奶酪中蛋白检测方案(定氮仪)

APPLICATION NOTEF&F-K-006-2013/A1 CASEIN DETERMINATION IN MILKKJELDAHL METHOD 根据凯式定氮方法测定牛奶中的酪蛋白 参考文献： AOAC 998.05 牛奶中非酪蛋白氮成分； AOAC 991.20 牛奶中总含氮量； ISO 8968-4 FIL 20-4 ： 2001 非酪蛋白氮成分 经由 VELP Scientifica DKL 20 Automatic 凯式定氮消解单元(代码 S30100210)和 UDK 159 Automatic凯式定氮蒸馏滴定系统(代码F30200150)测定。 介绍 牛奶蛋白是最古老、摄入最广的食品类蛋白质。目前，人们对这些(蛋白质)非常感兴趣，比如营养学和技术应用领域。酪蛋白是一种参与乳酪和发酵乳的生产的蛋白质系列。它们不仅是乳制品生产中非常重要的含氮化合物，而且是一种医药药加剂，同时在化妆品、油漆和粘合剂中都有其技术用途。酪蛋白含量是由总量(Ntot)和非酪蛋白氮 (NCN)的差异决定的。遵循本文所述流程， 从牛奶获得。 凯式定氮法测定牛奶中酪蛋白含量 凯式定氮法由于其高准确度，良好的重现性以及简单的操作，成为当今测定食品和饲料中氮和蛋白质含量的最常用的方法。现代的Kjeldahl法是在，较高的消解温度下(400°℃以上)，硫酸和硫酸盐的沸腾混合物中催化支持有机物质矿化的过程。此过程中，有机结合态氮转化为硫酸铵。碱化的消解液可释放氨，氨气经蒸馏水定量蒸馏后，用滴定法测定。 样本 液体高品质牛乳、全巴氏蛋白标记值： 3.35g/100 ml 文献中酪蛋白含量：2.66% 样品准备 牛奶中非酪蛋白氮(NCN)的测定是计算牛奶中酪蛋白含量所必需的。NCN经牛奶分离和过滤获得。 分离和过滤程序所用的化学品和材料 用去离子水将醋酸溶液10%-10毫升稀释至100毫升 用去离子水将醋酸钠溶液1M-8，2克醋酸钠稀释至100毫升 无氮滤纸，高速下过滤 流程 牛奶中NCN的测定包括以下步骤： -用VELP磁力搅拌器以700转转速将烧杯中牛奶搅拌60秒。 -酪蛋白的沉淀和过滤 -用DKL20消解过滤液(过滤物) -用UDK 159对样品进行蒸馏和滴定 -计算(参考下文公式) 将20毫升的牛奶预热在20℃， 倒入50毫升容量瓶中，加入20毫升去离子水。然后，将烧瓶置于37°C的开放式循环浴池(OCB，代码F 40300240)中30分钟。然后，加入2毫升醋酸溶液(10%)，搅拌混合，让它保持约10分钟。再加入2ml醋酸钠溶液1M，让混合物冷却至20°C。并注入去离子水至校准标记。然后通过滤纸过滤，收集整个滤液(过滤物)。 样本消解 用吸液管将20毫升的滤液放入250毫升的试管(代码A00000144). 在每个试管中添加： 2片催化剂CM(代码CT0006650；3.5gK2SO4， 0.1gCuSO45H2OMissouri) 4片消泡片S(编号： CT0006600) 15毫升浓硫酸(96-98%)5毫升过氧化氢(~30%) 准备一些空白，装置所有的化学品，样品除外。 将消解装置连接到适当的抽吸泵(JP代码： F30620198)和烟雾中和系统(SMS洗涤器代码F307C0199)，以中和在消化阶段产生的酸性烟雾。消解样本，在“Customizable Methods (可定制方法)”中设置以下过程：150℃15分钟+200℃45分钟+300℃15分钟+420℃60分钟。 蒸馏和滴定 让试管冷却到50-60°C. 通过执行菜单系统中的自动检查和清洗程序，调试UDK 159单元。 选择预定义方法n°1提取样本： H2O(稀释水)：50毫升 H2SO4(0.1N)作滴定液 氢氧化钠(32%)：70毫升 蛋白质系数：6.38 H3BO3(含4%指示剂)：30毫升 在UDK 159设置中，最终结果设置为mgN和%N的测量单位，以及样本数量“ml”. 蒸馏和滴定分析时间：每次测试4分钟以上。 典型结果 非酒蛋白氮(NCN)的结果以氮的百分比计算，用滤液体积(V滤液)乘以0，4。它们基于以下公式： NCN%= mg N /[(G milk/V sol) x 1000 xV filtrate]x 100 G milk = milk weight 牛奶质量(20g) V sol=milk solution containing all the chemicals necessary for separating， filled up to volume (50 ml) 含分离所需化学物质的牛奶溶液，加满到50 ml V filtrate滤液体积= filtrate used to perform 1 analysis (ml)用于进行1ml分析的滤液 对全乳校正系数0.994(半脱脂乳的校正系数为0.998)， (相乘后)输出了所得结果。酪蛋蛋的计算考虑到了测定全乳中0.525%的总氮含量。(关于Ntot，见应用说明“根据Kjeldahl法测定牛奶中的N/蛋白质”) Casein酪蛋白%=6.38x(%Ntot-%NCN) Filtrate quantity滤液体积(ml) NCN %* Casein 蛋蛋白% 20.000 0.108 2.658 20.000 0.109 2.653 20.000 0.110 2.646 Average平均±SD% 0.109±0.001 2.652±0.006 RSD%** 0.923 0.243 用含有28 mg氮的5ml标准甘氨酸溶液(3%)作为参比物质，验证整个流程。所得的回收率降至预期范围：98%and 102%。 结论 所得结果可靠，符合预期值：相对标准偏差低(RSD<1%)，重现性好。 用DKL 20 和 UDK 159操作， 使用 Kjeldahl 方法的优点有： 高准确度和重现性 高效率 全球官方推荐方法 简单可靠的方法 省时 负担得起的设备费用 ● 适中的操作成本 析欧科技有限公司联系电话：联系电话：址： www.coanalysis.com 介绍牛奶蛋白是最古老、摄入最广的食品类蛋白质。目前，人们对这些（蛋白质）非常感兴趣，比如营养学和技术应用领域。酪蛋白是一种参与乳酪和发酵乳的生产的蛋白质系列。它们不仅是乳制品生产中非常重要的含氮化合物，而且是一种医药添加剂，同时在化妆品、油漆和粘合剂中都有其技术用途。酪蛋白含量是由总氮(Ntot)和非酪蛋白氮 (NCN)的差异决定的。遵循本文所述流程，从牛奶获得。凯式定氮法测定牛奶中酪蛋白含量凯式定氮法由于其高准确度，良好的重现性以及简单的操作，成为当今测定食品和饲料中氮和蛋白质含量的最常用的方法。现代的Kjeldahl法是在，较高的消解温度下（400 °C以上），硫酸和硫酸盐的沸腾混合物中催化支持有机物质矿化的过程。此过程中，有机结合态氮转化为硫酸铵。碱化的消解液可释放氨，氨气经蒸馏水定量蒸馏后，用滴定法测定。样本液体高品质牛乳、全巴氏蛋白标记值：3.35g/100 ml文献中酪蛋白含量：2.66%样品准备牛奶中非酪蛋白氮(NCN)的测定是计算牛奶中酪蛋白含量所必需的。NCN经牛奶分离和过滤获得。