兽药预混剂中盐霉素及其杂质含量检测方案(液相色谱仪)

重复性2 3 关键词：电喷雾检测器；预混剂；盐霉素；杂质 Key words： CAD； premix； salinomycin； impurity 引言 盐霉素作为一种常用兽药，目前其含量测定方法为杯碟法或柱后衍生方法，使用HPLC-CAD方法具有更高的检测灵敏度和准确性，操作更简便。而且电喷雾检测器很高的响应一致性可以用来测定其中一些未知的化合物的含量，从而使我们对整个药物的组成更加明确，增加用药的安全性。 测试条件 仪器： Dionex UltiMate 3000系列： HPG-3400RS泵， Dionex esa corona ultra CAD检测器， WPS-3000TRS自动进样器，TCC-3000RS柱温箱。 CAD： neb=30℃ gas pressure=35.0psi 柱温：30℃； 进样量： 10pL； 流动相：甲醇-0.1%冰醋酸(86：14)(0.7mL/min 样品前处理 标准品溶液配制： 称取盐霉素纯化样品10mg， 精密称定，至25mL容量瓶中，加入约20mL提取液，振摇使溶解，用流动相定容至刻度，摇匀即得。于2-8℃冰箱冷藏，有效期一个 样品溶液制备： 取12%盐霉素预混剂约0.6g，精密称定，准确移取25mL提取液(甲醇/水=90：10)，超声10分钟，过滤；准确移取滤液10mL至50mL容量瓶中，用提取液定容至亥度，摇匀。 结果和讨论 标准品色谱图 图1对照品(纯度87%)测定色谱图 精密度 精密度结果见表1。 表1精密度结果 Sample Name Ret.Time (min) Area (pA*min) Height (pA) Amount Plates (EP) standard-1 15.350 38.5318 88.33 3.5851 7465 standard-2 15.375 38.5421 88.36 3.5864 7507 standard-3 15.383 38.4674 88.68 3.5768 7551 standard-4 15.417 38.5578 88.30 3.5884 7500 standard-5 15.425 38.6187 88.14 3.5963 7461 standard-6 15.425 38.7321 88.44 3.6109 7502 Average 15.396 38.575 88.377 3.591 7498 Rel.Std.Dev 0.202% 0.236% 0.203% 0.326% 0.437% Sample name Ret.Time (min) Area (pA*min) Height (pA) Amount Plate (EP) sample-1 15.708 37.6620 85.36 3.4739 7676 sample-2 15.692 37.4255 85.13 3.4439 7654 sample-3 15.708 37.6558 85.17 3.4731 7658 sample-4 15.717 37.5381 85.42 3.4582 7696 sample-5 15.700 37.5833 85.24 3.4639 7680 Average： 15.707 37.595 85.310 3.465 7680 Rel.Std.Dev： 0.062% 0.273% 0.183% 0.376% 0.300% 由于CAD为质量型检测器，它与蒸发光检测器相同，理论上峰面积与含量应为非直线型线性关系，即应为二次或多次曲线方程关系，所以测定结果由工作站直接给出。其具体方程计算如下，分别对峰面积A和含量取自然对数， 由Excel给出具体方程。 InA=0.713InM+2.709 R=0.999动态范围为1.212pg~8.08pg。 加样回收率 取已知含量的12%盐霉素预混剂1103068批约0.25g，3份，精密称定，分别按照标示量的80%，100%，120%加入对照品0.0189g， 0.0258g， 0.031g。按供试品溶液的方法制备样品溶液，测定回收率。加样回收率测定结果见表3。 图2样品测定色谱图 耐用性 盐霉素及其杂质分离 分别调整柱温为27℃、30℃和32℃，分别进样，记录色谱图。结果显示盐霉素出峰时间和峰形均差别不大，分析结果RSD值均<3%。耐用性分析结果见表4。 盐霉素及其杂质分离结果见表5。 盐霉素三批含量计算，结果见表6。 