猪肉中西马特罗检测方案(液相色谱仪)

固相萃取净化以及三重串联四极杆液质联用仪用于猪肉中β2受体激动剂的检测 使用安捷伦 BondElut PCX 固相萃取柱，安捷伦Poroshell 1120液相色谱柱以及三重串联四极杆液质联用仪 应用简报 食品安全 作者 摘要 Andy Zhai 安捷伦科技有限公司 英伦路412号 外高桥保税区 上海，200131 中国 建立了一种同时分析猪肉中11种G2受体激动剂残留——克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、沙美特罗、普萘洛尔、妥洛特罗、西马特罗、马布特罗、马喷特罗和齐帕特罗的方法，并对方法进行了验证。样品中的待测物用液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)法制备，然后用液相色谱-三重串联四极杆质谱进行定量分析，采集模式是电喷雾正离子多反应监测模式。本方法对猪肉样品中11种G2受体激动剂均获得了 pg/g 水平的检测限(LOD)，动态校准范围为 0.25-5ng/g，总体回收率为82%-105%，相对标准偏差 (RSD)为1.6%-8.4%。 前言 2受体激动剂是一种在肉类生产中违法使用的生长促进剂，能提高瘦肉率。它们是一种代谢调节剂，能将通常用于产生脂肪的能量转换成产生瘦肉的能量。最近，由于猪肉中高浓度J2受体激动剂(瘦肉精)导致的中毒事件时有发生。本应用使用安捷伦 Bond ElutPlexa PCX SPE 柱从猪肉中提取和富集11种G2受体激动剂，然后用 LC-MS/MS 进行定量分析。表1是11种G2受体激动剂的化合物物和结构。 表1.11种β2受体激动剂的化合物名和结构 化合物 CAS号 结构 表1.11种G2受体激动剂的化合物名和结构(续) 化合物 CAS号 结构 实验 安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 萃取柱，60 mg，3 mL (p/n 12108603) 试剂和化学品 所有试剂都是质谱、液相色谱或分析纯级别。 乙腈和水购自 Honeywell。标准品购自中国药品生物制品检定所(NICPBP)。猪肉购自当地超市。 标准溶液(1.0mg/mL)用醇醇分别配制，并储存在-20°℃。混合工作溶液 (10 pg/mL)用乙腈/水(10：90)配制并储存在4℃的条件下。加标溶液每周用混合工作溶液加适量水新鲜配制。 仪器和材料 安捷伦1200高效液相色谱仪 安捷伦6460三重串联四极杆液质联用仪 安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 窄径柱，2.1×100 mm，2.7 pm (p/n695775-902) 安捷伦 Vac Elut 20 Manifold (p/n 12234101) 样品制备液-液萃取称取5克猪肉样品(±0.01 g)， 放入50 mL带盖的聚丙烯管中。加入20 mL 的0.2M醋酸钠(pH 5.2)溶液，涡旋混匀。然后加入250 pL-葡萄糖醛酸酶(1000U/mL)，涡旋振荡2分钟彻底混匀样 品，然后置于37℃下反应 16 小时。 酶解物物荡15分钟，然后在 4000 rpm 下离心 10分钟，将4mL 上清液转移至另一个离心管中。加入0.1M的高氯酸溶液调节pH至1±0.3。 在4000 rpm 下离心10分钟，将上清液转移至另一只离心管中。用10M氢氧化钠溶液将 pH调至11。 加入10mL饱和氯化钠溶液和10 mL 异丙醇-乙酸乙酯 (60：40)并振荡5分钟。在 4000 rpm 下离心5分钟，将有机层小心地转移至另一个离心管中。再次加入异丙醇-乙酸乙酯萃取，振荡，离心并收集上清液，重复两次，然后将所有的上清液合并。 在40℃下用氮气吹干。残留物用5mL 0.2M醋酸钠 (pH5.2)复溶。所得样品用于稍后的 SPE纯化。 固相萃取 固相萃取的步骤见图1。安捷伦 Bond Elut Plexa PCX萃取柱用3 mL甲醇和3mL水活化。将5mL样品溶液移到萃取柱上，通过重力作用(约1 mL/min) 通过萃取柱。然后用2mL水和2 mL2%的甲酸溶液淋洗萃取柱。在最高真空度下维持3分钟，使萃取柱彻底干燥。用5mL5%的氨水甲醇溶液洗脱(流速1 mL/min)。洗脱液用40C氮气吹干。用1 mL含0.1%甲酸的水/乙腈 (90：10)溶液复溶。样品通过涡旋振荡和超声使残留物彻底溶解，然后用0.45 um 膜过滤。样品转移至1.5mL样品管，并在3000转下离心5分钟。上清液转移至2mL色谱样品瓶，用于分析。 仪器条件 图1.猪肉样品的提取和富集——固相萃取步骤 质谱条件 采用正离子模式对11个化合物进行监测。离子源参数见表2， MRM 参数见表3。 表2.