糖果中色素添加剂检测方案(液相色谱仪)

安捷伦应用解决方案糖果中色素添加剂的分析 应用简报 食品检验 作者 Siji Joseph， 安捷伦科技有限公司印度班加罗尔 摘要 合成或人工色素在食品和饮料中作为添加剂，可以改善产品的外观。在本研究中，我们开发了一种稳定的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)方法， 实现了10种合成色素的同时测定。采用配有 Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱的 Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统实现分离和定量分析。通过部分验证确定了方法的稳定性。通过分析糖果中的色素添加剂，证明了该方法定量分析食品基质中人工色素的适用性。最后，将 HPLC 方法有效转换为一个耗时短的超高压液相色谱(UHPLC)方法， 采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，实现更快速的分析，且不损失分离度。采用 Agilent 1290 Infinity 二极管阵列检测器(DAD)，可以选择不同的波长，实现在不同色素各自的最大吸收波长处进行定量测定。采用两种方法，分别确定了每种色素的检测限 (LOD)、定量限 (LOQ)、精密度、准确度和线性。在分析工作流程中采用 Agilent 7696A 样品制备工作台，帮助在LOD、LOQ和线性研究中进行样品前处理。 色素添加剂是指加入食品中使其带颜色的任何染料、色素或物质1。当前有主要来源于植物或动物的天然和合成色素添加剂。如：姜黄和藏红花。合成色素是化学合成的色素，如酒石黄和靛胭脂。在食品中加入色素有许多原因。其中包括补偿因长期储存出现的褪色、纠正颜色的自然变化，以及使无色食品着色等。实际上，色素添加剂是市场上大多数包装食品不可避免的一类成分1。研究业已证明，人工色素暴露量超出每日摄入限量将会导致儿童产生多动症和其他不安行为3。美国食品药品监督管理局 (FDA) 已经制定了相关条例，旨在控制和确保食品中仅含有允许使用的色素添加剂。这就强调了使用精确的分析技术对色素进行鉴别和定量分析的重要性。 ( 在本文中，我们采用 Agilent Poroshell120EC-C18色谱柱，开发了一个反相高压液相色谱方法。食品色素的水溶性使反相 HPLC 成为分析这些物质的理想技术。 ) 方法 ( 仪器与软件 ) Agilent 1260 Infinity 四元液相色谱系统包括如下模块： ( · Agilent 1260 Infinity 四元泵和真空脱气机 (G1311B) ) ( · Agilent 1260 Infinity 高效自动进样器 (G1367E) ) ( · Agilent 1260 Infinity 柱温箱 (G1316A) ) ( ·带最大光光流通池(60mm 光程) (G4212-60007) 的 Agilent 1260 Infinity 二极管阵列检测器 (G4212B) ) ( ·Agilent Poroshel l 120 EC-C18 色谱柱， 4.6x150 mm， 2 . 7 pm ( 6 93975 902) 开发和运行 UHPLC 分析所使用的 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统包括： ) ( · 集 成了真空脱气机 (G4220A) 和100 pLJet Weaver 混合器的 Agilent 1290 Infinity 二元泵 ) ( · Agilent 1290 Infinity 高效自动进样器 (G4226A) ) ( · Agilent 1290 Infinity 柱温箱(G1316C) ) ( ·带最大光强流通池(1.0pL扩散体积， 10 mm 光程) (G4212-60008)的 Agilent1290 Infinity 二极管阵列检测器 (G4212A) ) ( ·Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱， 内径2.1 mm， 柱长75mm， 采 用 2.7 pm 颗粒填充(697775-902) ) 两套系统均采用安捷伦化学工作站(B.04.02版)进行控制。 系列线性浓度稀释样品采用 Agilent 7696A样品制备工作台制备。 试剂与材料 所有化学品和溶剂均为 HPLC级，高纯水使用 MilliQ水纯化系统(Millipore Elix10型，美国)制备。甲醇为超梯度级，购自 Lab-Scan 公司(泰国曼谷)。