动物源性食品中硝基呋喃代谢物检测方案(液质联用仪)

thermoscientific热线8008105118电话 4006505118www.thermofisher.com 全新三重四极杆液质联用仪 TSQ Altis 测定硝基呋喃代谢物的应用 摘要 本文在赛默黑全新液相色谱串联三重四极杆质谱 TSQ Altis平台针对国标 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法》建立了快速检测方法。4种硝基呋喃类代谢物在其适宜的浓度范围内线性关系良好(0.02-200 ng/mL， r>0.99，其中2-NP-AMOZ 0.01-200ng/mL)， LOQ(20 ppt， 其中2-NP-AMOZ 为 10ppt)， 以及 LOD均能满足国标规定的检测要求，运用本方法对动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留检测具有深远的指导意义。 关键词 硝基基喃， TSQ Altis，药物残留 1.引言 硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等。硝基呋喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗。该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物3-氨基2-噁唑烷酮(AOZ)、3-氨基5-吗咻代甲基2-噁唑烷酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、、1-氨基乙 内酰脲(AHD)均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用对其健康产生危害。已有国家标准 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法》，标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中四种硝基呋喃类药物代谢物残留量的定性确证和定量测定。 本文建立了基于 Thermo Fisher Scientific TSQ Altis 三重四极杆串联质谱仪针对硝基呋喃代谢物的检测方法。本方法灵敏度高，稳定性好，远远满足规定的检测要求，可为食品安全监控提供有效技术支持。 2.实验部分 2.1仪器与试剂 ( 2.1.1 Thermo Fisher Vanquish Binary Flex超高效液相色 谱仪 ) 2.1.2 Thermo Fisher TSQ Altis 三重四极杆质谱仪 ( 2.1.3 甲醇(色谱纯，美国 Thermo Fisher公司)；实验用水为 Milli-Q去离子水； 甲酸(LCMS纯， 美国 Thermo Fisher公司) ) ( 2.1.4 硝基呋喃类4种代谢物标准品均购自德国Dr.Ehrenstrofer 公司 ) 2.2化合物信息及溶液配制 2.4质谱条件 2.2.1 4 种硝基呋喃类药物代谢物信息(表1) 化合物信息表 中文名 英文名 CAS 分子式 分子量 呋喃唑酮 2-NP-AOZ 19687-73-1 C10H，N304 235.06 呋喃妥因 2-NP-AHD 623145-57-3 C10HgN4O4 248.05 呋喃西林 2-NP-SCA 16004-43-6 CgHgN4Os 208.06 呋喃它酮 2-NP-AMOZ 183193-59-1 C15H18N405 334.13 可加热电喷雾电离源(HESI)，正离子扫描模式；扫描方式：SRM；喷雾电压(+)：3800V；离子传输管温度：300℃；鞘气压力40 arb； 辅助气压力4 arb； 离子源温度：350℃；碰撞气压力：1.5mTorr；选择反应监测离子对信息见表3。 表3.4种化合物及质谱采集参数 Table 3 MS/MS parameters of 4 compounds 2.2.2 储备液：分别精确称取四种硝基呋喃代谢物粉末适量，甲醇溶解，配制储备液 200 ug/mL。 2.2.3 系列标准曲线：以甲醇/水(1/9，V/V)溶剂，配制系列标准溶液0.01 ng/mL-200 ng/mL 2.3色谱条件 色谱柱： Thermo Accucore aQ(100×2.1mm) 柱温：30℃； 进样量：10uL； 化合物 母离子 RF Lens电压 子离子 碰撞能量 (m/z) (V) (m/z) (V) 2-NP-AOZ 236.1 59 134.0* 13 104.0 21 2-NP-AHD 249.01 50 134.0* 12 104.0 20 2-NP-SCA 209.0 46 166.1* 12 192.0 10 2-NP-AMOZ 335.0 52 291.1* 10 262.1 17 流动相：A为水(含0.1%甲酸)，B为甲醇，梯度洗脱程序(表2) 注：带*的为定量子离子 表2.梯度洗脱程序 3.实验结果与讨论 时间 A B 流速 0.00 90 10 0.30 0.10 90 10 0.30 1.50 5 95 0.30 3.50 5 95 0.30 3.60 90 10 0.30 5.00 90 10 0.30 3.1灵敏度测试 采用上述仪器分析方法，4种硝基呋喃代谢物在5分钟内均可获得良好的色谱峰，图1为四种硝基呋喃代谢物在 LOQ处(0.02ng/mL， 2-NP-AMOZ 为 0.01 ng/mL)的选择反应监测色谱图，其中各化合物灵敏度测试结果见表4。 图1.硝基呋喃代谢物的色谱图(20 pg/mL) 2-NP-AMOZ(10 pg/mL) Fig.1 SRM Chromatogram (20 pg/mL)-)2-NP-AMOZ (10 pg/mL) 3.2线性范围则试 采用上述仪器分析方法，对4种硝基基喃类代谢物进行线性范围测试，线性相关系数r均大于0.99，线性关系良好。4种硝基呋喃类代谢物线性范围、线性相关系数、LOD(S/N>3)及LOQ(S/N >10)结果见表4，化合物线性方程图见图2。 表4.4种化合物的线性范围、线性相关系数及 LOD、LOQ、RSD Table 4 Linear Ranges， correlation coefficients， LOD， LOQ， RSD of 4 compounds 化合物 线性范围 相关系数 LOD LOQ RSD% (ng/mL) (r) (pg/mL) (pg/mL) (n=10) 2-NP-SCA 0.02-200 0.9995 5 20 1.25 2-NP-AOZ 0.02-200 0.9932 1 20 1.48 2-NP-AHD 0.02-200 0.9988 5 20 1.79 2-NP-AMOZ 0.01-200 0.9995 1 10 0.71 图2.4种化合物线性方程图 Fig.2 Linear Ranges， Linear equations and correlation coefficients (0l=u)利qddp zoV-dN-Zt医 (0l=u) 利重 qddl VoS-dN-Z8医 則b凿凿‘(ol=u7w/6ui)组中b‘￥器冷平丁迷 业铛碧孙CS8秋8 本文建立了三重四匹杆液质联用仪 (TSQ Altis)分析4种硝基呋喃代谢物的检测方法。由实验结果可以看出，基于Thermo Fisher TSQ Altis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备优异的重现性。本方法可用于硝基呋喃代谢物的日常分析检测。 赛默飞 赛默飞色谱 官方微信 和质谱中国 本文在赛默飞全新液相色谱串联三重四极杆质谱 TSQ Altis平台针对国标 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱 / 串联质谱法》建立了快速检测方法。4 种硝基呋喃类代谢物在其适宜的浓度范围内线性关系良好（0.02-200 ng/mL，r2>0.99，其 中 2-NP-AMOZ 0.01-200ng/mL）， LOQ（20 ppt， 其中 2-NP-AMOZ 为 10ppt），以及 LOD 均能满足国标规定的检测要求，运用本方法对动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留检测具有深远的指导意义。硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等。硝基呋喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗。该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物 3- 氨基 2- 噁唑烷酮（AOZ）、3-氨基 5- 吗咻代甲基 2-噁唑烷酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基乙内酰脲（AHD）均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用对其健康产生危害。已有国家标准 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱 / 串联质谱法》，标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中四种硝基呋喃类药物代谢物残留量的定性确证和定量测定。