用于11个化合物分析的质谱离子源参数 干燥气温度 350C 干燥气流速 5 L/min 雾化气压力 45 psi 鞘气温度 400℃ 鞘气流速 12 L/min 喷嘴电压 正模式：0V负模式：1000V 毛细管电压 正模式：4000V负模模：3500V 表3.11个化合物的MRM参数 回收率和重现性 待测物 MRM 通道(m/z) 碰撞电压(V) 碰撞能量(V) 克伦特罗 1)277.2>203.1 100 2) 277.2>259.1 沙丁胺醇 1)240.2>148.2 2) 240.2>222.1 100 莱克多巴胺 1)302.2>164.2 110 2) 302.2>284.1 特布他林 1)226.1>152.2 2)226.1>170.2 100 沙美特罗 1)416.3>380.3 2)416.3>398.4 130 普萘洛尔 1)260.2>116.2 2)260.2>183.2 120 妥洛特罗 1)228.1>154.1 100 2)228.1>172.2 西马特罗 1)220.1>160.2 2)220.1>202.1 90 马布特罗 1) 311.2>237.1 110 2)311.2>293.2 马喷特罗 1) 325.3>237.1 110 2)325.3>307.2 齐帕特罗 1)262.2>244.2 2)262.2>202.2 100 在三个浓度水平下测定了方法的回收率和重现性，分别为0.5、1.0和2.0ng/g(猪肉基质)。每个浓度水平重复六次。回收率和重现性数据见表5。1.0 ng/g加标猪肉样品的色谱图见图2。 表5.猪肉中β2受体激动剂的回收率和重现性 结果与讨论线性和检测限(LOD) 用混合工作标液加入空白基质配制成系列标准溶液(0.25、0.5、1.0、2.0和5.0ng/g)，用于建立标准校正曲线。空白基质样品经过了全部的样品前处理过程，包括酶解，液-液萃取和固相萃取。校正曲线的结果见表4。以信噪比 (S/N) 大于3的最小浓度作为各化合物的检测限(LOD)。11种C2受体激动剂的检测限(LOD)结果见表4。 表4.G2受体激动剂的检测限和线性 响应 vs 采集时间(分钟) 图2.1.0 ng/g 加标猪肉样品提取物的色谱图 结论 本研究表明，安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 可以被用于复杂基质样品，如猪肉中2受体激动剂的高效纯化和富集。基质加标样品的62受体激动剂的回收率和重现性都满足法规的要求。样品的基质效应和杂质含量都非常低，没有影响各目标化合物的定量分析。定量限 (LOQ)远低于法规的最大残留限量 (MRL)。[1.2] ( 参考文献 ) ( 1. GB/T 2 1 313-2 0 07"A n alysis of C2-Agonists in F o ods ofAnimal Origin by High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry. ) 2.SN/T11924-2007 DeterminationncoffClenbuterol，Ractopamine， Salbutamol and Terbutalin Residues inFoodstuffs of Animal Origin for Import and Export -HPLC-MS/MS Method.11 更多信息 有关产品和服务的更多信息，请访问我们的网站www.agilent.com/chem/cn. www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本文中的信息、描述和指标如有更改，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2011 2011年8月17日，中国印刷 5990-8788CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 建立了一种同时分析猪肉中11 种b2 受体激动剂残留——克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、沙美特罗、普萘洛尔、妥洛特罗、西马特罗、马布特罗、马喷特罗和齐帕特罗的方法，并对方法进行了验证。样品中的待测物用液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE) 法制备，然后用液相色谱-三重串联四极杆质谱进行定量分析，采集模式是电喷雾正离子多反应监测模式。本方法对猪肉样品中11 种b2 受体激动剂均获得了pg/g 水平的检测限(LOD)，动态校准范围为0.25 - 5 ng/g，总体回收率为82% - 105%，相对标准偏差(RSD)为1.6% - 8.4%。