磷酸氢二钠和正磷酸购自 Fluka 公司(德国)。二甲基亚砜 (DMSO) 购自 Qualigens 公司(印度)。酒石黄、苋菜红、靛胭脂、胭脂红 4R、日落黄 FCF、红色酸性染料、固绿FCF、酸性蓝/亮蓝、胭脂红 3R， 以及赤藓红B标准品购自Aldrich 公司(印度)。用于回收率和定量分析的糖果购自本地。 色谱参数 反相液相色谱和 UHPLC中使用的色谱参数见表1。 色素标准溶液 称取各标准品约20mg， 分置于10mL容量瓶中，分别制备酒石黄、苋菜红、靛胭脂、胭脂红 4R、日落黄FCF、红色酸性染料、固绿FCF、酸性蓝/亮蓝、胭脂红3R， 以及赤藓红B的标准储备液。于每个容量瓶中加入300pL DMSO， 将流动相A和B 按照 80：20 的比例预混合的溶液作为稀释剂。需要时超声处理。 混合标准溶液和线性浓度 精确量取取标准溶液约100 pL 并混合，加入稀释剂至2000pL，得到每种色素浓度均为200 ppm 的色素标准混合溶液。使用 Agilent 7696A 样品制备工作台连续稀释该 200 ppm 标准混合溶液，制备系列线性浓度的标准溶液。线性标准溶液的浓度范围为 0.01 ng/pL-200 ng/pL(10个浓度水平及各重复6次))。 Agilent 1260 Infinity 四元液相色谱系统 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 Agilent Poroshell 120 EC-C18， Agilent Poroshell 120 EC-C18， 4.6x150 mm， 2.7 pm 2.1x75 mm， 2.7 pm (部件件N693975-902) (部件号697775-902) 45°C 45 °C 5 uL(洗针进样，针冲洗口启动5秒) 1pL(洗针进样，针冲洗口启动5秒) 5°℃ 5°℃ 10mM Na，HPO， pH 7 10 mM Na，HPO， pH 7 甲醇 甲醇 0 min：5%B 0 min： 5%B 4 min： 30%B 0.15min： 5%B 10 min： 40% B 0.5 min： 30% B 14 min： 40%B 2.3 min： 40%B 18 min： 95%B 2.6 min： 40% B 22 min： 95%B 3.25 min： 95%B 22.1 min：5% B 4.00 min：95% B 4.01 min： 5%B 5 min 1 min 1.2 mL/min 0.7 mL/min 60 mm 光程(部件号 G4212-60007) 10mm 光程(部件号 G4212-60008) 288 nm：靛胭脂 288nm：靛胭脂 428 nm： 酒石黄 428 nm：酒石黄 484 nm： 日落黄 FCF 484 nm：日落黄 FCF 511nm：胭脂红4R 和胭脂红 3R 511nm：胭脂旨4R 和胭脂红 3R 520 nm：苋菜红和红色酸性染料 520nm：苋菜红和红色酸性染料 530nm：赤藓红B 530 nm： 赤藓红 B 626 nm：固绿FCF和酸性蓝 626nm：固绿FCF和酸性蓝 20 Hz， 0.013 min 峰宽 80 Hz， 0.003 min 峰宽 (0.25s响应时间) (0.062s 响应时间) 用于色素定量分析和回收率研究的样品前处理 使用不同类型的样品(即包含不同色素的糖果)进行色素定量分析和回收率研究。依次向2g糖果中加入400 pL DMSO 和20mL 稀释剂，提取其中的色素，过程非常简单。超声处理并采用带有 C0650转子的 Beckman Coulter Allegra X22R 离心系统， 以 8300 rcf 的离心力离心10 min后，溶液通过 0.25 pm PTFE AgilentEconofilter 注射式过滤器滤膜过滤，滤液待分析。使用加标和不加标的糖果样品进行回收率研究。样品加标采用柱上浓度为25 ng 的标准混合溶液。提取过程如前所述。 预防措施 为了延长化合物在溶液中的稳定性，不使用时，所有制备的溶液用铝箔包裹，并于冰箱暗处4C贮存。分析期间，可恒温的自动进样器样品盘保持在5°℃。 步骤 表2所示的系列浓度校准溶液是采用稀释剂系列稀释 200 ng/pL标准混合溶液而得。在两个系列溶液的配制中，采用带500 pL 注射器的 Agilent 7696A 样品制备工作台来配制线性浓度的溶液。在第一序列，向每个样品瓶中加入一定量的稀释剂；在第二序列， 将 250 pL 200 ng/pL的溶液加入样品瓶并涡旋15s。注意，除了分别运行这两个序列外，这些步骤也可以在一个方法中编程并在一个序列中运行。取上一个浓度的溶液 250/100 pL置于下一个浓度的样品瓶中进行系列稀 释。 