蔬菜及其制品中灭线磷、嘧酶胺、莠去津、氟硅唑、噻嗪酮、异丙威检测方案(气相色谱仪)

分散型固相萃取-气相色谱法测定蔬菜及其制品中灭线磷、嘧酶胺、莠去津、氟硅唑、噻嗪酮、异丙威残留量 朱莉萍*董静 孙军 潘守奇 潍坊出入境检验检疫局，山东潍坊，261041 摘要 建立了蔬菜及其制品中灭线磷、嘧酶胺、莠去津、氟硅唑、噻嗪酮、异丙威残留量分散型固相萃取-气相色谱同时分析方法。在净化过程中加入C18、硅胶、PSA等吸附剂粉末进行净化，根据检测器进行溶剂转溶，采用 DB-1701毛细管柱分离， FTD 检测，添加浓度在0.005~0.05mg/kg 之间时，回收率(n=6)在80~110%之间，相对标准偏差分别为1%~5%，该方法的检出限为灭线磷、嘧酶胺 0.005 mg/kg；氟硅唑、莠去津、噻嗪酮、异丙威 0.01 mg/kg。该方法步骤简单，净化效果好，具有良好的灵敏度、回收率和重现性。 关键词 分散型固相萃取气相色谱法农药 蔬菜 引言 农药残留和食品安全问题在国际社会越来越受到广泛关注，国外对我国出口食品农产品的农药残留进行更加严格的检测，在不同农产品中先后检出灭线磷、嘧酶胺、莠去津、氟硅唑、噻嗪酮和异丙威残留。灭线磷属于有机磷类杀虫剂，莠去津属于三氮苯类除草剂，异丙威属于氨基甲酸酯类杀虫剂，噻嗪酮是氯基甲酸酯类杀虫剂，氟硅唑为农用唑类杀菌剂，嘧霉胺属于苯胺基嘧啶类杀菌剂，我国目前对上述农药的检测技术研究较少[1.2]，尤其是对六种不同性质农药同时检测，目前尚无标准检测方法和文献报道。2003年美国农业部提出 QuEChERS 样品处理技术[3.4.5.6]，采用分散型固相萃取(dispersive-SPE)对提取液进行净化，本文采用此技术，在实验的基础上加入C18、硅胶、PSA等吸附剂粉末进行净化，通过溶剂转溶结合气相色谱-FTD检测器建立了蔬菜及其制品中灭线磷、嘧酶胺、莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑同时检测方法。实验证明，此方法操作简便、快速，结果准确可靠。 2 实验部分 2.1 主要仪器和试剂 岛津 GC2010 气相色谱仪，配 FTD 检则器、自动进样器；振荡器； 旋转蒸发仪；研磨机；离心机；；电子天平； 均质器；电动吸引器。灭线磷、嘧酶胺、莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑农药标准品(以上标准品均为 sigma 公司的有证标准物质)；乙酸乙酯、丙酮、乙腈均为色谱纯；冰醋酸：优级纯； 无水乙酸钠：分析纯；无水硫酸镁：分析纯(用前在 500℃马弗炉内烘 5h， 冷却取出装瓶备用)；PSA粉、C18、石墨碳黑粉((均为AAGELATECHNOLOGIES INC)；硅胶 (sigma 公司60~100目，用前活化处理)；0.1%冰醋酸/乙腈溶液(移取 1ml冰醋酸加入1000ml乙腈混匀)。 2.2 实验方法 2.2.1标准工作液的配制 称取灭线磷、嘧酶胺、莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑标准品各10.0mg，用丙酮溶解后，置于6个100ml 棕色容量瓶中，用丙酮定容至刻度，混匀，浓度为 100ug/ml 为储备液。分别移取以上标准储备液各1.0ml，置于100ml棕色容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，浓度为lug/ml，再稀释为系列浓度的混合标准工作液。 2.2.2色谱条件 DB-1701 毛细管柱(30m ×0.32mm ×0.25um)；色谱柱温度：60℃保持 1min(25℃/min)-160℃保持 2min(20℃/min)-240℃保持9 min； 检测器温度：280℃；进样口温度：240℃；载气及尾吹气：高纯氮，纯度>99.999%，柱流量均为1.4ml/min，尾吹气流量：30ml/min，氢气：3mL/min、空气：150mL/min。