食品中苯甲酸和山梨酸检测方案(气相色谱仪)

苏州市莱顿科学仪器有限公司www.laidun17.cn www.sepu17.cn 食品中的苯甲酸和山梨酸GC法 1 适用范围 联合测试苹果汁、杏仁酱和鱼酱(0.5—2g/kg水平)，具有代表性的富含碳水化合物的浆状物、富含脂肪和碳水化合物以及富含蛋白质的食品。 2 原理概要 苯甲酸和山梨酸用乙醚提取，并且接着在NaOH水溶液和CH2Cl2中进行分配。酸从食品中分离出来，并转变成三甲基硅 (TMS)酯，用GC测定。苯乙酸和己酸分别用作苯甲酸和山梨酸的内标。 3 仪器和试剂 3.1 仪器 (a)气相色谱仪——使用线性程序升温炉，火焰离子化检测器和记录仪。可采用下列条件：色谱柱，1.8m×2mm(内径)填有涂上3%OV-l的100—120目Varaport30载体的螺旋状玻璃管。操作温度：炉温80—120℃，8℃/min；进样室200℃，检测器280℃。氮载气流速20ml/min。己酸、山梨酸、苯甲酸和苯乙酸的近似保留时间分别为2.5，4，5和6min。 (b)离心机——带30ml和200ml的离心瓶。 (c)机械振荡器——Bülher SM-B或同类产品。 3.2 试剂 在全部分析中使用分析纯试剂。 (a)内标溶液——将250mg苯乙酸和250mg己酸溶解于100ml 3%KOH水溶液中。 (b)硅烷化试剂——N-甲基-N-三甲基硅烷-三氟乙酸胺 (MSTFA)。 (c)标准溶液——分别按下述浓度用CHCl3配制苯甲酸、山梨酸、苯乙酸和己酸的混合标准溶液： 1)200,200,750和750μg/ml 2)400,400,750和750μg/ml 3)600,600,750和750μg/ml 4)800,800,750和750μg/ml 5)1000,1000,750和750μg/ml 4 试验过程 4.1.样品的制备 在机械混合器中将样品混匀。如果由于样品很稠而很难混匀，可以用其它任何技术以确保样品均匀。 4.2.提取 (a)一般方法——准确称取5.0g混匀的样品，放进带有聚四氟乙烯衬螺帽的30ml离心管中。加入3.00ml内标液，1.5mlH2SO4(1+5)，5g沙子和15ml乙醚。拧紧螺帽，不能泄漏。机械振荡5min，然后在1500×g条件下离心10min。用移液管将乙醚层移到250ml分液漏斗中，每次用15ml乙醚，重复提取2次。 每次用l5ml0.5N NaOH和10ml饱和的NaCl溶液提取2次合并后的乙醚相。收集水层，放入250ml分液漏斗中，加入2滴甲基橙，用HCl(1+1)酸化溶液到pH=1。分别用75,50和50ml的CH2Cl2连续提取。如果发生乳化，则加入10ml NaCl饱和溶液。通过装有15g无水Na2SO4的过滤器倾析CH2Cl2提取液到250ml圆底烧瓶中，用旋转蒸发器于40℃蒸发CH2Cl2溶液至刚干。 (b)奶酪和糊状粘稠的食品——精确称取5.0g均匀样品，放入200ml离心瓶。加入15ml水并用玻璃棒搅拌，直到样品悬浮在水相中。加入3.00ml内标液，1.5mlH2S04(1+5)和25ml乙醚。小心塞住离心瓶，检查是否泄漏。机械振荡5min，然后在2000×g条件下离心10min。用移液管移取乙醚层到250ml分液漏斗中。每次用25m1乙醚重复提取2次。按 (a)中从 “提取合并后的乙醚相”开始继续操作。 4.3.衍生化气相色谱 将10.0mlCHCl3加到盛有残渣的250ml圆底烧瓶内。塞紧，用手摇2min。移取1.00mlCHCl3溶液到8ml带聚四氟乙烯衬的螺帽的试管中，加入0.20ml硅烷化试剂。盖好，在60℃烘箱内或水浴上放置15min。重复进样1μl样品液到气相色谱仪内，当溶剂峰出现时，开始程序升温。测量峰高和计算苯甲酸/苯乙酸及山梨酸/己酸的峰高比。重复测定的峰高比使用平均值。重复进样的峰高比的差值应≤5%。 4.4.标准曲线的制备 转移1.00ml标准溶液到5个8ml带聚四氟乙烯衬的螺帽的试管中。向每个试管内加入0.20ml硅烷化试剂。盖好，在60℃烘箱内或水浴上放置15min。重复进样1μl标准溶液到色谱仪内，使用和样品溶液相同的条件。测量峰高和分别计算苯甲酸/苯乙酸和山梨酸/己酸峰高比。重复进样的峰高比差值应≤5%。以每个防腐剂重量比(x)对平均峰高比(y)作图，用最小二乘法计算标准曲线的斜率和截矩。 4.5.计算 防腐剂，mg/kg=[(y-a)/b]×(W'×W)×l000 式中，b=标准曲线斜率；a=截距；y=(防腐剂/内标)的峰高比的平均值；W=以g为单位的样品量；W'=以mg为单位的内标量。 5.来源 AOAC 官方方法 983.16 （第17版） 第1页 共2页