人参粉中久效磷残留分析检测方案(液相色谱仪)

[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] ■ ■ Waters Michael S. Young， Kim Van Tran和Jeremy C. Shia沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 QuEChERS快速萃取人参粉末。 在UPLC-MS/MS分析之前进行简单、快速的dSPE纯化；萃取物越洁净，日常仪器维护所需的时间则越少。 适用于GC-MS/MS分析的简便直观的SPE纯化，可延长色谱柱寿命并减少进样口的维护。 适用于GC-MS/MS的大气压电离(APGC)。 使用XevoTQ-S质谱仪可为UPLC-MS和APGC-MS提供优异的性能， 从LC转换到GC操作只需30 min， 且无需放空离子源。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC@I-Class系统 XEVO TQ-S质谱仪 APGC ACQUITY UPLC BEHC色谱柱 用于QuEChERS萃取和dSPE纯化的DisQuETM产品 用于GC-MS的Sep-PakPSA/碳小柱纯化产品 LCMS认证样品瓶 MassLynx 4.1版数据系统，带Quanpedia"数据库 关键词 QuEChERS， 农药， SPE， 人参， UPLC-MS/MS，GC-MS/MS， APGC 简介 QuEChERS方法简化了农药分析的样品制备流程。尽管这一技术对水果、蔬菜以及许多其它类型的样品十分有效，但是在应用到干燥商品时却面临诸多挑战。本文为一系列应用纪要的第二篇，阐述了干燥商品的样品制备。第一篇应用纪要探讨了干茶叶(一种高树脂含量的叶状物质)的分析。本应用纪要介绍了针对西洋参粉(一种常用作中草药保健品的树脂含量极高的根状物质)多残留农药分析的QuEChERS萃取和SPE纯化策略。为了分析干燥的人参粉，在采用CEN QuEChERS的DisQuE试剂袋进行萃取之前，需用水平衡样品。取若干等分的样品进行纯化及色谱分析：其中一份进行dSPE纯化，通过UPLC-MS/MS分析，检测碱性/中性农药。另一份进行SPE小柱纯化，优化后进行GC-MS/MS分析，检测碱性/中性农药。通过这些纯化方案可获得人参粉中萃取的目标农药的回收率数据。 [应用纪要] 实验 UPLC条件 GC条件 系统： ACQUITY UPLCI-Class 仪器： Agilent 7890 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C8， 色谱柱： JSW DB% MS 2.1×100 mm， 1.7 um 30m×0.25mm×0.25 um 进样体积：5pL进样体积： 2pL，不分流温度：45℃流速： 2.0 mL/min氦气(恒定气流)流动相A：10mM醋酸铵升温程序： 初始为80℃，保持0.5 min，水溶液(pH5.0)然后以12℃/min的速度升至流动相B：10mM醋酸铵甲醇溶液300℃，并保持10 min流速：0.45 mL/min梯度：初始条件为10%的流动APGC的MS条件相B保持0.25 min， 然后以仪器： Xevo TQ-S线性梯度增加流动相B，模式： API正离子到12.25min时增加至99%，电晕电流： 2.2 pA保持至13.0 min， 在13.1 min离子源温度： 150℃时降回10%，保持并重新探头温度： 450 ℃平衡系统直至17 min锥孔气流速： 170 L/h辅助气流速： 250L/hUPLC的MS条件喷雾器气体： 4.0 Bar仪器：Xevo TQ-S碰撞气流速(氩气)：：0.18 mL/min模式：正离子和负离子电喷雾电离 (ES+， ES-)表1列出了用于此研究的LC-MS/MS锥孔和碰撞参毛细管电压：3.0kV数以及MRM通道。表2列出了用于此研究的GC- 提取电压： 3.0V MS/MS锥孔和碰撞参数以及MRM通道。 离子源温度： 150℃ 锥孔气流速： 150L/h 脱溶剂气温度： 500℃ 脱溶剂气： 1000 L/h 碰撞气流速(氩气)：0.18mL/min 样品制备 QuEChERS萃取 将2g人参粉和10mL水置于50 mL离心管中。浸泡并平衡30 min。加入10mL乙腈，盖上盖子并涡旋10s， 然后充分振摇1 min。加入用于CEN QuEChERS的DisQue试剂袋的填料，充分振摇1 min。将样品在4000 RPM (rcf 3250×g) 下离心5 min， 然后收集上清液。取等分的上清液进行SPE纯化。 针对LC-MS农药分析进行dSPE纯化 将1mL QuEChERS萃取物置于2 mL DisQuE dSPE试管中((150 mqMgSO/25 mg PSA/25 mg Cig， 部件号186004832)。加入7 mg石墨化炭黑(GCB)， 涡旋10s， 再振摇1 min。将样品在12000RPM (rcf 13400×g) 下离心4 min， 然后收集上清液。