注射用头孢唑林钠中无菌检查方法验证检测方案(集菌仪)

维普资讯 http：//www.cqvip.com中国药师 2006年第9卷第10期 China Pharmacist 2006， Vol. 9 No.10 维普资讯 http：//www.cqvip.com科技交流WWw. zgys.org970 注射用头孢唑林钠的无菌检查方法验证 田光彩 (濮阳市药品检验所 河南濮阳457000) 摘 要 目的：完善注射用头孢唑林钠的无菌检验方法。方法：通过确定冲洗量、选择阳性对照菌及加入顺序等，以注注用头孢唑林钠为例，说明无菌检查法建立在验证试验基础上的必要性。结果：注射用头孢唑林钠的验证试验，保证无菌检查方法的科学性和检验结果的准确性，证明方法可行。结论：将中国药典2005年版二部样品项下无菌检验方法进一步完善。 关键词 注射用头孢唑林钠；薄膜过滤法；验证试验 中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2006)10-0969-02 注射用头孢唑林钠( Cefazolin Sodium for Injection)为第一代半合成头孢菌素，抗菌作用强，抗菌谱广，应用日趋广泛，临床用于各系统感染均有较好疗效。笔者在执行现行的国家标准过程中选择了该注射剂，对无菌检查法进行了验证性实验，旨在为进一步完善该药品的无菌检查法提供依据。 仪器与材料 1.1 仪器 JTY智能集菌仪、集菌培养器(均为武汉奥斯特医疗器械有限公司)；生化培养箱(上海医疗器械厂)。 1.2 样品 注射用头孢唑林钠(丽珠医药集团购份有限公司，规格0.5g/瓶) 1.3 培养基验证试验用菌种 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养肉汤、普通斜面、真菌斜面；营养琼脂、虎红琼脂。(灵敏度符合《中国药典》规定，北京三环科技开发有限公司)。 1.4 验证试验用菌种 ①金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)[CMCC(B)26003]；②枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ CMCC(B)6494]；③大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B)44102]；④铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]；⑤生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [ CMCC(B)64941]；⑥白色念珠菌( Candidaalbicans)[CMCC(B)98001]；⑦黑曲霉菌(Aspergil-lus niger) [CMCC(B)98003]。 2方法 按《中国药典》2005年版无菌检查的验证实验方法操作1. 2.1 菌液制备2 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中，生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中(32.5±2.5)℃培养18~24h；取经(32.5±2.5)℃培养19~21h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌肉汤培养物1ml，加9 ml 0.9%氯化钠溶液，10倍递增稀释至约10-5~10-之间。 取经36℃培养18~22h 的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基培养物1 ml，加9 ml 0.9%氯化钠溶液，10倍递增稀释至 10-6，混匀备用。 白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中(25.5±2.5)℃培养24~48h。 取经(25.5±2.5)℃培养72 h 的白色念珠菌真菌斜面培养物，加入4ml洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，取1ml加9 ml0.9%氯化钠溶液，10倍递增稀释至10-6，取1.2 ml0.9%氯化钠溶液9 ml，混匀备用。 将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，(25.5±2.5)℃培养5~7d，使大量的孢子成熟。取经25℃培养7d的黑曲霉真菌斜面培养物，加入0.9%氯化钠溶液4ml洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，稀释至10，取0.5 ml加0.9%氯化钠溶液 10 ml 混匀备用。 2.2 菌液计数 分别取上述5种细菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。注入营养琼脂约18 ml。30~35℃培养(生孢梭菌置厌氧培养箱中培养)。分别取上述2种真菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。注入虎红琼脂约18 ml。23~28℃培养。(菌液计数结果见表1和表2)。 2.3 供试液制备 每2支以100 ml 0.9%氯化钠溶液溶解，混匀备用。 