植物组织中可溶性糖与淀粉检测方案(原子吸收光谱)

   植物组织中可溶性糖与淀粉的测定   一、蒽酮法测定可溶性糖   【仪器与用具】    分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。   【试剂】       1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。   2．浓硫酸（比重1.84）。   【方法】      1．标准曲线的制作     取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。1 各试管加溶液水的量管号 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。   按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。   2．可溶性糖的提取  取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。   3．显色测定    吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。   4．计算可溶性糖的含量   可溶性糖含量(mg/g)=310WnaV式中C－标准方程求得糖量(μg)；a－吸取样品液体积(ml)；V－提取液量(ml)；n －稀释倍数W－组织重量（g）。   四、淀粉含量的测定   【仪器与用具】   电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2 漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。   【试剂】           （1）浓硫酸（比重1.84）；   （2）9.2mol/L HClO4；   （3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；  （4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml ，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。   【方法】           1．标准曲线制作取小试管11支从0～10编号，按表2加入溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线   2．样品提取  将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸 15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。   3．测定    可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。  按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量（%）=100106WaVC式中C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）； V－提取液总量（ml）；a－显色时取液量（ml）；   W－样品重（g）。   注：淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止. 得利特北京科技有限公司 网址：www.delitezg.com   植物组织中可溶性糖与淀粉的测定 一、蒽酮法测定可溶性糖 【仪器与用具】  分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。 【试剂】   1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 2．浓硫酸（比重1.84）。 【方法】   1．标准曲线的制作  取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。1 各试管加溶液水的量管号 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 3．显色测定  吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。 4．计算可溶性糖的含量 可溶性糖含量(mg/g)=310WnaV式中C－标准方程求得糖量(μg)；a－吸取样品液体积(ml)；V－提取液量(ml)；n －稀释倍数W－组织重量（g）。 四、淀粉含量的测定 【仪器与用具】 电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2 漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。 【试剂】     （1）浓硫酸（比重1.84）； （2）9.2mol/L HClO4； （3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）； （4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。 【方法】     1．标准曲线制作取小试管11支从0～10编号，按表2加入溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线 2．样品提取 将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。 3．测定  可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。 按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量（%）=100106WaVC式中C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）； V－提取液总量（ml）；a－显色时取液量（ml）； W－样品重（g）。 注：淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止.                                                                                           得利特北京科技有限公司                                                       网址：www.delitezg.com