取200 uL上清液转移至LC-MS认证样品瓶中，用LC-MS流动相A稀释至1.0 mL. 针对GC-MS农药分析进行SPE纯化 使用10 mL 3：1丙酮/甲苯稀释1 mL的QuEChERS萃取物。在真空装置(带收集容器)上安装Sep-Pak Carbon/PSA小柱。在小柱滤头上放200 mg无水MgSO4。让所有稀释的萃取物通过小柱并收集滤液。用2 mL 3：1丙酮/甲苯冲洗小柱并收集滤液(结合由上述步骤通过小柱所得的馏分)。蒸发至恰好低于0.5 mL， 加入2mL甲苯，再蒸发至0.5mL。 结果与讨论 图1示出了10 ppb人参加标样品的典型UPLC-MS/MS色谱图；所选择的化合物为三唑磷。图2展示了10 ppb人参加标样品的典型APGC-MS/MS色谱图；所选择的化合物为二嗪磷。 图1.加标10ppb三唑磷的人参样品的LC-MS/MS分析结果(上图为定量分析的通道)。 图2.加标10 ppb二嗪磷的人参样品的APGC-MS/MS分析结果(上图为定量分析的通道)0 本研究通过比较进行样品制备步骤之前加标到样品基质中的样品的峰面积与完成所有样品制备步骤之后加标的样品的峰面积得到回收率数据，结果见表1和表2。 UPLC-MS/MS(dSPE纯化) 农药 MRL ppb MRM m/z %回收率(n=6) (EU) RT min (锥孔电压V，碰撞能量eV) @ 10，100 ppb (%RSD) 高灭磷 50 1.37 184.1>125.1(8，18) 184.1>143.0(8，8) 118(39) 110(8) 啶虫脒 100 4.08 223.0>126.0 (30，20) 223.0>56.1(30，15) 122(6) 124(5) 嘧菌酯 50 8.08 404.1>344.2(20，25) 404.1>372.1(20，10) 101(9) 104(6) 啶酰菌胺 500 8.30 342.9>307.0 (30，20) 342.9>139.9 (30，20) 105(20) 108(7) 胺甲萘 50 6.45 202.0>145(30，10) 202.0>127 (30，26) 113(13) 146(4) 唑酮草酯 20 9.31 412.0>346.0(30，24) 412.0>266.0(30，18) 91(8) 134(3) 氯虫苯甲酰胺 20 7.72 484.0>453.0 (35，20) 484.0>283.9 (35，10) 84(25) 106(6) 噻虫胺 70 3.57 250.0>169.0(30，12) 250.0>132.0(30，17) 108(33) 108(7) 嘧菌环胺 1000 9.39 226.0>93.0(40，33) 226.0>108.0(40，30) 91(16) 115(6) 二嗪磷 50 9.53 305.1>169.0(30，22) 305.1>96.9 (30，35) 108(7) 107(8) 烯吗啉E 50* 8.55 388.1>300.9 (30，20) 388.1>165.0(30，40) 99(12) 106(7) 烯酰吗啉Z 50* 8.23 388.1>300.9 (30，20) 388.1>165.0 (30，40) 98(19) 97(8) 氟吡密胺 20 8.39 383.0>173.0(15，20) 385.0>174.9(15，20) 97(15) 101(2) 环酰菌胺 100 8.83 302.1>97.2(32，22) 302.1>55.3(32，38) 106(11) 107(8) 咪唑菌酮 50 8.21 312.1>236.1(30，16) 312.1>92.0(30，25) 112(11) 103(5) 吡虫啉 50 3.55 256.1>175.1(30，19) 256.1>209.1(30，16) 92(19) 116(6) 甲霜灵 100 7.33 280.1>220.1(30，13) 280.1>192.1(30，17) 109(6) 112(4) 双苯氟脲 10 10.31 493.0>158.0(30，19) 493>141.0 (30，40) 79(14) 106(6) 除虫菊酯 50 11.19 329.3>161.1(20，15) 329.3>142.9(20，15) 81(29) 125(10) 嘧霉胺 10 7.93 200.0>107.0 (42，24) 200.0>82.0(42，24) 109(4) 120(4) 吡丙醚 50 10.71 322.1>96.0(30，14) 322.1>227.1(30，14) 115(6) 106(6) 吡唑嘧菌酯 50 9.72 388.1>163.0 (30，25) 388.1>193.9(30，12) 96(11) 95(7) 烯禾啶 100 9.69 328.2>178.1(15，20) 328.2>282.2(15，15) 101(12) 84(5) 多杀菌素A 50 10.95 732.6>142.0(40，50) 732.6>98.1(40，50) 105(12) 110(8) 多杀菌素D 50 11.35 732.6>142.0(40，50) 732.6>98.1(40，50) 88(22) 91(5) 噻虫嗪 20000(20US) 2.73 292.0>181.0 (30，22) 292.0>211.0(30，13) 114(22) 110(10) 三唑磷 20 8.86 314.1>161.9(30，18) 314.1>118.9(30，35) 106(6) 110(5) 肟菌酯 50 10.16 409.0>186.0(30，16) 409.0>145.0 (30，40) 96(4) 97 (4) 表1.UPLC-MS/MS回收率数据。 