肉制品中真菌毒素检测方案

深圳逗点生物技术有限公司-biocomma biotech co.，ltd.- 动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法 ( Silibase TM C18) 一、实验目的 本实验利用固相萃取法作为样品的前处理方法， LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的用量。 二、实验目标物 氯霉素(CAS：56-75-7)。 三、应用范围 本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。 四、参考标准 推荐性国家标准《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》。 五、实验材料 Biocomma° SilibaseMC18固相萃取柱1g/6mL。 六、实验方法 1、样品提取 将称取5g试样，精确到0.01g。置于50ml于涡旋具盖离心管中，加入5ml水，于涡旋混合器上快速混合1min，使试样完全溶解。准确加入15ml乙酸乙酯，在振荡器上振荡10min，以3000r/min离心10min， 准确吸取上层乙酸乙酯12ml转入15ml的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45℃吹扫蒸干，加入5ml水溶解，待净化。 2、SPE柱净化 (1)活化：依次采用5mL甲醇、5mL水活化C18固相萃取小柱。 (2)净化：将提取液过C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3ml水过柱，然后再用5ml乙腈+水淋洗柱，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10min。 (3)洗脱：用6ml乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10ml离心管中，于45℃用氮气吹干液吹干，用乙腈+水(2：8，体积比)定容至1ml，供LC-MS/MS上机测定。 3、LC-MS/MS条件 色谱柱： Venusil ASB C18(2.1x150mm， 5pm， 100A) 流动相：A：0.1mM乙酸铵溶液(0.1%甲酸))B：甲醇溶液 流速：0.2mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5uL 质谱仪： API 4000 离子源：电喷雾(ESI) 扫描模式：负离子 检测方式：多反应监测(MRM) 表1质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 30 lon Source Gas 1(GS 1) 50 lon Source Gas 2(GS2) 50 Ion Spray Voltage(IS) -4500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 表2氯霉素及内标的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 氯霉素 5.05 320.9/151.9 -60 -10 -25 -12 320.9/256.9 -60 -10 -25 -12 氯霉素-D5 5.04 326.1/157.0 -60 -10 -25 -12 七、实验结果 1、10ppb猪肉基质氯霉素添加回收结果 平均加标回收率在90%以上，平行样间标准偏差小于5%符合标准要求。 表3猪肉基质氯霉素添加回收结果 回收率(%) 名称 1 2 3 平均回收率(%) RSD(%) 氯霉素 98.31 96.28 90.61 95.07 4.20 2、空白样品添加氯霉素残留物色谱图 图1氯霉素及内标氯霉素-D5总离子流图 图2氯霉素(Cap)(320.9/151.9)色谱图 XIC of+MRM(4 pairs)：320.900/151.900 amu Expected RT：4.9 ID：CAP 1 from Sample 14 (cap-… Max.6.7e4 cps. 85841 6.0e4- 5.5e4· 5.0e4- .4.5e4 4.0e4· 3.5e4" 3.0e4. 三 2.5e4- 2.0e4 1.5e4- 1.0e4· 5000.0- 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 Tin 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 图3氯霉素-D5(Cap-D5)(326.1/157.0)色谱图 本号：CWW.Diocomma.cn