表3加样回收率测定结果 样品名 称样量 0.25g中含量 测得量 添加盐霉素量 回收率 平均回收率 (g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) 80% 0.246 20.934 36.787 16.443 96.41 98.60 100% 0.253 21.513 44.547 22.446 102.62 120% 0.241 20.559 46.654 26.97 96.76 表4耐用性分析结果 Sample No. Ret.Time(min) Area (pA*min) Height((pA) Amount Plates (EP) 36 15.675 42.2144 93.92 3.9624 7356 50 15.683 41.8327 91.72 3.8936 7081 68 15.067 41.0239 95.93 3.7478 7475 Rel.Std.Dev： 2.285% 1.458% 2.243% 2.832% 2.767% No. Peakname Ret.Time ((min) Area (pA*min) Height 1(pA) Rel.Area((%) Resolution 1 n.a. 8.575 0.2228 1.082 0.39 2.57 2 n.a. 9.967 0.4672 1.078 0.82 n.a. 3 n.a. 11.300 0.3432 1.079 0.60 n.a. 4 n.a. 11.892 1.5522 3.510 2.73 4.20 5 n.a. 12.717 0.2249 0.464 0.40 n.a. 6 n.a. 14.025 0.2963 0.762 0.52 n.a. 7 n.a. 14.508 2.4581 4.877 4.32 1.81 8 盐霉素 15.717 37.5381 85.416 66.01 3.24 9 n.a. 17.792 0.6819 2.009 1.20 0.95 10 n.a. 18.600 4.7742 7.166 8.40 3.73 11 n.a. 21.975 1.8301 4.210 3.22 1.43 12 n.a. 23.075 1.8234 3.185 3.21 1.47 13 n.a. 24.400 0.9939 1.615 1.75 1.59 14 n.a. 25.800 0.3334 0.663 0.59 2.30 15 n.a. 27.658 0.7615 1.525 1.34 2.20 16 n.a. 29.533 2.5646 4.485 4.51 n.a. Total： 56.8659 123.128 100.00 表6三批盐霉素含量 三批含量 称样量 (g) 测得量(mg) 含量% 1103067 0.6216 65.275 9.14 1103068 0.6061 59.329 8.52 1103069 0.6266 60.995 8.47 杂质含量计算 计算方法：根据CAD检测器对相同质量物质信号响应一致的特点，采用面积归一化法，用盐霉素标准曲线的对数方程式进行计算，即InA=0.713InM +2.709，计算结果见表7。 表7杂质含量计算结果 杂质 Peakname Ret.Time ((min) Area (pA*min) m (mg) 含量(%) n.a. 8.558 0.226 0.003 0.007 2 n.a. 9.933 0.454 0.007 0.020 3 n.a. 11.292 0.348 0.005 0.013 4 n.a. 11.867 1.548 0.041 0.109 5 n.a. 12.742 0.212 0.003 0.007 6 n.a. 14 0.274 0.004 0.010 7 n.a. 14.467 2.534 0.082 0.218 8 盐霉素 15.7 37.583 3.622 9.585 9 n.a. 17.75 0.690 0.013 0.035 10 n.a. 18.6 4.771 0.200 0.530 11 n.a. 21.958 1.759 0.049 0.131 12 n.a. 23.05 1.525 0.040 0.107 13 n.a. 24.392 0.729 0.014 0.038 14 n.a. 25.783 0.321 0.005 0.012 15 n.a. 27.667 0.761 0.015 0.040 16 n.a. 29.525 2.565 0.084 0.222 盐霉素在CAD检测器上有较好的响应，进样精密度、重复性、加样回收率都较好。方法准确简便，可用于主成分和杂质的含量测定。 根据CAD检测器原理，各种物质在CAD上的响应因子相似，在杂质标准品不能获得的情况下，通过面积归一化法，更能反映各杂质成分和主成分的真实含量。 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your l ocal s ales r epresentative for d e tails. ) 北京 免费服务热线： 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4 006505118 电话：021-68654588 邮编：100007 传真：021-64457830 电话：010-84193588 传真：010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.上海     盐霉素作为一种常用兽药，目前其含量测定方法为杯碟法或柱后衍生方法，使用HPLC-CAD方法具有更高的检测灵敏度和准确性，操作更简便。而且电喷雾检测器很高的响应一致性可以用来测定其中一些未知的化合物的含量，从而使我们对整个药物的组成更加明确，增加用药的安全性。