饲料中恶虫威检测方案(气相色谱仪)

21-ANJIJIASUANZHI #72 总结 GC-NPD 同时测定饲料中的6种氨基甲酸酯农药残留 刘茜余天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 引言 氨基甲酸酯类农药是在农作物保护中广泛使用的农药，自20世纪70年代以来，由于有机氯农药受到禁用或限用，以及抗有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，使其成为继有机氯和有机磷之后发展的第三代杀虫剂，而此类杀虫 剂效力强，易分解无残毒，故广泛用于毒杀农业害虫。饲料业以种植业为基础，因而各种农药将不可避免地在饲料中形成残留而造成污染，氨基甲酸酯类农药的结构特性是含有一个N-甲基基团，为白色晶体，难溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷等，在碱性和高温条件下水解。大多数的氨基甲酸酯类农药在施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物，这些代谢产物通常具有与母体化合物相同或更强的活性，因此，在检测农药残留时必须考虑这些在数量上更多于母体氨基甲酸酯类农药的代谢产物。但由于氨基甲酸酯类农药被大量不科学地使用，饲料中转入生畜，导致人畜中毒现象时有发生，因此许多国家和地区对这种农药在食品中的残留量都制定了严格的限量标准，我国目前有国标明确规定几种氨基甲酸 酯限量为 0.02-0.04 mg/kg。 对于目前世界范围内对氨基甲酸酯类农药的残留限量规定，主要采用比色法、免疫分析法、生物检测法、色谱法等。本方法采用国标所用分析饲料中氨基甲酸酯的分析方法，选择赛默飞世尔科技气相色谱(NPD)，建立了一种有效的分析饲料中氨基甲酸酯的检测方法。 仪器 仪器条件见表1。 表1.仪器参数设置 仪器型号 及配置 Trace 1310-NPD SSL 进样口 AS1300 自动进样器 色谱柱类型 TG-5SIL MS， 30 m， 0.25 mm， 0.25 pm 尺寸、S/N号 柱温：70℃(0min)，10℃/min 到 230℃(10min)， 及柱温 P/N： 26096-1420； S/N： 1160056 NPD：300℃， 铷珠类型： TID-2， PN： 46500256 检测器类型、 电流：2.610A 工作参数 空气流量：60mL/min 氢气流量：2.3mL/min 尾吹气流量：15mL/min 载气类型及流速 氮气，恒流模式，流速：1.0mL/min 进样方式及进样 进样模式： splitless， 进样口温度：280℃； 体积(如使用顶 空、吹扫捕集需 增加具体参数) 进样体积：1pL 标样制备 以正己烷为溶剂将购买的标样(100 pg/mL)稀释为混合标样，准确移取6种对照品各100pL，稀释至1mL， 配制为10 ug/mL 的标准储备液。 以正己烷为溶液，将以上标准储备液稀释至0.1、0.2、0.3、0.5、0.8、1.0 pg/mL 的标准液备用。 加标样品配备 准确角取10.0g饲料样品，加入10 pg/mL的标准储备液20pL、100pL，制得含六种氨基甲酸酯类农药分别为0.02ug/g、0.1 pg/g 的加标样品。 试样制备 实验室样品经混合均匀后，按四分法缩减至100g，粉碎，使之完全通过 0.45 mm筛孔，再充分混合，备用。饲料的粉碎程度越碎越易于提取。 提取 准确称取样品10.0g至于试管中，以100mL正己烷：丙酮(1：1)超声提取 20 min，提取完成后转至20mL离心管，以10000 r/min 离心5 min， 离心后取上清液。将剩余残渣以 20mL正己烷：丙酮(1：1)同样重复提取一次，合并提取液120 mL， 于60℃以旋蒸仪浓缩到约2mL，待固相萃取净化。 净化、浓缩 取 Florisl固相萃取柱依次采用5mL丙酮、5mL正己烷活化，取备用液2mL过柱，弃弃流出液。以2mL丙酮- 正己烷(1：4)分两次洗脱，再以2mL丙酮-正己烷(1：2)分两次洗脱，最后再以2mL丙酮分两次洗脱，收集洗脱液，备用。 将以上洗脱液浓缩至尽干，以1mL正己烷定容，待上机分析。 NPD的参数优化 对于 NPD 检测器，首先打开检测器的气体流量按照方法中设置各参数，将铷珠在激发电流下激发。激发铷珠过程首先从2.5A起，以0.002A的的频率缓慢提高激发电流，当输出信号有一个较大飞跃做为成功激发电流。