新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐与硝酸盐检测方案(气相色谱仪)

离子色谱法测定食品中亚硝酸盐与硝酸盐 原理 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。 二、试剂和材料 （1）超纯水：电阻率＞18.2MΩ·cm。 (2）乙酸（CH3COOH)：分析纯。 (3）氢氧化钾（KOH)：分析纯。 (4）乙酸溶液（3％）：量取乙酸（2.2)3mL于100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。 (5)亚硝酸根离子（NO-2）标准溶液（100mg/L，水基体）。 (6)硝酸根离子（NO-3）标准溶液（1000mg/L，水基体）。 (7)亚硝酸盐（以NO-2计，下同）和硝酸盐（以NO-3计，下同）混合标准使用液：准确移取亚硝酸根离子（NO-2）和硝酸根离子（N-3)的标准溶液各l.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液每1L含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸根离子10.0mg。三、仪器和设备 (1)离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱，50μL定量环。 (2）食物粉碎机。 (3）超声波清洗器。 (4）天平：感量为0.1mg和1mg。 (5)离心机：转速≥10000转／分钟，配5mL或10mL离心管。 (6)0.22μm水性滤膜针头滤器。 (7）净化柱：包括C18柱、Ag柱和Na柱或等效柱。 (8）注射器：1.0mL和2.5mL。 注：所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氢氧化钾和水分别浸泡4h，然后用水冲洗3一5次，晾干备用。 四、分析步骤 4.1试样预处理 (1)新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。 (2）肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。 (3）乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品（不包括干酪）：将试样装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。 (4）发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。 (5）干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。 4.2提取(1)水果、蔬菜、鱼类、肉类、蛋类及其制品等：称取试样匀浆5g（精确至0.01g，可适当调整试样的取样量，以下相同），以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转／分钟离心15min，上清液备用。 (2）腌鱼类、腌肉类及其他腌制品：称取试样匀浆2g（精确至0.01g)，以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转／分钟离心15min，上清液备用。 (3）乳：称取试样10g（精确至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL,摇匀，超声30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用。 (4）乳粉：称取试样2.5g（精确至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用。 (5）取上述备用的上清液约15mL，通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面3mL(如果氯离子大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL)，收集后面洗脱液待测。固相萃取柱使用前需进行活化，如使用OnGuardⅡRP柱（1.0mL)、OnGuard11Ag柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)[给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。]，其活化过程为：OnGuardⅡRP柱（1.0mL）使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min.OnGuardⅡAg柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)用10mL水通过，静置活化30min。 4.3参考色谱条件 (1)色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如DionexlonPacASll一HC4mm×250mm（带lonPacAGll一HC型保护柱4mm×50mm)〔给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。〕，或性能相当的离子色谱柱。 (2）淋洗液： ①一般试样：氢氧化钾溶液，浓度为6一70mmol/L;洗脱梯度为6mmol/L30min,70mmol/L5min,6mmol/L5min；流速1.0mL/min。 ②粉状婴幼儿配方食品：氢氧化钾溶液，浓度为5一50mmol/L;洗脱梯度为5mmol/L33min,50mmol/L5min,5mmol/L5min；流速1.3mL/min。 (3）抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置。 (4）检测器：电导检测器，检测池温度为35℃。 (5)进样体积：50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整）。 4.4测定 4.4.1标准曲线 移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为0.00mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L；硝酸根离子浓度为0.0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的混合标准溶液，从低到高浓度依次进样。得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度（mg/L)为横坐标，以峰高（μS)或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归方程。 4.4.2样品测定 分别吸取空白和试样溶液50μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高（μS)或峰面积。 分析结果的表述 试样中亚硝酸盐（以NO-2计）或硝酸盐（以NO-3计）含量按式（1一1)计算： X＝[(c-c0)×V×f×1000]/m×1000．．．．．．．．．．．．．．．(1一1) 式中：X—试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量，mg/kg; c—测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度，mg/L; c0—试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度，mg/L; V—试样溶液体积，mL; f—试样溶液稀释倍数； m—试样取样量，g。 说明：试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量；试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。 