用最广泛的是离子交换介质和亲和层析介质。亲和介质是建立在目标蛋白与固定化配基之间特异性、可逆相互作用基础上的蛋白分离技术，由于对目的蛋白具有高选择性和高收率等特点，亲和介质在病毒去除上也有很好的潜力。 从多年实践来看，将层析技术应用于血液制品的分离纯化以来，我们能够从根本上改变原有技术分离时间长、步骤繁琐、分离效果差、产品种类少、自动化程度低等缺点，有效提高了原料血浆的利用率及使用安全性，丰富了产品种类。从血浆蛋白如白蛋白类的实际纯化情况来看，阴离子交换层析在血浆蛋白纯化工艺中应用广泛，纳微的离子交换层析介质如UniDEAE 和 UniGel-80Q 等就很适宜这方面的纯化，如结合低温乙醇法，在丙种球蛋白纯化后期用阴离子交换介质 (UniDEAE或 UniGel-80Q等)吸附二聚体等杂质提高纯度；白蛋白纯化使用 UniGel-80Q 阴离子交换吸附 PKA、微量IgG 和聚体等；凝血因子VII纯化用UniGel-80Q可以增加载量和收率。 表3血液制品层析纯化应用情况 *资料来源：《微生物学免疫学进展》 纳微层析介质在血液制品纯化案例简介 在血液制品的实际分离纯化中，总液体体积受以下因素影响：上样、平衡、洗脱、再生的流速；分离成分的数目；每一步缓冲液的选择会影响分离的各个成分的收率和纯度；两个成分峰间距(会对产出的成分的纯度和活性有影响)；柱床高度等。因此，在最后放大生产规模时，综合考虑缓冲液体积、产率、纯度，来设计柱高、直径和洗脱流速等均是必须考虑的工艺因素，尤其是柱高和流速更加需做进一步的研究。 我们认为，增加柱床高度有利于提高工艺的耐用性，因为循环时间增加有利于降低因系统中阀门和管道等引起的死腔体积所带来的交叉污染的风险。另外因为层析柱的混合区将在工艺放大中发生改变(提高混合区的比例)， 而在 50cm 柱高下，柱下部的混合区域相对于总的扩张床高度的比例会减少，故会显著降低洗脱模式改变引起的风险。显而易见的是，相对于传统“软胶”基质的层析介质而言，纳微研发生产的新型“硬胶”基质层析介质在可装填更高柱高、更大操作压力和线性流速、更高动态结合载量等诸多方面拥有着无可比拟的优势。 表4纳微科技单分散层析介质血液制品纯化推荐 抗凝血酶Ⅲ 肝素亲和 Bio Heparin 静脉免疫球蛋白 离子交换 UniGel-80Q、UniGel-80DEAE 凝血因子VII 离子交换 UniGel-80Q、NanoGelMacro-50Q 凝血酶原复合物 离子交换 UniGel-80DEAE 凝血因子IX 离子交换/肝素亲和 UniGel-80DEAE/ Bio Heparin *欲知更多应用案例信息，欢迎直接联系我们。 纳微 UniGel-80Q 纯化静丙工艺 设备：AKTA Avant25 1血浆原样23 样品：血浆8%辛酸和20mM辛酸钠处理，离心上清 辛酸/辛酸钠处理后样品 Buffer A：10mM柠檬酸，pH5.2 ：LUniGel 80Q流穿样品 Buffer B： 1M氯化钠 in Buffer A 4： column wash 5： Elution 层析柱：1ml UniGel 80Q，2.5cmPP柱 6：标准品 流速：0.3ml/min(3.3min保留) 纳微UniGel-80Q纯化凝血因子IX工艺 样品：血浆离心上清，经过 A50 DEAE 纯化，50ml，20mg/ml 总蛋白层析柱： Tricorn 10/10，UniGel 80DEAE 10ml 流速： 3ml/min Buffer A：20mM 柠檬酸， pH7.0 Buffer B： 1M NaCl in Buffer A 洗脱： 0-100%B， 25CV CIP： 0.5M NaOH，2CV 收集：4管共 60ml 回收率：88% 封面： 血液制品是全球人类临床使用和必备的一线用药，其品种的多样性和质量的高低会直接影响医疗救助水平。此前有报道称截至2015年，我国由于存在年投浆量少、分离技术起步晚、研发力度不足等原因，导致血液制品仅能生产近10个品种，远少于国外发达国家的28个品种，而我国目前需求量最大的白蛋白、静脉注射用免疫球蛋白、凝血因子Ⅷ、 α-1蛋白酶抑制剂（API）、纤维蛋白原和抗凝血酶Ⅲ这6个品种中，凝血因子Ⅷ和API此前对国外进口的依赖程度仍非常高。因此，我国血液制品行业一直以来都面临着产品品种偏少、产量低、血浆利用率低等问题。