饲料、氨基酸注射液中天然氨基酸检测方案(液相色谱柱)

色谱条件： 文章出处： 关键字： 摘要： 图谱： 氨基酸注射液、动植物性食品和饲料 Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、lle(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种天然氨基酸 Diamonsil AAA 5um 250x4.6mm 溶液配制 氨基酸储备液：称取一定里氨基酸标准品：用0.1 mol/L HCI水溶液溶解：胱氨酸为0.01 mol/L， 酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸为0.05 mol/L 氨基酸使用液：将储备液用0.1mol/L HCI水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/L的氨基酸单标和混标 内标液：以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸， 溶于0.1 mol/L HCI水溶液： 得到0.02mol/L的正亮氨酸内标液异硫氰酸苯苯溶液：将250pL异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至10mL， 得到0.2mol/L异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液：将1.4mL三乙胺用乙腈定容至10mL，得到1.0mol/L三乙胺溶液 衍生化 样品溶液衍生化 量取200 pL样品溶液蛋白质水解液或游离氨基酸溶液)[1]，置于1.5mL塑料离心管中，加入20 pL 正亮氨酸内标溶液[2]，混匀，再加入100pL 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 pL 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液：混室：室温反应1小时，然后加入400pL正己烷，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s， 静置分层，取200pL下层溶液与800 pL水混合[3]， 0.22 pm 针式过滤器过滤： 待分析。 标准溶液衍生化 量取200 pL氨基酸混合标准溶液(每种组分浓度均为0.002 mol/L)，置于1.5mL塑料离心管中，准确加入20pL正亮氨酸内标溶液[2]、100 pL1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 pL 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液：混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400pL，旋紧盖子后剧烈振荡5~10s， 静置分层： 取200pL下层溶液与800pL水混合[3]，0.22pm针式过滤器过滤，待分析。 注： [1]通过控制原始样品质量或稀释等方法：使样品溶液中的氨基酸总量不超过0.04 mol/L或3.0 g/L(两者中取最小值) [2]只有采用内标法分析时，才需要加入正亮氨酸作为内标物 [3]衍生得到的样品溶液中含有50%的乙腈，这与流动相溶剂体系存在较大差距，因而需要加水稀释，否则会引起峰前沿或分叉 分析条件 仪器：二元高压HPLC系统 色谱柱： Diamonsil AAA 250×4.6 mm， 5 pm (Cat.#： 99751) 流动相A：0.05 mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节pH值为6.50±0.05) 流动相B：甲醇：乙腈：水=20：60：20(V：V：V) 流速：1.0mL/min 检测波长： UV 254 nm 柱温：45℃ 进样体积： 10 pL 梯度程序 时间/min 0 39 40 45 46 60 流动相A/% 95 52 0 0 95 95 流动相B/% 5 48 100 100 5 6 迪马科技应用实验室 氨基酸注射液，动植物性食品，饲料 该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、lle(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种天然氨基酸的检测。 20 18种天然氨基酸、正亮氨酸以及NH3(氨)-异硫氰酸苯酯衍生物的液相色谱图1Asp(天冬氨酸)2Glu(谷氨酸)3 Ser(丝氨酸)4 Gly(甘氨酸)5His(组氨酸)6Arg(精氨酸)7Thr(苏氨酸)8Ala(丙氨酸)9Pro(甫氨酸) 10 NH3(氨) 11Tyr(酪氨酸) 12 Val(缬氨酸) 13 Met(蛋氨酸) 14Cys(胱氨酸)15lle(异亮氨酸)16Leu(亮氨酸)17 Nle(正亮氨酸) 18 Phe(苯丙氨酸)19 Trp(色氨酸)20 Lys(赖氨酸) 仪器: 二元高压HPLC系统 色谱柱: Diamonsil AAA 250 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99751） 流动相A: 0.05 mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节pH值为6.50 ± 0.05)流动相B: 甲醇 : 乙腈 : 水=20 : 60 : 20(V : V : V)流速: 1.0 mL/min检测波长: UV 254 nm柱温: 45 ℃进样体积: 10 μL