进样量： 1ul。 2.2.3样品制备及提取 2.2.3.1蔬菜及其制品(葱、蒜等含硫基或巯基类蔬菜除外) 取样品适当克数，置于100ml塑料离心管中，加入0.1%醋酸/乙腈溶液15ml，无水硫酸镁6.0g，无水乙酸钠 1.5g， 用玻璃棒充分搅拌均匀，于均质机上高速均质2min 左右， 5000r/min高速离心8min， 取10ml上清液于15ml塑料离心管中，氮气吹干，准确加入乙腈溶液 2ml 溶解残渣，1400r/min 涡混2min。 2.2.3.2葱、洋葱、蒜等含硫基或巯基类蔬菜 根据样品情况切块，采用格兰仕微波炉中火消解30秒，样品消解之后打碎称取适当克数进行提取，提取步骤同2.2.3.1。 2.2.4提取液净化 根据样品的色素及基质情况将溶解液转移入盛有适量 PSA 粉、 C18粉、硅胶(已活性化处理)、无水硫酸镁(视样品含水量选择用量)的另一15ml塑料离心管中， 1400r/min 涡混2min.，离心。 2.2.5溶剂转溶 取上清液 1ml， 置于 15ml离心管中氮吹至近干，用乙酸乙酯溶解，定容至1ml供GC测定。 3 结果与讨论 3.1含硫基或巯基类物质蔬菜的处理 本方法在前处理前对此类蔬菜微波消解，微波消解可破坏一种在样品制备过程中能够释放含硫基或巯基类干扰物的酶，再进行样品前处理。消解条件根据样品情况调整[7]。 3.2吸附剂粉末的选择 蔬菜种类繁多基质复杂，只用PSA达不到理想效果，因此考虑在相同混标溶液中分别加入C18等不同的吸附剂粉末处理，所得的回收率数据见表1，石墨炭黑粉等去除色素等杂质的效果好，但是对灭线磷、嘧酶胺、异丙威这三种农药吸附较强、回收率低， C18和硅胶对上述六种农药回收率影响较小。所以本方法选择 PSA、硅胶、C18加强净化效果。 表1 六种农药的混合标准品分别经四种吸附剂处理后的回收率 农药 Pesticides 不同固相萃取粉末处理后回收率(%) PSA C18 硅胶 石墨炭 灭线磷 ethoprophos 85.2 99.8 92.1 69.2 莠去津 atrazine 82.6 99.8 89.1 81.3 噻嗪酮 buprofezin 87.7 98.9 92.9 83.3 异丙威 isoprocorb 102.6 103.0 99.8 62.1 嘧酶胺 pynimethanil 93.8 90.1 98.1 5.1 氟硅唑 flusilazole 85.3 90.3 90.1 74.2 3.33B吸附剂粉末用量的优化 吸附剂粉末的用量也是影响前处理效果的重要因素，应根据样品情况和待测物性质通过实验选择合适的吸附剂用量。对于蔬菜而言，吸附 剂粉末用量范围一般为：PSA粉100-200mg、C18粉100-200 mg、硅胶100-300 mg。本实验中，样品为蒜及芋头，鲜蒜样品经微波消解后，其可释放含硫基或巯基类物质的酶被破坏，基质较干净；芋头样品基质相对比较干净，所以在本方法的净化过程中采用150mgPSA、100mgC18、150mg硅胶。 3.4溶剂转溶 对于不同性质的农药的同时提取，乙腈效果较好。本方法采用的检测器为 FTD 检测器，如果以乙腈做溶剂将导致基线高，灵敏度低，在净化步骤之后采用了到乙酸乙酯的转溶，转溶试验标准品谱图见图1、添加回收谱图见图2。乙腈到乙酸乙酯的转溶过程对回收率影响不大，但基线明显降低，灵敏度提高。 图111标准品谱图 图2芋头样品中的添加回收谱图 3.5标准曲线绘制 取系列浓度的混合标准工作液，依次进样，以色谱峰面积对浓度作标准曲线，得6种农药的线性方程及相关系数，在0.002~0.2ug/ml之间线性关系良好(见表2)。 