乳制品中啶酰菌胺检测方案(气质联用仪)

thermoscientific应用指南 仪器 Online GPC-GCMS 法测定乳制品中的啶酰菌胺 苏利进 练慧勇 余种天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：Online GPC-GCMS；乳制品；啶酰菌胺 目标 采用赛默飞新一代 UltiMateTM 3000 液相色谱仪和 Trace GC1310-ISQ气相色谱质谱联用仪组成的 Online GPC-GCMS系统，建立一种简单，快捷，可操作性强，适合大批量样品检测的乳制品中啶酰菌胺含量的测定方法。 引言 啶酰菌胺是由德国巴斯夫公司开发的新型烟酰胺类杀菌剂，主要用于防治白粉病、灰霉病、各种腐烂病、褐腐病和根腐病等，已于2004年在英国、德国和瑞士登记。啶酰菌胺属于线粒体呼吸链中琥珀酸辅酶Q还原酶抑制剂，对孢子的萌发有很强的抑制能力，且与其它杀菌剂无交互抗性，适用范围很广。据欧盟专家委员会2000年2月24日报导，长期摄入啶酰菌胺可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾等。GBT 22979-2008《牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定气相色谱-质谱法》规定牛奶和奶粉中的方法检出限分别为 0.01mg/kg 和 0.08mg/kg"。 GBT 22979-2008标准在样品前处理时需先用乙腈提取，再通过正己烷-乙酸乙酯混合溶剂置换复溶，再通过离线 GPC柱净化，浓缩、定容后上机分析。样品前处理步骤繁琐。本 文参考此标准用乙腈提取后用混合溶液置换定容，通过在线GPC 的净化作用，直接上样 GCMS 分析。本文采用 Online-GPC 净化技术，极大简化了前处理步骤，建立了一种高通量的乳制品中啶酰菌胺的检测方法。该方法操作简单，快捷，适合大批量样品检测。 Thermo ScientificTM online-GPC-GCMS联用系统， 包括 -TRACE 1310气相色谱，配PTV进样口 -ISQLT单四极杆质谱 -UltiMateM 3000液相色谱仪 Thermo Scientific M TraceFinder3.2数据处理系统 试剂、标准品及材料 啶酰菌胺标准品；购自美国 sigma； 乙腈 (CH3CN)、乙酸乙酯、丙酮、环己烷、HPLC 级( FisherScientific)。 标准溶液的制备 工作曲线溶液：取适量啶酰菌胺标准品溶液于50mL 容量瓶中，环己烷-丙酮(7：3)混合溶液作为稀释溶剂，配置成浓度为：0.01、0.05、0.1、0.25、0.5mg/L的标准溶液，摇匀，待分析。 样品的溶解：取10g牛奶和式样(若是奶粉，称取2g奶粉，用8g水溶解)于100mL离心管中， 加入50mL乙腈，用匀质器搅匀，以 3000r/min 离心5min， 取上层清液于分液漏斗中，残渣复溶重复，合并上层清液。加入3g氯化钠，震荡静置后分离水层，将乙腈层导入鸡心瓶，在低于40℃的条件下旋转蒸发至干，残留物加入3mL丙酮-环己烷溶液溶解超声提取1min， 提取液转入10mL容量瓶中，重复 结果与讨论 1、标准溶液色谱质谱图及定性定量信息 三次，合并提取液，用环己烷-丙酮溶液定容至刻度，摇匀待用，上机分析前过0.45有机滤膜。 GPC条件： GPC柱： Shodex EV-200(16pm， 2.0mm×150mm) 溶剂：丙酮：环己烷=3：7 柱温：40℃ 流速：0.1mL/min 进样量： 10pL 阀切换时间：3.3min-5.3min GC 条件 预柱： GuardGOLD(5mx0.53mm， P/N： 26050-0553)捕集柱： TG-5MS(5mx0.25mmx0.25um)分析柱：TG-5MSSil ( 30mx0.25mmx0.25um， P/N：26096-1420) PTV 恒流模式，流速 1.5mL/min PTV 进样口升温程序：：120℃(8min)-14.5℃/s-320℃( 30min) PTV进样模式：不分流进样，不分流时间为 10min柱温程序：80℃(10min)-10℃ /min-300℃ (7min) MS 条件 离子源温度：300℃传输线温度：280℃，离子化方式：El， 70 eV扫描方法：全扫描模式扫描，扫描范围： m/z 86-450， SIM 扫描：342、344、140、142 表1啶酰菌胺定性定量信息 No. 保留时间 中英文名称 CAS 定量离子 定性离子 定性离子 32.69 啶酰菌胺 188425-85-6 140 342 344 线性 检出限 根据0.01mg/L标准溶液数据，计算方法检出限(3倍噪声计算)。组分检出限见表2，谱图见图3。 表2检出限 No. 名称 检出限(mg/L) 1 啶酰菌胺 0.006 重复性测试 0.25mg/L 啶酰菌胺标准溶液重复进样6针，结果见表3，结果表明重现性良好，重复性谱图见4。 图2啶酒菌胺标样的线性信息 表3面积重现性测试 No. 化合物名称 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 RSD(%) 啶酰菌胺 3938722 3709002 3765305 3585671 3682047 3544846 3.8 RT：27.38-36.62 图3 0.01mg/L 标样的 SIM 图 图4连续6针0.25mg/L 标样叠加 SIM 图 回收率测试 将啶酰菌胺标准溶液添加到牛奶样品中，按照样品前处理方法制备，每种样品配制2组加标液，加标样品最终浓度分别 为 0.1mg/L 和 0.25mg/L。每个浓度加标样品分别平行制样3次。回收率结果见表4，实际样品和加标样品 SIM 图如图5、6。 No. 样品名称 加标1平均回收率% RSD% 加标2平均回收率% RSD% 0.1mg/L (n=3) 0.25mg/L (n=3) 1 牛奶 91 5.5 87.6 3.3 2 奶粉 112 6.8 115 6.5 e (min) 图5实际样品的谱图 图6加标0.01mg/L样品谱图 学俱乐部 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 www.thermofisher.com 全国服务热线：800 810 5118 SCIENTIFIC