蘑菇中酸水解氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

Biochrom30+氨基酸分析仪检测蘑菇中酸水解氨基酸 一、样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，优级纯 、2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1 混合 1、3 水：去离子水 1、4 苯酚：须重蒸 11、5 17种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 18 2、 标样配置 氨基酸混合标准储备液：：含有天冬氨酸、苏氨酸等17种常见组成蛋白质的氨基酸。 将17种氨基酸混合标准储备液及PH2.2的柠檬酸缓冲液按照1：9配置成0.25umol/L的标准品待用。 3、 前处理设备 1) 天平 2) 水解管 3) 量筒 4 无油真空泵 5) 干浴水解、浓缩仪 6) 移液管 7) 0.45um 滤膜 4、 样品制备(参考国标 GB/T 18246-2000) 酸水解法： 将蘑菇样品60度烘干，粉碎，过60目筛，称取 102.4mg，于20mL安培瓶中，加入10mL6mol/L盐酸置液氮中冷冻，然后，抽真空至<7Pa后封口。将水解管放入干浴水解、浓缩仪中，110℃水解 22-24h，冷却、混匀、开管、过滤，用移液管取适量滤液，在干浴水解、浓缩仪中60℃吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入 3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，氨基酸浓度达到50-250nmol/mL，混匀、过滤后上机。 二、分析方法描述(Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1) 色谱柱： Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱，，4.6×20cm 2) 分离程序： NO. Time Temp Buffer Pump Nin Rec Commands 1 01：00 48 1 35.0ml/h ON OFF 2 00：00 48 1 35.0ml/h ON OFF Reset 3 01：00 48 1 35.0ml/h ON OFF Load 4 06：40 48 1 35.0ml/h ON ON 5 13：00 52 2 35.0ml/h ON ON 6 01：00 52 5 35.0ml/h ON ON 7 16：00 95 5 35.0ml/h ON ON 8 04：00 95 6 35.0ml/h ON ON 9 04：00 95 1 35.0ml/h ON ON 10 09：00 48 1 43.0ml/h OFF OFF 11 02：00 48 1 35.0ml/h ON OFF End 3) 运行时间：经分析时间+再生时间 57min 4) 反应单元温度：135℃。 5) 检测波长：：： 570nm、440nm 同时检测。 三、外标法定量 1) 17种氨基酸标准品谱图 2) 进标样，拟合校正曲线，使用外标法软件自动算出每个氨基酸的含量。 3) 样品中含量的计算公式 按照以下公式计算各个氨基酸在在品中的质量百分比： W%=A/mx10-6xD×100 W-某种氨基酸含量 A-每毫升上机水解液中氨基酸含量， ng m-样品质量， mg D一样品稀释倍数 附、蘑菇分析图谱及做样结果 结果表(外标法-Bio 30+-2014-2-18 18_33_05-570nm) 1 化合物 名称 Asp 保留时间 [min1 7.924 峰面积 [mV] 2744.046 含量 [mg] 1.771 含量 [%] 1.729 2 Thr 9.708 2149.006 1.203 1.174 3 Ser 10.480 2300.129 1.086 1.060 4 Glu 12.364： 4749.108 3.285 3.208 5 Gly 17.980 3288.370 1.151： 1.124 6 Ala 19.160 3058.661 1.240 1.211 7 Cys 20.496 108.043 0.119 0.116 8 Val 21.096： 2260.329 1.217 1.189 9 Met 22.816 237.909 0.166 0.162 10 Ile 24.140 1441.089 0.917： 0.896 11 Leu 24.992 2479.466 1.507 1.472 12 Tyr 27.488 794.081 0.696 0.680 13 Phe 28.276 1376.042 1.081 1.056 18 Lys 32.696 799.234 0.523 0.510 21 His 34.820 2639.100 1.701 1.661 24 Amm 38.356 6789.369 1.671 1.632 25 Arg 42.132： 1707.753 1.381 1.349 合计 38921.735 102.400 20.229 结果表(外标法-Bio 30+-2014-2-1818_33_05-440nm) 1 化合物名称 Pro 保留时间[min1 13.844 峰面积 [mV] 738.110 含量 [mg] 1.090 含量[%] 1.064 合计 738.110 102.400 1.064