Agilent 7696A 样品制备工作台设置的注射器参数见表 3。 Agilent 7696A 样品制备工作台4的设置在安捷伦应用简报(出版号5990 6850CHCN)中有详细描述。 进样分析5pL含有 DMSO 的稀释液作为空白，然后依次进样分析系列浓度的各校 准溶液，每个浓度平行分析6次。用每个浓度的峰面积和保留时间 (RT)数据来计算标准偏差 (SD) 和相对标准偏差 (RSD)值。并以较低线性浓度溶液的进样分析确定LOD 和LOO。以各色素每个线性浓度峰面积的平均值对其相应浓度作图，构建线性曲线。 制备的 初始浓度 吸取体本(pL) 稀释剂(pL) 总体积 所得溶液的浓度 5pL进样量时浓度 (ppm或 ng/pL) (第二序列) (第一序列) (pL) (ng/pL) 的柱上量(ng) 编号 200 250 250 500 100 500 10 100 100 400 500 20 100 9 20 250 250 500 10 50 8 10 100 400 500 2 10 7 2 250 250 500 1 5 6 1 100 400 500 0.2 1 5 0.2 250 250 500 0.1 0.5 4 0.1 100 400 500 0.02 0.1 3 0.02 250 250 500 0.01 0.05 2 0.01 100 400 500 0.002 0.01 表2 制备系列浓度校准溶液的稀释详情 参数 溶剂预清洗1 分液冲洗 分液泵 分液设置 泵送或清洗次数 1 2 冲洗体积(pL) 250 50 抽吸速度(uL/min) 500 500 500 分液速度 (pL/min) 2500 2500 2500 2500 针取样深度偏移量(mm) -1 -1 -1 -1 黏性延迟(s) 转动架上的溶剂 A 气隙(%注射器体积) 0 0 表3 Agilent 7696A 样品制备工作台注射器参数 通过改变6个关键的方法参数来评估方法的稳定性。平行6次进样分析含每种色素各约30ng (柱上量)的标准混合溶液，利用获得的数据来研究方法的稳定性。分别进样分析2g糖果中加标25 ng 色素添加剂标准品和不加标的样品溶液，来研究方法的回收率。利用所有10种色素标准品的特征图谱建立其 UV谱库。连同保留时间，该谱库可用来鉴定糖果中的色素添加剂。 该方法可有效转换到 UHPLC。评价了种色素的 LOD、LOQ和线性，方法精密度通过峰面积和 RT 的 RSD 来确定。同时还绘制了所有色素使用 UHPLC 方法的线性曲线。 UHPLC方法可使分析更快速，并且不损失分离度。 结果与讨论 分离与检测 采用 Agilent Poroshell 120 EC-C18(150mmx 4.6 mm， 2.7um) 色谱柱，这10种色素在 20min 内实现了良好分离。不同的色素具有不同的最大吸收波长。这10种色素的色谱流出曲线见图1，色素列表及其各自的最大吸收波长见表4。我们使用化学工作站软件中的峰纯度功能检查各色谱峰的纯度，从而评价了方法的专属性。通过对精密度、线性范围、准确度、、专属性、回收率和稳定性进行研究来验证本方法。 图1 使用15 cm Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱分离 10种色素。谱图是在7个不同波长下分析叠加生成 SI编号 化合物名称 分子式 分子量 保留时间 最大吸收波长 酒石黄 CH，NNa，O，S， 534.36 3.29 428 2 苋菜红 C2oHNNa，0os 604.47 3.86 522 3 靛胭脂(靛蓝) CiHNNa，O，S 466.35 4.28 288 和612 (杂质5.74) 4 胭脂红4R C20HNNa，01oS： 604.47 5.41 510 (胭脂红SX) 5 日落黄 FCF C16H10NNa，0，S， 452.37 6.20 482 6 红色酸性染料 C20H12N，Na，0，S， 502.43 12.83 518 7 固绿 FCF C37H34N201oSNa， 808.85 14.04 622 (杂质13.52) 8 酸性蓝/亮蓝 C37HNa，N0，S， 792.85 16.32 628 (杂质15.40) 9 胭脂红3R CHiNNa，0，S 494.45 16.99 10 赤藓红B 835.89 18.18 表4 色素列表及每种色素的最大吸收波长 检测限(LOD)与定量限 (LOQ) 信噪比 (S/N)>3时的分析物浓度定义为LOD， S/N> 10 时的分析物浓度定义为LOQ。测得的每种色素的 LOD 和LOQ 值见表5。作为一个实例，图2展示了胭脂红 4R LOQ浓度(柱上量0.1ng) 时与空白的叠加色谱图。 