2.4 薄膜过滤 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，每次50 ml，在最后一次的冲洗液中逐逐加入试验菌少于100CFU。按规定将培养基直接加至滤筒内。每天观察并记录结果。 2.4.1 阳性对照 另取滤筒，不过滤供试品，其它操作同上，作为阳性对照，将含培养基的容器按规定温度培养3~5d。各试验菌及相应的培养基逐一进行验证。取未加样品的滤器分别加硫乙醇酸盐流体培养基5桶及真菌培养基2桶，100ml/桶。 2.4.2 阴性对照 两个滤器桶内各过滤0.9%氯化钠溶液200 ml，然后分别加入硫乙醇酸盐培养基和真菌培养基各100ml，不加对照菌液，分别于30~35℃及23~28℃培养。 2.5 培养 硫乙醇酸盐流体培养基桶30~35℃培养；真菌培养基桶23~28℃培养。观察结果。 2.6 细菌和真菌数计数 结果分别见表1和表2。 表1 细菌及真菌数计数结果 菌种 计数 (CFU) 均值 (CFU) 菌种 计数(CFU) 均值(CFU) 大肠埃希菌 24 28 26 生孢梭菌 2020 20 金黄色葡萄 球菌 36 40 38 黑曲霉菌 8693 89 枯草芽孢杆 菌 62 66 64 白色念珠菌 86 83 85 铜绿假单胞 菌 58 54 56 2.7 实验结果 见表3和表4。 表320h观察细菌结果 冲洗量 菌 种 大肠 金黄色 枯草芽 铜绿假 生孢 埃希菌 葡萄球菌 孢杆菌 单胞菌 梭菌 800 ml -(72 h) + + + + 1 000 ml + + + + 阳性对照 + + + + + 阴性对照 - - 表436h观察真菌结果 冲洗量 菌 种 黑曲霉菌 白色念珠菌 200 ml + + 400 ml + 阳性对照 + + 阴性对照 - - 大肠埃希菌菌液制备：取经35℃培养19~20h的大肠埃 希菌肉汤培养物1ml，加9 ml0.9%氯化钠溶液，10倍递增稀释至10-5，取0.4ml加0.9%氯化钠溶液 10 ml 混匀，做活菌计数备用。 取12支样品，每2支以100 ml 0.9%氯化钠溶液溶解，冲洗100 ml每次，做冲洗量300，500 ml，800 ml三桶，各加入硫乙醇酸盐培养基100 ml。分别加入大肠杆菌菌液(肉汤培养物10倍稀释至10)1ml。结果见表5。 表5实验结果(大肠埃希菌菌数54CFU) 冲洗量 培养时间 14h 25h 38h 110h 300 ml - - - - 500 ml - - + + 800 ml - + + + 阳性对照 + + + + 4讨论 注射用头孢唑林钠无菌检查法：取样量3.0 g，用300 ml0.9%氯化钠溶液溶解后，采用薄膜过滤法全封闭滤器滤干；再用800 ml 0.9%氯化钠溶液分8次冲洗，然后依法检查，以大肠埃希菌为阳性对照菌3。将《中国药典》2005年版二部样品项下无菌检查方法进一步完善。 ( 参考文献 ) ( 1中国药典[S].2005年版.二部.151，附录89 ) ( 2 李 佳宁，张新妹.氟喹诺酮类药物的无菌检查方法验证[J].西北药学杂志， 2005，20(2)：74-75 ) ( 3 关 于执行《中国药典》2005年版微生物限度检查和无菌检查法有关问题的说 明[A].国药典发[2005]98号 ) ( (2006-04-24收稿) ) 正交法优选复方参贝止咳颗粒中盐酸麻黄碱提取工艺 陈永刚 吴金虎 张晓燕 曹玫 (郧阳医学院附属人民医院药学部 湖北十堰442000) 摘 要 目的：正交法优选复方参贝止咳颗粒中盐酸麻黄碱乙醇回流提取的最佳工艺，为制剂的生产提供依据。方法：采用正交设计L，(3*)进行试验， HPLC 测定盐酸麻黄碱的含量，以盐酸麻黄碱含量为检测指标，以乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为因素。结果：优选提取工艺是麻黄等药材饮片，加10倍量60%乙醇，回流提取3次，每次105 min。结论：该提取工艺经实验验证，具有重现性、可靠性。 关键词 复方参贝止咳颗粒；盐酸麻黄碱；正交实验 中图分类号：R944.2*7 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2006)10-0970-02 复方参贝止咳颗粒是在中医药理论指导下，经现代药学研究，在确保其原有功效的原则上，将散剂改变成颗粒剂的一种纯中药制剂，由太子参、麻黄、浙贝母等中药组成，具有益气养阴，宣肺化痰止咳之功效。本文主要研究其改变剂型时麻黄等药材乙醇提取的最佳工艺，以麻黄药材中盐酸麻黄碱的含量为检测指标，采用 HPLC 法测定其含量，优选出最佳提取工艺2.3]。 1 仪器与试药 德国 DIONEX 高效液相色谱仪(P680 泵，TCC-100柱温箱，UVD170U 紫外检测器，Chromeleon 液相色谱工作站)；德 国 Sartorius BP615 电子天平；低速离心机(北京医用离心机厂)；旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。 盐酸麻黄碱对照品(批号0714-9903中国药品生物制品检定所)；麻黄，浙贝母，槟榔等药材(购自湖北省中药材公司)。甲醇为色谱纯；双蒸水(新制)；磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯。 2方法与结果 2.1 正交试验设计4 以麻黄中盐酸麻黄碱为指标，选择乙醇浓度、提取时间、加醇量，提取次数为考察因素，各设3水平，其因素水平表见