六、精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。 离子色谱法测定食品中亚硝酸盐与硝酸盐一、原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。二、试剂和材料（1）超纯水：电阻率＞18.2MΩ·cm。(2）乙酸（CH3COOH)：分析纯。(3）氢氧化钾（KOH)：分析纯。(4）乙酸溶液（3％）：量取乙酸（2.2)3mL于100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。(5)亚硝酸根离子（NO-2）标准溶液（100mg/L，水基体）。(6)硝酸根离子（NO-3）标准溶液（1000mg/L，水基体）。(7)亚硝酸盐（以NO-2计，下同）和硝酸盐（以NO-3计，下同）混合标准使用液：准确移取亚硝酸根离子（NO-2）和硝酸根离子（N-3)的标准溶液各l.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液每1L含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸根离子10.0mg。三、仪器和设备(1)离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱，50μL定量环。(2）食物粉碎机。(3）超声波清洗器。(4）天平：感量为0.1mg和1mg。(5)离心机：转速≥10000转／分钟，配5mL或10mL离心管。(6)0.22μm水性滤膜针头滤器。(7）净化柱：包括C18柱、Ag柱和Na柱或等效柱。(8）注射器：1.0mL和2.5mL。注：所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氢氧化钾和水分别浸泡4h，然后用水冲洗3一5次，晾干备用。四、分析步骤4.1试样预处理(1)新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。(2）肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。(3）乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品（不包括干酪）：将试样装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。(4）发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。(5）干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。4.2提取(1)水果、蔬菜、鱼类、肉类、蛋类及其制品等：称取试样匀浆5g（精确至0.01g，可适当调整试样的取样量，以下相同），以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转／分钟离心15min，上清液备用。(2）腌鱼类、腌肉类及其他腌制品：称取试样匀浆2g（精确至0.01g)，以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转／分钟离心15min，上清液备用。(3）乳：称取试样10g（精确至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL,摇匀，超声30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用。(4）乳粉：称取试样2.5g（精确至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用。(5）取上述备用的上清液约15mL，通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面3mL(如果氯离子大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL)，收集后面洗脱液待测。固相萃取柱使用前需进行活化，如使用OnGuardⅡRP柱（1.0mL)、OnGuard11Ag柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)[给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。]，其活化过程为：OnGuardⅡRP柱（1.0mL）使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min.OnGuardⅡAg柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)用10mL水通过，静置活化30min。4.3参考色谱条件(1)色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如DionexlonPacASll一HC4mm×250mm（带lonPacAGll一HC型保护柱4mm×50mm)〔给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。〕，或性能相当的离子色谱柱。(2）淋洗液：①一般试样：氢氧化钾溶液，浓度为6一70mmol/L;洗脱梯度为6mmol/L30min,70mmol/L5min,6mmol/L5min；流速1.0mL/min。②粉状婴幼儿配方食品：氢氧化钾溶液，浓度为5一50mmol/L;洗脱梯度为5mmol/L33min,50mmol/L5min,5mmol/L5min；流速1.3mL/min。(3）抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置。(4）检测器：电导检测器，检测池温度为35℃。(5)进样体积：50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整）。4.4测定4.4.1标准曲线移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为0.00mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L；硝酸根离子浓度为0.0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的混合标准溶液，从低到高浓度依次进样。得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度（mg/L)为横坐标，以峰高（μS)或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归方程。4.4.2样品测定分别吸取空白和试样溶液50μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高（μS)或峰面积。分析结果的表述试样中亚硝酸盐（以NO-2计）或硝酸盐（以NO-3计）含量按式（1一1)计算：X＝[(c-c0)×V×f×1000]/m×1000．．．．．．．．．．．．．．．(1一1)式中：X—试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量，mg/kg;c—测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度，mg/L;c0—试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度，mg/L;V—试样溶液体积，mL;f—试样溶液稀释倍数；m—试样取样量，g。说明：试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量；试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。六、精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。