线性 所有制备的线性浓度溶液平行进样分析6次，利用峰面积响应及其相应的浓度值来构建每种色素从 LOQ浓度到最高浓度的线性曲线。获得的所有色素的相关系数见表5. 总浓度 LOD LOO 水平数 柱上量线性 峰号 化合物名称 (ng) (ng) (n=6) 范围(ng) 线性方程 R²值 1 酒石黄 0.05 0.1 8 0.1-100 v=15.477x-5.7137 0.9993 2 苋菜红 0.1 0.25 7 0.25-100 v=12.686x-5.8682 0.9993 3 靛胭脂 0.05 0.1 8 0.1-100 y=16.723x-5.9163 0.9993 4 胭脂红 4R 0.05 0.1 8 0.1-100 v=13.168x-5.0258 0.9993 5 日落黄 FCF 0.25 0.5 8 0.5-1000 y=1.8621x+7.2227 0.9992 6 红色酸性染料 0.25 0.5 8 0.5-1000 y=10.018x+41.05 0.9993 7 固绿 FCF 0.1 0.25 7 0.25-100 v=31.981x-14.22 0.9993 8 酸性蓝 0.05 0.1 8 0.1-100 y=36.351x-12.193 0.9994 9 胭脂红 3R 0.1 0.25 9 0.25-1000 y=11.324x+39.972 0.9992 10 赤藓红B 0.05 0.1 8 0.1-100 v=40.628x-10.168 0.9997 所有10种色素的 LOD、L0Q和线性结果。通过进样 2.5 pL 0.1 ng/pL 的标准溶液得到柱上量 0.25 ng 的浓度 图2 LOQ (0.1 ng)浓度下胭脂红 4R与空白的叠加色谱图 保留时间和峰面积的精密度 为了确定方法的精密度，计算了所有10种色素在1、10和100ng(柱上量)浓度时，保留时间 (RT) 和峰面积的相对标准偏差 (RSD) 值。最高的峰面积 RSD 值是1.19%(1ng 浓度的红色酸性染料)，RT 的 RSD 是 0.09% (10 ng 浓度的酒石黄)。10种色素的峰面积 RSD值图示见图 3， RT的 RSD 值图示见图4。 图3 所有色素在1 ng、10 ng 和100ng(柱上量)浓度时优异的峰面积 RSD 值 图4 所有色素在1 ng、10 ng 和100ng(柱上量)浓度时优异的 RT RSD 值 稳定性 通过有意改变6个关键的方法参数来评价方法的稳定性。计算了所得峰面积和保留时间的偏差，并与原始方法的结果进行比较。平行6次进样测定了色素标准品的加标混合溶液。保留时间和峰面积的允许偏差分别设定为±3%和±5%。本研究中使用的稳定性测试条件见表6，稳定性研究的结果见图5和6。 SI编号 参数(实际值) 测量偏差 修改值 1 流速(1.2) 2% 1.224 mL/min 1.176 mL/min 2 进样量(5pL) 2% 5.1pL 4.9 pL 3 波长(288、428、 (±)3nm 波长(291、431、487、514、523、533、629nm) 484、511、520、 波长(285、425、481、508、517、527、623nm) 530、626nm) 4 Ph (7.0) (±)0.15 10 mm 缓冲液 pH 7.15 10mM缓冲液 pH 6.85 5 柱温(45C) (±)2℃ 47°C 43°C 6 梯度陡度(6.25， ~10% 6.75， 4 min 内5-32； 14.25， 4 min 内 38-95； 4 min 内5-30， 5.75， 4 min 内5-28； 13.25， 4 min内42-95 13.75， 4 min 内 40-95) 表6 本研究使用的稳定性测试条件 图5 采用峰面积计算的稳定性测试结果汇总 对于所有改变的参数，所有10种色素峰面积的偏差均在允许的限度内。另外，在该稳定性研究中改变流速、进样量和流动性的 pH值时，其偏差也在允许的限度内。但是，提高柱温后，有两种化合物的 RT偏差超出了允许的限度。当柱温降低时，有三个化合物的RT 偏差超出了允许的限度。对保留时间有很大影响的一个关键参数是梯度斜率。当梯度斜率变化±10%时，我们观察到超过5种化合物的RT 偏差超过了允许的限度。稳定性结果表明，该方法正常使用时是可靠的，刻意改变参数在很大程度上不会对方法性能产生影响。 糖果中色素的回收率 采用标准添加法5进行5种不同颜色糖果中多种色素的回收率分析。分析中采用所有10种色素柱上量均为25ng 的标准混合溶液。对加标样品、未加标样品和标准品色谱图上各色素的峰面积分别进行计算。