药材中阿胶、鹿角胶、龟甲胶的鉴别检测方案(液质联用仪)

陈冰张歆媛江峥 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 引言 阿胶、鹿角胶、龟甲胶均系常用的滋补药，在复方及中成药配伍方面占有极重要的位置，由于货源紧缺以致药材基源混杂和掺假现象时有发生。目前，针对这三种胶类真伪鉴别的方法有多种，但其认定的最高标准则是《中国药典》关于此类胶的规定。本实验严格参照《中国药典》2015年版中药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶的鉴别方法，应用三重四极杆质谱系统TSQ Endura 开发了药材阿胶、龟甲胶及鹿角胶的检测方法。 实验方法 参考《中国药典》2015年版中药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶鉴别所采用的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS) 检测方法 样品前处理 取药材粉末0.1g，使用1%的碳酸氢铵溶液超声提取，向续滤液中加入过量的胰蛋白酶，恒温酶解。详细过程及操作要点如下所示： 取对照药材0.1g， 同法制成对照药材溶液；实验所需的对照药材均购自中国食品药品检定研究院。 鉴别原理 使用液相色谱串联质谱仪(LC-MS/MS)检测酶解液中指定的特征选择反应监测离子对，色谱峰信噪比均应大于3：1，并同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。 仪器条件 串联质谱联用系统： Thermo ScientificTM TSQ EnduraTM三重四极杆质谱仪 高效液相系统： UltiMateTM 3000 Rapid Separation LC Systems 快速分离液相系统 质谱条件 HESI-II离子源 正模式检测 Sheath Gas Flow Rate 45 units Aux Gas Flow Rate 15 units Spray Voltage 3500V Capillary Temp 300℃ HeaterTemp 100℃ Collision gas pressure (Ar) 1.5 mTorr *Tube lens 采取系统调谐值即可。 选择反应监测离子对条件 eV) (m/z) 539.8 (m/z) 龟甲胶 631.3 546.4 923.8 20 921.4 25 554.0 20 733.0 20 1.对照药材阿胶、龟甲胶和鹿角胶的典型色谱图 RT：8.26 RT： 10.74AA： 26096489 RT： 14.37 AA： 929313 SN：88552712 SN： 25639586 100- 100-c一 80- 选择反应监测 60- 40- 20- 0 离子对2：631.3+546.4RT： 10.73AA： 392958SN： 1110503 100- 80- 选择反应监测离子对1：765.4554RT： 14.37AA： 201587SN：967807选择反应监测离子对2：765.4→7330-0 10 20 Time (min) Fig.1阿胶对照药材典型色谱图 Fig.2龟甲胶对照药材典型色谱图 Fig.3鹿角胶对照药材典型色谱图 2.药材阿胶、阿胶珠与阿胶对照药材的典型色谱图比较 RT：8.21 Fig.4药材阿胶、阿胶珠与阿胶对照药材的典型色谱图比较 由上图 Fig.4可以看到，药材阿胶和药材阿胶珠的色谱峰信噪比均大于3：1，并且同时呈现与阿胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。按照药典(2015年版)可初步鉴定这两种药材均为真品。 3.疑似假药材龟甲胶和鹿角胶与对照药材的典型色谱图比较 Fig.5疑似假药材龟甲胶与龟甲胶对照药材的典型色谱图比较 Fig.6疑似假药材鹿角胶与鹿角胶对照药材的典型色谱图比较 观察上图可看到 Fig.5中疑似假药材龟甲胶的色谱图中，不存在与龟甲胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰；同样， Fig.6中疑似假药材鹿角胶的色谱图中也并不存在与鹿角胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。 《中国药典》2015年版 实际 是否满足 对于中药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶鉴别方法的要求 检测情况 并优于? 1.采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI) 质谱检测器， ESI+检测， 进行选择反应监测离子对检测； 选择反应监测离子对检测； 满足 2.对照药材溶液，进样量5uL， 药典指定检测离子对测定的 进样量5pL，药典指定检测离子对 满足 测定的选择反应监测离子对的色谱 选择反应监测离子对的色谱峰的信噪比均应大于3：1； 并优于 峰的信噪比均大于900000：1； 3.供试品溶液 5uL，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测 进样量5pL， 以药典指定监测离子对 定；以药典指定监测离子对提取的供试品离子流色谱中， 提取的供试品离子流色谱中，呈现与 满足 应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。 对照药材色谱保留时间一致的色谱峰 综上所述， 由 Thermo ScientificTM TSQ EnduraTM三重四极杆质谱仪和 UltiMateTM 3000 Rapid Separation LC Systems 快速分离液相系统构成的高效液相色谱-质谱联用仪系统完全可以满足《中国药典》2015年版对于中药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶鉴别方法的要求。 Orbitrap组学俱乐部 赛默飞小分子质谱应用技术群 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 www.thermofisher.com 全国服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) AN_C_LCMSMS_16_201511Y SCIENTIFIC