辣椒酱中苏丹红检测方案(固相萃取)

辣椒酱中苏丹红检测的前处理优化方案（改进GB/T19681-2005方法） 原国标方法中采用中性氧化铝小柱，该小柱容易吸潮影响活度，从而导致净化效果不理想，重现性不好等问题。 鲜香红辣的辣椒油、辣椒酱，可是非法食品添加剂“苏丹红”的重灾区哦！“苏丹红”是一种化学染色剂，它的成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性。 “辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测”国标中，样品前处理采用中性氧化铝小柱，该小柱容易吸潮影响活度，从而导致净化效果不理想，重现性不好等问题。 月旭科技以客户的痛点为出发点，专门开发了适合检测苏丹红的前处理小柱----SDH苏丹红专用柱，该专用小柱快速、高效、重现性好、净化步骤简便。 下面看看实验过程及效果： 1、适用范围 适用于辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测。 2、苏丹红标准溶液的配置 分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ各1.0 mg，用3 mL乙醚溶解后用丙酮定容至10 mL，所得苏丹红标准品母液的浓度为100 µg/mL。然后将母液用丙酮稀释至10 µg/mL。（此处如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为后续的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容造成色谱峰型不理想）。 3、提取步骤 3.1辣椒酱 将0.500 g样品置于15 mL 离心管，加入4 mL正己烷，涡旋混合1 min，充分混匀，待净化。 3.2 辣椒粉 将0.500 g样品置于50 mL 离心管，加入5 mL正己烷，涡旋混合1 min，超声5 min，3000 r/min离心5 min，取上清液。重复上述提取步骤四次，将得到的上清液氮吹浓缩至约4 mL，待上样净化。 4、SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® SDH苏丹红专用柱，规格：500 mg/6mL。 a)活化：加入5 mL正己烷活化Welchrom® SDH苏丹红专用柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。 b)上样：将提取液加入Welchrom® SDH苏丹红专用柱中，并用1mL正己烷润洗离心管一并加入小柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。 c)淋洗：用3 mL正己烷淋洗小柱，弃去淋洗液，并抽干小柱。 d)洗脱：用5 mL乙酸乙酯洗脱小柱，收集洗脱液，并将小柱抽干，合并收集洗脱液。 e)浓缩：将收集的洗脱液在40度加热条件下氮吹至近干，大概剩下半滴液体左右，然后用乙腈复溶并定容到1 mL，此时溶液呈均一相，没有油脂出现。并过0.22 µm PTFE滤膜，上高效液相色谱仪检测。 5、注意事项 （1）如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为检测四种苏丹红的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容。 （2）加标过程：取5 μL、10μL和50 μL的10 μg/mL标样，25 μL 100 μg/mL的标样加入到0.5 g样品中，加标浓度即为0.1 mg/kg 、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg和5.0 mg/kg。 （3）在过SPE小柱的过程中，“活化”和“上样”这两个步骤要注意不要使得小柱干涸，这样会影响小柱的回收率。而在“淋洗”和“洗脱”这两个步骤要注意抽干小柱，以便尽可能多的去除杂质和得到目标物。 （4）洗脱液在氮吹浓缩的过程中，注意不要将洗脱液完全吹干。因为这样有可能会影响回收率。 6、色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate®XB-C18（4.6 x 150 mm, 5 μm） 流动相：乙腈/水 = 95/5（混成一相） 流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：30 ºC 检测波长：500 nm 7、色谱图或者加标回收率结果 图1：乙腈溶剂色谱图 图2：实际辣椒酱样品色谱图 图3：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度均为: 0.1 µg/mL） 图4：实际辣椒酱样品加标色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 0.2 mg/kg） 图5：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 0.5 µg/mL） 图6：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 1.0 mg/kg） 图7：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 2.5 µg/mL） 图8：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 5.0 mg/kg） 表1：加标回收率测定结果 样品名称 原始含量(mg/kg) 加标含量(mg/kg) 回收率（%） Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 辣椒酱 - 0.1 90.15 91.79 80.14 90.35 辣椒酱 - 0.2 89.70 86.57 80.50 86.79 辣椒酱 - 0.2 94.06 90.42 83.96 91.50 辣椒酱 - 1.0 95.49 90.83 92.02 93.05 辣椒酱 - 5.0 95.88 92.92 92.58 92.62 辣椒粉 - 0.2 95.36 92.11 85.59 88.76 辣椒粉 - 1.0 90.87 89.80 88.62 86.67 辣椒粉 - 5.0 93.33 87.88 89.62 89.36 辣椒粉 - 0.2 104.52 106.58 93.35 97.22 辣椒粉 - 1.0 89.92 89.06 88.93 87.24 辣椒粉 - 5.0 94.72 90.04 91.42 89.95 8、结论 使用月旭Welchrom® SDH苏丹红专用柱可以快速、高效检测辣椒油、辣椒酱、辣椒粉等调味品中的四种苏丹红，方法的灵敏度高，重现性好，克服了GB/T19681-2005方法存在的前处理方法繁琐，不稳定、重现性不理想等众多问题。 