红酒中柠檬酸检测方案(专用色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 采用高效液相色谱法测定红酒中的柠檬酸应用简讯 食品检测与农业 前言 ( 作者 ) 1安捷伦科技(中国)有限公司 柠檬酸的含量对食品的味道有很大影响，并且是某些食品品质的一项重要检测指标。柠檬酸在食品，酒以及饮料中主要是作为酸度调节剂使用。葡萄酒的酿造过程中，酸可以帮助 SO2来防止葡萄酒变质，而且也起到抑菌作用，醋酸和乳酸菌例外，红葡萄酒中，酸可以维持和稳定葡萄酒的颜色， PH 值低的红葡萄酒颜色更深，而且更加稳定。为了让葡萄酒的酸度提高，酿造师也会在葡萄酒中添加酸，称为加酸过程，酒石酸是最常用来添加的一种，而有时候也会使用柠檬酸和苹果酸。有人认为柠檬酸是安全无毒的，其实不然，经过多次实验证明， 2.15g/kg 的柠檬酸对小鼠的体重有明显影响，毒理实验受试小鼠采取柠檬酸灌胃30天，证实了柠檬酸对肝脏有影响，而且不同厂家生产的柠檬酸毒性不同，有的属于低毒，有的属于无毒。GB 15037-2006规定干、半干和半甜葡萄酒中柠檬酸的含量≤1g/L，甜葡萄酒中柠檬酸的含量≤2g/L。 本文所述方法参照国标 GB/T 15038-2006 和进出口行业标准 SN/T 2007-2007方法，建立了一种分析红酒中柠檬酸的高效液相分析方法。该方法使用 Agilent薄壳型 Poroshell 120快速分析色谱柱， 可以长时间耐受100%水相流动相，并且在普通仪器上即可实现快速高效的分离，整个运行仅需 6min， 系统压力在150bar 以下。 柠檬酸分析 对样品进行前处理：取1g红酒样品，用水涡旋稀释，定容到10mL， 取适量样品，过安捷伦 0.2um RC 膜，使用配备了 Agilent Poroshell 120 快速分析色谱柱的高效液相色谱系统对其进行分析。表1所示为液相色谱分析条件。 表1液相色谱分析条件 ( 色谱柱： Poroshell 1 2 0 SB-AQ 4.6x100mm，2.7um， P / N.685975-914 ) 流速：1mL/min 柱温：40C° 进样体积：10uL 流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾水溶液 检测器： Agilent 1260 HPLC-DAD 检测器， 检测波长210nm 运行时间：6min 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 如图1、3所示，本文所述方法适合分析红酒中的柠檬酸，使用 Agilent Poroshell120快速分析色谱柱，单次运行6min 即可完成样品分析， 0.1mg/L浓度标准品连续六次进样色谱峰面积 RSD<0.6%证明系统具有很好的稳定性，见图2。柠檬酸在0.05-1mg/L 浓度范围内具有良好的线性，见图4. 图3红酒样品分析分析谱图 红酒样品(上)，1mg/mL柠檬酸标样(中)，10mg/mL 红酒加标样品(下) 图1三个个度点 (0.5，0.1，1.0mg/mL)柠檬酸标准品色谱图(上)和光谱图(下) 图4柠檬酸标准溶液校正曲线 图20.1mg/mL柠檬酸标样进样重复性(RSD%=0.55) 次数 1 2 3 4 5 6 面积 55.3 55.6 55.8 55.2 56.0 55.4 图50.5mg/mL红酒样品分斤普图 红酒样品(红色)、0.05mg/mL柠檬酸标样(绿色色)、0.5mg/mL红加加标样品(蓝色)重叠色谱图 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 图6.1mg/mL 添加浓度分析色谱图 红酒样品(红色)、0.1mg/mL柠檬酸标样(绿色色)、1mg/mL红酒加标样品(蓝色)重叠色谱图 本文所采用 Poroshell 120 SB-AQ柱，薄壳型为极性修饰反相固定相，可长时间耐受100%水相流动相，由图3，5，6可以看出，色谱图中柠檬酸出峰位置无杂质峰干扰，有效实现了红酒样品经稀释萃取、简单过膜处理后的基质干扰和目标分析物的良好分离。并且具有快速分离分析的效果。在10mg/mL， 1.0mg/mL， 0.5mg/mL三个不同浓度添加水平下，柠檬酸的平均添加回收率在88%以上。 添加浓度 0.5mg/L 1.0mg/L 10.0mg/L 回收率 88.9% 89.0% 91.2% 附二：流动相梯度表 时间 流动相 A%* 流动相B%** 0 100 0 3 100 0 3.5 20 80 6 20 80 6.5 100 0 10 100 0 附图1 1.mg/mL 添加水平和红酒空白对照谱图 蓝色：红酒空白 红色：红酒中添加1mg/mL柠檬酸 订货信息 液相色谱柱： Poroshell 120 SB-AQ 4.6x100mm， 2.7um， P/N.685975-914 Agilent Technologies *MKHPO.， pH.**甲醇  色谱柱：Poroshell 120 SB-AQ 4.6×100mm, 2.7μ，P/N. 685975-914 流速：1mL/min 柱温：40℃ 进样体积：10ul流动相：0.02mol/L 的磷酸二氢钾水溶液 检测器：Agilent 1260 HPLC –DAD 检测器， 检测波长:210nm 运行时间：6min 时间 流动相B%**0  03  03.5  806  806.5  010  0* 20mMKH2PO4，pH 2.4**甲醇