溶菌酶中分子量的静态光散射检测方案(激光粒度仪)

Litesizer 500测试溶菌酶分子量 关键词：静态光散射、分子量、溶菌酶 1.介绍 溶菌酶，也被称为胞壁质酶，是一种被发现于人耳朵、唾液、乳液和大多数白细胞的酶。它的功能是通过催化水解作用破坏细胞壁来杀死细菌[1][2]。1922年被Alexander Fleming发现，溶菌酶成为公认的第一种抗生素。 静态光散射（SLS）是一种测试散射光时间平均强度的光学技术。它是确定分子量的一种典型方法，尤其对于大分子例如高分子和蛋白质。而且，SLS也能够被用来确定反映颗粒和溶液相互作用的第二维里系数。一个正数斜率表明颗粒溶液间的相互作用强于颗粒颗粒间的相互作用，反之亦然[3][4]。 SLS确定分子量需要三个或者更多不同的浓度。而且，样品的溶剂和参考物质必须新鲜制备和测试。样品溶剂必须包含样品中除了待测颗粒外的所有溶质（例如缓冲液或者盐）。 在这篇应用报告中，溶菌酶分子量通过Litesizer 500用SLS进行测试。 2.实验 溶菌酶样品用磷酸盐缓冲液（PBS，10 mM）制备成四种不同的浓度（18、14、10和6 mg/mL）。PBS是溶剂，甲苯是参考物质。所有的样品在使用之前过滤。测试用石英样品池在25 ℃温度下进行。每个测试的运行次数由仪器自动确定。整个实验（即四种不同浓度测试）被重复三次。 3.结果与讨论 散射结果的分子量偏差如图1所示。虚线描绘四个浓度测试绝对强度；实线是德拜图，与颗粒浓度对应的散射光强度KC/R有关。如图1所观察，绝对强度与浓度通常是线性关系。分子量可以由德拜图Y轴截距的倒数计算，如图1所示。 计算得到的分子量如表1所示。三个测试的分子量平均值是14.5 kDa，与已知的溶菌酶分子量（14.6 kDa）仅偏差-0.43 %，标准偏差是0.3 kDa（2.23 %）。 4.总结 通过Litesizer 500用静态光散射测试的溶菌酶分子量，具有杰出的准确性和重复性。 5.参考文献 [1] McKenzie, H.A., White, F.H., Adv. Protein Chem. 1991, 41, 173-315.D51IA006EN-A [2] Grisham, C.M., Garrett, R.H., Biochemistry, 2007, Australia: Thomson Brooks/Cole. pp. 467-469, ISBN 0-495-11912-1. [3] Debye, P., J. Appl. Phys. 1944, 15(4), 338-342. [4] Zimm, B.H., J. Chem. Phys. 1945, 13(4), 141-145. [5] Image by Yikrazuul [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], via Wikimedia Commons (accessed 12.6.15)