10、相关产品信息 货号 名称 规格 00599-20006 Welchrom®SDH 500mg/6ml，30pk 00000-30013 15mL螺口尖底离心管 100支/包 00000-30016 50mL螺口尖底离心管 50支/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 WEL-REX-25A 无油真空泵 抽气流量：25L/min 00802-02201 针头式过滤器 Nylon 13*0.22 100pk 00824-11101 一次性注射器 200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 00821-40927 样品瓶 2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 00201-31041 Ultimate® XB-C18 4.6×150mm,5μm 00826-S095P025 苏丹红Ⅰ CAS No.:842-07-9, 25mg 00826-S178P025 苏丹红Ⅱ CAS No.:3118-97-6, 25mg 00826-S189P025 苏丹红Ⅲ CAS No.:85-86-9, 25mg 00826-S191P025 苏丹红Ⅳ CAS No.:85-83-6, 25mg 00824-20005*12 SPE转接头 SPE转接头，12个 00814-01010 乙腈 WelPure，乙腈，CAS No.:75-05-8，HPLC，4L 00814-01013 正己烷 WelPure，正己烷，CAS No.:110-54-3，HPLC，4L 00814-75322 乙酸乙酯 WelPure，乙酸乙酯，CAS No.:141-78-6，HPLC，4L 00835-03006 移液器 labopette移液器，单道可调20~200 µl 00000-10020 移液器吸头 200ul黄吸头，1000根/包 00835-03007 移液器 labopette移液器，单道可调100~1000 µl 00000-10100 移液器吸头 1ml蓝吸头，500根/包 00835-03003 移液器 labopette移液器，单道可调500~5000μl 00000-10500 移液器吸头 5ml大口长吸头，大龙，百得，艾本德，赫施曼，宝德移液器用，300根/包 00835-03002 移液器 labopette移液器，单道可调1000 ~10000 µl 00000-11001 移液器吸头 10ml仿百得，大龙，百得，艾本德，赫施曼，宝予德用，100根/包 VORTEX-5 漩涡混合器 漩涡混合器，转速：2800转/分 KQ5200E 超声波清洗器 清洗槽尺寸(长*宽*高):300*240*150mm 容量(L):10L TD5B 离心机 台式低速自动平衡离心机， LED 数字显示，含水平转子15ml×12、水平转子 50ml×4 A502200 可视氮吹仪 室温+5 ~150℃，1个可视模块，1min ~99h59min 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 Tel:400-808-6760 邮编：321000 E-mail:guodeyong@welchmat.com 鲜香红辣的辣椒油、辣椒酱，可是非法食品添加剂“苏丹红”的重灾区哦！“苏丹红”是一种化学染色剂，它的成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性。“辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测”国标中，样品前处理采用中性氧化铝小柱，该小柱容易吸潮影响活度，从而导致净化效果不理想，重现性不好等问题。月旭科技以客户的痛点为出发点，专门开发了适合检测苏丹红的前处理小柱----SDH苏丹红专用柱，该专用小柱快速、高效、重现性好、净化步骤简便。下面看看实验过程及效果：1、适用范围适用于辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测。2、苏丹红标准溶液的配置分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ各1.0 mg，用3 mL乙醚溶解后用丙酮定容至10 mL，所得苏丹红标准品母液的浓度为100 μg/mL。然后将母液用丙酮稀释至10 μg/mL。（此处如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为后续的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容造成色谱峰型不理想）。3、提取步骤3.1辣椒酱将0.500 g样品置于15 mL 离心管，加入4 mL正己烷，涡旋混合1 min，充分混匀，待净化。3.2 辣椒粉将0.500 g样品置于50 mL 离心管，加入5 mL正己烷，涡旋混合1 min，超声5 min，3000 r/min离心5 min，取上清液。重复上述提取步骤四次，将得到的上清液氮吹浓缩至约4 mL，待上样净化。4、SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® SDH苏丹红专用柱，规格：500 mg/6mL。a)活化：加入5 mL正己烷活化Welchrom® SDH苏丹红专用柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。b)上样：将提取液加入Welchrom® SDH苏丹红专用柱中，并用1mL正己烷润洗离心管一并加入小柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。c)淋洗：用3 mL正己烷淋洗小柱，弃去淋洗液，并抽干小柱。d)洗脱：用5 mL乙酸乙酯洗脱小柱，收集洗脱液，并将小柱抽干，合并收集洗脱液。e)浓缩：将收集的洗脱液在40度加热条件下氮吹至近干，大概剩下半滴液体左右，然后用乙腈复溶并定容到1 mL，此时溶液呈均一相，没有油脂出现。并过0.22 μm PTFE滤膜，上高效液相色谱仪检测。 5、注意事项（1）如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为检测四种苏丹红的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容。（2）加标过程：取5 μL、10μL和50 μL的10 μg/mL标样，25 μL 100 μg/mL的标样加入到0.5 g样品中，加标浓度即为0.1 mg/kg 、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg和5.0 mg/kg。（3）在过SPE小柱的过程中，“活化”和“上样”这两个步骤要注意不要使得小柱干涸，这样会影响小柱的回收率。而在“淋洗”和“洗脱”这两个步骤要注意抽干小柱，以便尽可能多的去除杂质和得到目标物。（4）洗脱液在氮吹浓缩的过程中，注意不要将洗脱液完全吹干。因为这样有可能会影响回收率。6、色谱条件色谱柱：月旭Ultimate®XB-C18（4.6 x 150 mm, 5 μm）流动相：乙腈/水 = 95/5（混成一相）流速：1.0 mL/min进样量：20 μL柱温：30 oC检测波长：500 nm7、色谱图或者加标回收率结果图1：乙腈溶剂色谱图图2：实际辣椒酱样品色谱图图3：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度均为: 0.1 μg/mL）图4：实际辣椒酱样品加标色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 0.2 mg/kg）图5：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 0.5 μg/mL）图6：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 1.0 mg/kg）图7：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 2.5 μg/mL）图8：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 5.0 mg/kg）表1：加标回收率测定结果 8、结论使用月旭Welchrom® SDH苏丹红专用柱可以快速、高效检测辣椒油、辣椒酱、辣椒粉等调味品中的四种苏丹红，方法的灵敏度高，重现性好，克服了GB/T19681-2005方法存在的前处理方法繁琐，不稳定、重现性不理想等众多问题。9、相关产品信息