细胞样品中划痕实验检测方案(化学试剂)

细胞划痕实验 细胞划痕实验可应用于：（1）检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力；（2）研究细胞基质和细胞间相互作用对细胞迁移的影响。 实验原理: 创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。 实验材料: 细胞样品 试剂,试剂盒:无血清培养基 PBS 仪器耗材: 6孔板 marker笔 直尺 枪头 实验步骤: 一.准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内） 二.流程： 1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。 3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。 4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。 下面是照片，细胞NIH3T3 0h (​http:​/​​/​img.dxycdn.com​/​upload​/​2008​/​07​/​01​/​30351423.jpg" \t "_blank​) 6h (​http:​/​​/​img.dxycdn.com​/​upload​/​2008​/​07​/​01​/​58775614.jpg" \t "_blank​) 12h (​http:​/​​/​img.dxycdn.com​/​upload​/​2008​/​07​/​01​/​94070374.jpg" \t "_blank​) 24h (​http:​/​​/​img.dxycdn.com​/​upload​/​2008​/​07​/​01​/​40542852.jpg" \t "_blank​) 注意事项: 1.划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。 2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。 细胞划痕实验可应用于：（1）检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力；（2）研究细胞基质和细胞间相互作用对细胞迁移的影响。 实验原理:创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。 实验材料: 细胞样品 试剂,试剂盒:无血清培养基  PBS 仪器耗材: 6孔板marker笔直尺枪头 实验步骤:一.准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内） 二.流程： 1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。 3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。 4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。 下面是照片，细胞NIH3T3