幼猪内脏组织中药物代谢检测方案(研磨机)

2-15 301医院研磨幼猪内脏组织测药物代谢 实验地点：中国人民解放军总医院(301医院) 试验样品：：2幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑6个部位的组织 实验目的：药物代谢测定分析 研磨步骤： 1、取出置于-20℃冰箱内的幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑组织样品略解冻，每个部位的样品各取2份为一组对照，切成小块后分别置于2ml离心管内，编号并放进冰盒中。 实验前样品准备 2、每次研磨将以对照组为单位进行。以脾脏研磨为例：将2份脾脏组织样品分别转移至2个鼎昊源 TL1000 小型组织研磨仪配套的5ml 硬质塑料研磨管中，每管各加入8mm不锈钢珠1颗，其中一管加入1ml磷酸盐组织液，另一管加入1ml醋酸铵组织液，盖好管盖，安装上机； 3、采用自动间歇研磨方法， 2000rpm，设置2个循环，每个循环60s，；，循环间隔10s，研磨完成后用吸管转移回之前对应编号的2ml离心管中； 4、由于各内脏组织样品的韧性不同，针对肝和脑组织的研磨，采用仅一次研磨90s 的方法，使研磨时间被缩短，但研磨效果仍然很好；针对心脏组织的研磨，采用了鼎昊源 TL1000 小型组织研磨仪配套的不锈钢研磨罐，使研磨更加匀细。 实验结果： A.磷酸盐组织液 心脏组织 肝脏组织 脾脏组织 肺脏组织 肾脏组织 脑组织 B.醋酸铵组织液 心脏组织 肝脏组织 脾脏组织 肺脏组织 肾脏组织 脑组织 小型猪肾脏中化合物A含量测定(试用鼎昊源科技组织匀浆仪2016.8.1) 肾脏样品的提取和纯化方法同前，本次实验考察两种组织提取缓冲液 NH4Ac缓冲 液和磷酸盐缓冲液对组织提取效率的影响。 0703#肾脏组织HPLC-MS/MS图谱： sample pig0703-spleen-NH4Ac提取 pig0703-spleen-磷酸盐提取 Compound in spleen(ng/g)627148.77806898.14 磷酸盐缓冲液对于肾脏组织中化合物A的提取效率高于NH4Ac缓冲液。 XIC of+MRM (3 pairs)：615.100/160.900 Da from Sample 89 (55) of 20160831.wiff (Turbo Spray) Max 1.1e4 cps. 1.19e4 1.15e4 1.10e4 3.51 1.05e4 1.00e4 9500.00 9000.00 8500.00 8000.00 7500.00 7000.00 86500.00 6000.00 g 5500.00 5000.00 4500.00 4000.00- 3500.00 3000.00 2500.00 2000.00 1500.00 1000.00 500.00 0.0 0.5 11.0 11.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 Time 8000.007500.007000.006500.006000.005500.005000.00-4500.004000.003500.003000.002500.002000.001500.001000.00500.004 NH4Ac缓冲液提取 磷酸盐缓冲液提取