激发后老化过夜，待信号稳定在 20 pA下可正常实验。 本实验所分析目标物为含氮化合物，对于含氮类化合物，灵敏度较含磷类化合物影响低，因此，为提高灵敏度可通过提高氢气或降低空气流量，另外还可以通过提高激发电流来达到提高仪器响应的目的，但此时仪器的基线提高，虽然灵敏度有所提高也降低了铷珠的使用寿命。对于本方法中通过对各物质灵敏度的情况考察，最终确定将空气流量设置为60 mL/min， 氢气流量 2.3 mL/min。 前处理方法的选择 参考 GB-T 19373-2003的要求，对饲料中的氨基甲酸酯进行分析。本方法中主要考察了丙酮、正己烷、丙酮-正己烷、二氯甲烷-石油醚几种不同溶剂提取效率，实验结果表明，丙酮-正己烷(1：1)的提取效果最好，如下图为四种不同提取溶剂对氨基甲酸酯的提取效果色谱图。 图1.四种不同提取溶剂对氨基甲酸酯的提取效果色谱图，其中k图(粉色)为正己烷提取图，3图(黑色)为丙酮提取，4图(棕色)为二氯甲烷-石油醚提取图，5图(绿色)为正己烷-丙酮提取图。 图2.标准溶液、样品加标色谱图，浓度0.5 pg/ml。其中上图为标准色谱图， 下图为样品加标色谱图，其中1为速灭威，2为叶散蝉，3为仲丁威，4为恶虫威，5为呋喃丹，6为西威因。 图3.标准溶液色谱图，浓度为0.5 ug/mL 线性、检出限及 RSD 配制浓度分别为：0.1、0.2、0.3、0.5、0.8、1.0pg/mL的交准溶液，采用上述方法分别进样分析，考察各组分在0.1-1.0 ug/mL 浓度范围内的线性。实验结果表明6种组分在0.1-1.0 pg/mL线性关系良好，线性相关系数均大于0.996(见表3)。o 对已买饲料进行添加混合标准溶液(加标浓度为0.02ug/g、 0.1 ug/g)，考察六种氨基甲酸酯的加标回收情况。实验结果表明各组分的加标回收率均在79.3-98.7%之间，符合日常分析检测的要求。对 0.02 (S/N： 18)、0.1 ug/g (S/N：103)加标水平平行测定3次，平均 RSD 值在4.5-8.3%，符合稳定性要求。同时以三倍信噪比计算各组分出限，各组分仪器检出限为0.1-0.2 ug/mL(见表2)。o 化合物 线性方程 R2/% 加标0.02 ug/g回收率/% 加标0.1 pg/g回收率/% 仪器检出限/pg/mL 方法检出 限/ug/g 平均相对偏差 速灭威 Y=0.0096+0.0052*X 0.99942 88.6 98.7 0.1 0.02 5.5 叶散蝉 Y=0.0027+0.0074*X 0.99952 85.4 89.5 0.1 0.02 7.8 仲丁威 Y=0.0106+0.0055*X 0.99882 83.8 85.2 0.1 0.02 6.8 恶虫威 Y=0.0083+0.0083*X 0.99677 87.3 90.2 0.2 0.04 9.7 呋喃丹 Y=0.0096+0.0083*X 0.99903 79.3 88.5 0.1 0.02 6.5 西威因 Y=0.0154+0.0032*X 0.99825 89.2 95.3 0.1 0.02 8.2 本实验采用赛默飞世尔科技 GC-NPD 测定饲料中的氨基甲酸酯，国标中采用石油醚-二氯甲烷进行提取，本方法通过实验考察得采用丙酮-正己烷的提取效果更好。同时国标中采用的是填有无水硫酸钠、氟罗里硅土玻璃层析柱进行净化，本方法采用 Florisl 固相萃取柱净化，净化效果更好，回收率更高，更有益于NPD 检测器铷珠寿命的延长。本方法准确，灵敏度高，满足检测要求。 ( [1]肖志高，龚道新，杨仁斌等.饲料中氨基甲酸酯类农药多残留量的毛细管气相色谱分析方法湖南农业大学 学报，2006，32(3)： 336-339 ) ( [2]万益群 ， 毛雪金，鄢爱平.GC-NPD 同时测定中草药 中有机磷和氨基甲酸酯农药残留量分析实验室 2009，28(7)：34-37. ) ( [3]张 帆 ，李海海，王利兵等.食品中氨基甲酸酯类农药 残留的检测方法研究进展「 中国食物与营养，2010，(2)： 64-67. ) ( .[4 ] GB19373-2003， 《饲料中氨基甲酸酯类农药残留量测 定 》 [ S ]. ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118，400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherSCIENTIFIC AN_C_GC-