加标与未加标样品间检测器响应的差值与标准品色谱图的响应进行比较，即得回收率，用百分数表示。糖果中所有色素的回收率均大于98%。加标或未加标红色糖果提取样品，以及标准混合溶液的色谱图见图7。 图6 采用保留时间计算的稳定性测试结果汇总 图7 加标、未加标红色糖果提取样品以及标准混合溶液的叠加色谱图 糖果中色素添加剂的定量分析 采用峰面积响应，我们测定了不同颜色糖果中的色素。通过得自线性曲线的线性方程进行浓度计算。另外，我们通过在自己创建的 UV谱库中进行光谱匹配来鉴定化合物。分别计算出1g5种不同糖果中色素的含量，见表7。红色糖果中，胭脂红4R 色谱峰与谱库光谱的匹配情况见图8。 样品号 糖果的颜色 成分 测得量(pg/g) 糖果_1 蓝色 酸性蓝 44.7 糖果_2 黄色 酒石黄 61.7 糖果_3 绿色 酒石黄 52.5 酸性蓝 10.9 糖果_4 橙色 酒石黄 24.8 胭脂红 4R 26.9 日落黄 FCF 43.3 糖果_5 红色 胭脂红4R 27.5 日落客 FCF 38.3 红色酸性染料 20.6 表7 计算的1g糖果中色素的含量 图8 红色糖果中中脂脂 4R 色谱峰与谱库光谱的谱图匹配 UHPLC 方法 我们采用二极管阵列检测器，开发了一种分离10种色素的 UHPLC 方法。与需要 21 min 才能完成的 HPLC 梯度洗脱相比， UHPLC 方法拥有优异的分离度，并且可节省大约 81%的分析时间，以及89%的溶剂(图9)。固绿 FCF 峰及其杂质峰(13.526分钟的峰)之间的分离度是 HPLC 方法中所有峰里最低的，因此，我们在很短的运行时间内，通过监控UHPLC 结果中的该分离度来评价色谱峰的整体分离度。使用 HPLC方法， 该分离度为3.71，而使用耗时短的 UHPLC方法，该值大于1.8。测得的 UHPLC 方法的LOD、LOQ和线性结果见表8。为了评价方法的精密度，计算了柱上量为10mg浓度样品的 RT 和峰面积的 RSD 值。对于日落黄，最高的峰面积 RSD 是 0.84%， RT的RSD 是 0.04%。结果见图10。所得峰面积和 RT 的低 RSD 值证实了该方法的精密度良好。这些结果也证明了所开发UHPLC方法的可靠性。使用该方法有望实现糖果样品中色素的快速定量分析。 图9 通过采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的 UHPLC 方法分离10种色素 总浓度 LOD LOO 水平数 柱上量线性范 峰号 化合物名称 (ng) (ng) (n=6) 围 (ng) 线性方程 R值 1 酒石黄 0.05 0.1 9 0.1-200 v=4.6746x+2.5573 0.9998 2 苋菜红 0.1 0.25 8 0.25-200 v=3.7682x+0.585 0.9996 3 靛胭脂 0.05 0.1 9 0.1-200 v=4.3278x+3.0266 0.9998 4 胭脂红4R 0.1 0.25 8 0.25-200 v=3.9616x+1.4427 0.9997 5 日落黄FCF 0.5 1 6 1-200 v=0.6479x +0.8958 0.9993 6 红色酸性染料 0.25 1 6 1-200 v=3.8231x+0.5447 0.9996 7 固绿FCF 0.1 0.25 8 0.25-100 y=9.008x+3.0979 0.9998 8 酸性蓝 0.1 0.25 8 0.25-100 y=10.083x+14.681 0.9991 9 胭脂旨 3R 0.1 0.25 8 0.25-200 y=4.1461x+0.4156 0.9995 10 赤藓红B 0.05 0.1 9 0.1-100 v=11.354x+11.912 0.9996 表8 采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的 UHPLC 方法的 LOD 和LOQ值 图10 在柱上量 10 ng 浓度水平， 所有10种色素 UHPLC 结果的峰面积和 RT RSD 值。进样量为1pL(重复6次) 使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱分离和定量分析了10种色素。采用Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统， 我们开发了一种稳定的、20min 内可以完成的 HPLC梯度洗脱方法。对方法进行了部分验证，论证了其定量分析多种色素的适用性，如酒石黄、苋菜红、靛胭脂、胭脂红4R、日落黄 FCF、红色酸性染料、固绿FCF、酸性蓝/亮蓝、胭脂红 3R，以及赤藓红 B。