APGC-MS/MS (Carbon/PSA小柱纯化) 农药 MRL ppb MRMm/z %回收率(n=6) (EU) RT min (锥孔电压V，碰撞能量eV) @ 10，100 ppb (%RSD) 高灭磷 50 6.60 183.8>94.8(10，20) 183.8>142.8(10，10) 66(6) 62(5) 联苯菊酯 100 15.97 242.8>122.9(20，10) 242.8>154.9 (20，10) 86 (20) 122(15) 唑酮草酯 20 14.85 411.7>276.8(20，30) 411.7>301.8(20，30) 85(8) 74(7) 甲基毒死蜱 100 10.90 321.6>124.7 (35，20) 321.6>289.6(35，10) 73(4) 77(7) 溴虫腈 50000 14.03 408.7>270.8(20，20) 408.7>378.7(20，10) 74(6) 82(5) 二嗪磷 50 9.98 304.9>168.9 (20，20) 304.9>276.9(20，10) 88(6) 81(5) 溴氰菊酯 5000 20.40 505.6>252.7 (20，20) 505.6>280.7(20，10) LOQ 72(9) 氰戊菊酯 50 19.54 419.8>124.8(10，40) 419.8>166.8(10，10) 61(4) 75(9) 高效氯氟氰菊酯 1000 16.95 449.8>196.8(15，20) 449.8>224.8(15，10) 77(8) 77(16) 胺丙畏 100 (US) 9.76 281.9>137.8(10，20) 281.9>194.8(10，10) 83(13) 79(9) 吡丙醚 50 16.67 321.9>95.8(10，20) 321.9>184.8(10，20) 79(11) 76(8) 苯醚菊酯 50 16.45 350.9>182.8(20，40) 350.9>248.8(20，20) 77(8) 88(9) 苄蚨菊酯 200 15.46 338.9>170.9(25，10) 338.9>292.9(25，10) 52(9) 56(10) 氟乐灵 50 8.76 335.9>235.8(30，10) 335.9>251.8 (30，20) 81(6) 79(7) 表2.APGC-MS/MS回收率数据。 本研究使用了改良的QuEChERS方法。在加入乙腈和QuEChERS盐之前，首先将人参粉样品与水混合，达到平衡。这一步骤可从人参中有效萃取效种农药残留。在LC-MS分析前取一份QuEChERS萃取物，采用dSPE进行纯化。图3显示了所得的纯化物，大部分带颜色的基质化合物已被去除，因此不会沉积到锥孔上。在GC-MS分析前使用SPE小柱 (Carbon/PSA)对另一份QuEChERS萃取物进行纯化。若不进行SPE纯化，使用GC-MS分析较少的样品后就需要对进样口和色谱柱进行维护；而经过SPE纯化后，无需任何日常维护即可分析数百种样品。 图3.从人参粉中获得的QuEChERS萃取物，未经dSPE纯化(左图)和经过dSPE纯化(右图)。 ■改良的QuEChERS方法可有效回收人参粉中的多种农药。 ■dSPE为UPLC-MS/MS分析提供了适用的纯化操作。 基于Carbon/PSA小柱的SPE纯化对于使用APGC-MS的GC-MS/MS分析极其有效。 Xevo TQ-S质谱仪可提供优异的UPLC-MS和APGC-MS性能。 从LC转换到GC接口只需30 min。 转换时无需放空质谱仪。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 免费售后服务热线：800(400)820 2676WWw.Waters.com 人参粉中的农药多残留分析：优化的QuEChERS萃取净化方案用于UPLC-MS/MS和GC-MS/MS分析 本应用纪要介绍了针对西洋参粉（一种常用作中草药保健品的树脂含量极高的根状物质）多残留农药分析的QuEChERS萃取和SPE纯化策略。为了分析干燥的人参粉，在采用CEN QuEChERS的DisQuE试剂袋进行萃取之前，需用水平衡样品。取若干等分的样品进行纯化及色谱分析；其中一份进行dSPE纯化，通过UPLC-MS/MS分析，检测碱性/中性农药。另一份进行SPE小柱纯化，优化后进行GC-MS/MS分析，检测碱性/中性农药。通过这些纯化方案可获得人参粉中萃取的目标农药的回收率数据。