表2 6种农药线性方程及相关系数 农药Pesticides 线性方程 linear equation 相关系数correlationcoefficient 灭线磷 ethoprophos v=2.92798e'x-1.2 e 0.9991 莠去津atrazine y=3.07272ex-4.4 e 0.9999 噻嗪酮 buprofezin y=4.896298ex-2.5e’ 0.9999 异丙威 isoprocorb y=3.399298e x-5.2e 0.9990 嘧酶胺 pynimethanil y=1.316015ex-9.1 e’ 0.9991 氟硅唑 flusilazole v=3.178594ex-7.2e’ 0.9995 3.6方法回收率、精密度及检出限测定 在已知不含农药残留的蒜及芋头样品中分别加入不同浓度的混合标准工作液，按本方法进行提取、净化和检测，以峰面积计算各种农药在0.005~0.05mg/kg 添加水平的回收率(n=6)，计算各农药的平均回收率及相对标准偏差(见表3)，未净化处理的蒜及芋头空白样品谱图见图3、标准品谱图见图4、检测限水平添加回收谱图见图5。由此得方法实际检出限为：灭线线、嘧酶胺 0.005 mg/kg， 莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑 0.01mg/kg，完全满足蔬菜及蔬菜制品中农药残留量的检测要求。 图3蒜与芋头空白样品谱图 图4农药标准品的色谱图 图55蒜样品添加回收的色谱图 1. 异丙威 (isoprocorb) 2.灭线磷(ethoprophos)3. 嘧酶胺 (pyrimethanil.)4. 莠去津(atrazine)5.噻嗪酮 (buprofezin) 6.氟硅唑(Flusilazole) 表3 6种农药的回收率实验结果 农药 Pesticides 添加水平1 添加水平2 添加水平3 回收率(%)Recovery RSD(%) 回收率(%)Recovery RSD(%) 回收率(%)RecoveryRecovery RSD(% 灭线磷 ethoprophos 92.1 3.8 91.2 2.0 86.7 1.8 莠去津 atrazine 104.1 2.8 91.5 2.1 86.1 2.9 噻嗪酮 buprofezin 90.3 3.4 89.1 1.9 95.2 1.1 异丙威 isoprocorb 97.2 2.2 88.9 3.2 86.0 3.7 嘧酶胺 pynimethanil 103 2.6 91.8 3.6 98.8 1.2 氟硅唑 flusilazole 85.8 2.8 86.7 3.2 82.8 1.7 添加水平1： 0.005 mg/kg灭线磷、嘧酶胺+0.01 mg/kg 莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑 添加水平2：0.01 mg/kg灭线磷、嘧酶胺+0.02mg/kg莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑 添加水平3： 0.025 mg/kg 灭线磷+0.03 mg/kg 嘧酶胺+0.05mg/kg 莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑 本方法采用分散型固相萃取-气相色谱法FTD检测器测定蔬菜及其制品中的灭线磷、嘧酶胺、莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑残留量。根据蔬菜样品的情况及农药性质选择多种吸附剂粉末及用量，此净化措施减少了杂质干扰，色 谱峰分离效果好，具有良好的精密度、较低的方法检测低限和较高的回收率。通过实际验证，本方法适用于对蔬菜及其制品中灭线磷、嘧酶胺、莠去津、噻嗪酮、异丙威、氟硅唑残留量的同时测定。