方法简便快速、专属性强、灵敏度高，还具有良好的精密度、线性和回收率。所建立方法可有效用于5种不同颜色糖果基质中多种色素的定量分析。随后，该方法被转换为一个耗时短的，仅需要4 min 即可完成的 UHPLC方法，使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，可节省大约81%的分析时间和89%的溶剂。使用 Agilent 1260 和 1290Infinity 液相色谱系统的这些方法可用于色素的常规准确分析。Agilent 7696A 样品制备工作台的使用大大简化了线性研究中的样品前处理。优异的线性结果证实了Agilent 7696A 样品制备工作台不仅能够提供非常精确的结果，而且还能减少操作误差。 ( 参考文献 ) 1. 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Chem.，Vol.74， No.11， pp. 2201-2205，2002. ) Agilent Technologies 摘要    合成或人工色素在食品和饮料中作为添加剂，可以改善产品的外观。在本研究中，我们开发了一种稳定的反相高效液相色谱 (RP-HPLC) 方法，实现了 10 种合成色素的同时测定。采用配有 Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱的 Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统实现分离和定量分析。通过部分验证确定了方法的稳定性。通过分析糖果中的色素添加剂，证明了该方法定量分析食品基质中人工色素的适用性。最后，将 HPLC 方法有效转换为一个耗时短的超高压液相色谱 (UHPLC) 方法，采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，实现更快速的分析，且不损失分离度。采用 Agilent 1290 Infinity 二极管阵列检测器 (DAD)，可以选择不同的波长，实现在不同色素各自的最大吸收波长处进行定量测定。采用两种方法，分别确定了每种色素的检测限 (LOD)、定量限 (LOQ)、精密度、准确度和线性。在分析工作流程中采用 Agilent 7696A样品制备工作台，帮助在LOD、LOQ 和线性研究中进行样品前处理。前言    色素添加剂是指加入食品中使其带颜色的任何染料、色素或物质1。当前有主要来源于植物或动物的天然和合成色素添加剂。如：姜黄和藏红花。合成色素是化学合成的色素，如酒石黄和靛胭脂2。在食品中加入色素有许多原因。其中包括补偿因长期储存出现的褪色、纠正颜色的自然变化，以及使无色食品着色等。实际上，色素添加剂是市场上大多数包装食品不可避免的一类成分1。研究业已证明，人工色素暴露量超出每日摄入限量将会导致儿童产生多动症和其他不安行为3。美国食品药品监督管理局 (FDA) 已经制定了相关条例，旨在控制和确保食品中仅含有允许使用的色素添加剂。这就强调了使用精确的分析技术对色素进行鉴别和定量分析的重要性。    在本文中，我们采用 Agilent Poroshell120 EC-C18 色谱柱，开发了一个反相高压液相色谱方法。食品色素的水溶性使反相 HPLC 成为分析这些物质的理想技术。结论    使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱分离和定量分析了 10 种色素。采用Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统，我们开发了一种稳定的、20 min 内可以完成的 HPLC 梯度洗脱方法。对方法进行了部分验证，论证了其定量分析多种色素的适用性，如酒石黄、苋菜红、靛胭脂、胭脂红 4R、日落黄 FCF、红色酸性染料、固绿 FCF、酸性蓝/亮蓝、胭脂红 3R，以及赤藓红 B。方法简便快速、专属性强、灵敏度高，还具有良好的精密度、线性和回收率。所建立方法可有效用于5 种不同颜色糖果基质中多种色素的定量分析。随后，该方法被转换为一个耗时短的，仅需要 4 min 即可完成的 UHPLC方法，使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，可节省大约 81% 的分析时间和89% 的溶剂。使用 Agilent 1260 和 1290Infinity 液相色谱系统的这些方法可用于色素的常规准确分析。Agilent 7696A 样品制备工作台的使用大大简化了线性研究中的样品前处理。优异的线性结果证实了Agilent 7696A 样品制备工作台不仅能够提供非常精确的结果，而且还能减少操作误差。